A multiplex real-time PCR (qPCR) me

A multiplex real-time PCR (qPCR) method to quantify aflatoxin, ochratoxin A (OTA) and patulin producing molds in foods was developed. For this, the primer pairs F/R-omt, F/R-npstr and F/R-idhtrb and the TaqMan probes, OMTprobe, NPSprobe and IDHprobe targeting the omt-1, otanpsPN and idh genes involved in aflatoxin, OTA and patulin biosynthesis, respectively, were used. The functionality of the developed qPCR method was demonstrated by the high linear relationship of the standard curves constructed with the omt-1, otanpsPN and idh gene copies and threshold cycle (Ct) values for the respective producing molds tested to quantify aflatoxin, OTA and patulin producing molds. The ability of the optimized qPCR protocol to quantify producing molds was evaluated in different artificially inoculated foods (fruits, nuts, cereals and dry-ripened meat and cheese products). Efficiency values ranged from 81 to 110% in all inoculated foods. The detection limit was between 3 and 1 log cfu/g for aflatoxin, OTA and patulin producing molds. The developed multiplex qPCR was shown be an appropriate tool for sensitive quantification of growth of toxigenic fungi in foods throughout the incubation time. Thus, the multiplex qPCR is a useful, rapid and efficient method to quantify simultaneously aflatoxin, OTA and patulin producing molds in food products.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิธีการ PCR (qPCR) แบบเรียลไทม์เพื่อกำหนดปริมาณ aflatoxin คครา A (OTA) และผลิตแม่พิมพ์ในอาหาร patulin multiplex ได้รับการพัฒนา นี้ มีใช้รองพื้นคู่ F/R-omt, F/R-npstr และ F/R-idhtrb และ TaqMan คลิปปาก ตะเข้ OMTprobe, NPSprobe และ IDHprobe omt-1 ยีน otanpsPN และ idh ที่เกี่ยวข้องกับการสังเคราะห์ aflatoxin, OTA และ patulin ตามลำดับ การกำหนดเป้าหมาย การทำงานของวิธีการพัฒนา qPCR ถูกแสดง ด้วยความสัมพันธ์เชิงเส้นสูงของเส้นโค้งมาตรฐานที่สร้างขึ้น ด้วย omt-1, otanpsPN และ idh ย่อย ๆ และขีดจำกัดรอบค่า (Ct) สำหรับการทดสอบวัดปริมาณ aflatoxin, OTA และ patulin ที่ผลิตแม่พิมพ์แม่พิมพ์ producing ตามลำดับ ความสามารถของโพรโทคอลให้เหมาะ qPCR วัดปริมาณ producing molds จึงถูกประเมินในต่างสมยอม inoculated อาหาร (ผลไม้ ถั่ว ธัญพืช และเนื้อสัตว์สุกแห้ง และผลิตภัณฑ์ชี) ค่าประสิทธิภาพอยู่ในช่วงจาก 81 110% ในอาหารทั้งหมด inoculated ตรวจสอบวงเงินระหว่าง 1 และ 3 ล็อก cfu/g aflatoxin, OTA และ patulin ที่ผลิตแม่พิมพ์ได้ QPCR multiplex พัฒนาที่แสดงจะเป็นเครื่องมือที่เหมาะสมสำหรับนับมีความสำคัญของการเติบโตของเชื้อรา toxigenic ในอาหารตลอดเวลาฟักตัว ดังนั้น multiplex qPCR เป็นวิธีวัดปริมาณพร้อม aflatoxin, OTA และ patulin ที่ผลิตแม่พิมพ์ในผลิตภัณฑ์อาหารมีประโยชน์ อย่างรวดเร็ว และมีประสิทธิภาพ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ทวีคูณแบบ real-time PCR (qPCR) วิธีการวัดปริมาณอะฟลาท็อกซิน, ochratoxin (OTA) และ patulin ผลิตแม่พิมพ์ในอาหารได้รับการพัฒนา สำหรับเรื่องนี้คู่ไพร F / R-OMT, F ​​/ R-npstr และ F / R-idhtrb และ probes TaqMan, OMTprobe, NPSprobe และ IDHprobe กำหนดเป้​​าหมาย OMT-1, otanpsPN และยีนที่เกี่ยวข้องในการ idh อะฟลาท็อกซิน, OTA และ patulin การสังเคราะห์ตามลำดับถูกนำมาใช้ การทำงานของการพัฒนาวิธีการ qPCR ได้รับการแสดงให้เห็นถึงความสัมพันธ์เชิงเส้นสูงของเส้นโค้งมาตรฐานสร้างด้วย OMT-1, otanpsPN และสำเนายีน idh และวงจรเกณฑ์ (กะรัต) ค่าสำหรับการผลิตแม่พิมพ์แต่ละการทดสอบเพื่อวัดปริมาณอะฟลาท็อกซิน, OTA และ patulin การผลิตแม่พิมพ์ ความสามารถในการเพิ่มประสิทธิภาพ qPCR โปรโตคอลปริมาณการผลิตแม่พิมพ์ได้รับการประเมินในที่แตกต่างกันอาหารเชื้อเทียม (ผลไม้, ถั่ว, ธัญพืชและเนื้อสัตว์สุกแห้งและผลิตภัณฑ์ชีส) ค่าประสิทธิภาพอยู่ในช่วง 81-110% ในอาหารเชื้อทั้งหมด ขีด จำกัด ของการตรวจสอบคือระหว่าง 3 และ 1 log CFU / กรัมอะฟลาท็อกซิน, OTA และ patulin การผลิตแม่พิมพ์ qPCR ทวีคูณพัฒนาก็แสดงให้เห็นว่าเป็นเครื่องมือที่เหมาะสมสำหรับปริมาณที่มีความสำคัญของการเจริญเติบโตของเชื้อรา toxigenic ในอาหารตลอดเวลาฟักตัว ดังนั้นทวีคูณ qPCR เป็นประโยชน์วิธีที่รวดเร็วและมีประสิทธิภาพในการวัดปริมาณอะฟลาท็อกซินในเวลาเดียวกัน, OTA และ patulin การผลิตแม่พิมพ์ในผลิตภัณฑ์อาหาร

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

multiplex PCR แบบเรียลไทม์ ( qpcr ) ปริมาณอะฟลาทอกซินคร่าทอกซิน , ( OTA ) และพาตูลินการผลิตแม่พิมพ์ในอาหารที่ได้รับ นี้ , ไพรเมอร์คู่ r-omt r-npstr F / F / F / r-idhtrb และ taqman probes omtprobe npsprobe , และ , idhprobe เป้าหมาย omt-1 otanpspn , IDH และยีนที่เกี่ยวข้องในวิถีการสังเคราะห์สาร โอตะ และพาตูลินตามลำดับ สถิติที่ใช้การทำงานของพัฒนา qpcr วิธีการแสดงให้เห็นโดยความสัมพันธ์เชิงเส้นสูงของเส้นโค้งมาตรฐาน สร้างด้วย omt-1 otanpspn IDH , และสำเนาของยีนและวงจร ( CT ) ค่าสำหรับแต่ละการผลิตแม่พิมพ์ทดสอบปริมาณอะฟลาทอกซิน โอตะ และพาตูลิน ผลิตแม่พิมพ์ความสามารถในการปรับ qpcr โปรโตคอลปริมาณการผลิตแม่พิมพ์ทดลองในที่แตกต่างกันเทียมเชื้ออาหาร ( ผลไม้ , ถั่ว , ธัญพืชและแห้งสุกเนื้อและเนยแข็งผลิตภัณฑ์ ) ค่าประสิทธิภาพค่า 81 ถึง 110 % ในพืชอาหาร มีขีดจำกัดอยู่ระหว่าง 3 และ 1 log CFU / g และอะฟลาทอกซิน โอตะพาตูลิน ผลิตแม่พิมพ์พัฒนาระบบมัลติเพล็กซ์ qpcr แสดงเป็นเครื่องมือที่เหมาะสมสำหรับการเจริญเติบโตของปริมาณไว toxigenic เชื้อราในอาหารตลอดระยะเวลา . ดังนั้น qpcr multiplex เป็นประโยชน์ที่รวดเร็วและมีประสิทธิภาพวิธีการวัดปริมาณพร้อมกันและอะฟลาทอกซิน โอตะพาตูลินการผลิตเชื้อราในผลิตภัณฑ์อาหาร