4.1.1. Sample preparationFor time-l

4.1.1. Sample preparation
For time-lapse microscopy, the cells (2–5  103 cells per chamber)
are seeded two days before analysis in an eight-chambered
cover glass (Lab-Tek Chambered #1.0 Borosilicate Cover glass
System, Nunc.) to allow the cells to attach to the bottom and
become flattened so that a better morphological profile can be obtained.
Then cell death is induced. Immediately after adding the
cell death stimulus, place the chambered cover glass in the timelapse
microscope. The cells are imaged using 3D (x, y and z)
time-lapse microscopy with DIC optics. To monitor morphological
changes and membrane permeability in parallel, PI is added to a
final concentration of 3 lM together with the cell death stimulus.
Three-dimensional time-lapse microscopy is performed using a
combination of DIC and epifluorescence optics. The amount of light
to which the cells are exposed should be optimized for each cell
type and for each fluorescent probe in order to reduce phototoxicity
and photobleaching, so that cell death under control conditions
without stimuli is minimized. This means short exposure time, low
lamp voltage, a small number of z-sections and time frames, and
binning of pixels on the CCD camera. Binning allows charges from
adjacent pixels to be combined, which allows shorter exposure
times. The advantage of this technique is that shorter exposure
times are needed because sensitivity increases with the binning
factor, which translates into reduced phototoxicity, but at the expense
of reduced spatial resolution.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

4.1.1. ตัวอย่างสำหรับการหน่วงเวลา microscopy เซลล์ (เซลล์ 2 – 5 103 ต่อหอการค้า)มี seeded สองวันก่อนที่จะวิเคราะห์ในการแปด-chamberedฝาครอบแก้ว (ห้องปฏิบัติการ-Tek Chambered #1.0 Borosilicate ฝาแก้วระบบ Nunc) ให้เซลล์ต้องการแนบไปด้านล่าง และเป็น flattened เพื่อให้ประวัติของดีได้แล้วเกิดเซลล์ตาย ทันทีหลังจากการเพิ่มการเซลล์ตายกระตุ้น ทำฝาแก้ว chambered ใน timelapse การกล้องจุลทรรศน์ เซลล์ที่ imaged ใช้ 3D (x, y และ z)microscopy การหน่วงเวลา ด้วยเครื่องแก้ไขภาพกล้องดิ๊กส การตรวจสอบของเปลี่ยนแปลงและเยื่อ permeability ขนาน PI เพิ่มเป็นความเข้มข้นสุดท้ายของ 3 lM กับเซลล์ที่ตายกระตุ้นการMicroscopy การหน่วงเวลาแบบสามมิติจะทำได้โดยใช้การชุดของเลนส์ดิ๊กสและ epifluorescence ยอดแสงการที่เซลล์ที่มีสัมผัสควรปรับให้เหมาะสำหรับแต่ละเซลล์ชนิดและ สำหรับแต่ละโพรบเรืองแสงยก phototoxicityและ photobleaching ดังนั้นที่เซลล์ตายภายใต้เงื่อนไขที่ควบคุมไม่ มีสิ่งเร้าถูกย่อเล็กสุด หมายถึง เวลาเปิดรับแสงสั้น ต่ำแรงดันไฟ จำนวนเฟรมเวลา และ z ส่วนขนาดเล็ก และbinning พิกเซลกล้อง CCD Binning ให้ค่าธรรมเนียมพิกเซลติดกันให้รวม ซึ่งช่วยให้การเปิดรับแสงสั้นครั้ง ข้อดีของเทคนิคนี้คือ แสงที่สั้นกว่าเวลามีความจำเป็นเนื่องจากความไวเพิ่มขึ้นกับการ binningปัจจัย ซึ่งแปล เป็น phototoxicity ลดลง แต่ ที่ค่าใช้จ่ายของการแก้ปัญหาพื้นที่ลดลง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

4.1.1 การเตรียมตัวอย่าง
สำหรับกล้องจุลทรรศน์ไทม์, เซลล์ (2-5? 103 เซลล์ต่อห้อง)
จะเมล็ดสองวันก่อนการวิเคราะห์ในแปดลำ
ฝาครอบแก้ว (Lab-Tek? Chambered # 1.0 Borosilicate ฝาครอบกระจก
ระบบตอนนี้.) เพื่อ ทำให้เซลล์ที่จะแนบไปด้านล่างและ
กลายเป็นแบนเพื่อให้รายละเอียดทางสัณฐานวิทยาที่ดีขึ้นสามารถรับได้.
จากนั้นเซลล์ตายจะถูกเหนี่ยวนำ ทันทีหลังจากที่การเพิ่ม
การกระตุ้นการตายของเซลล์วางกระจกฝาครอบลำใน timelapse
กล้องจุลทรรศน์ เซลล์จะถูกถ่ายภาพโดยใช้ 3D (x, y, z)
กล้องจุลทรรศน์ไทม์กับเลนส์ DIC ในการตรวจสอบลักษณะทางสัณฐานวิทยา
การเปลี่ยนแปลงและการซึมผ่านเยื่อหุ้มเซลล์ในแบบคู่ขนาน PI จะถูกเพิ่ม
ความเข้มข้นสุดท้ายของ 3 LM ร่วมกับการกระตุ้นการตายของเซลล์.
กล้องจุลทรรศน์ไทม์สามมิติจะดำเนินการโดยใช้
การรวมกันของ DIC และเลนส์ epifluorescence ปริมาณของแสง
ที่เซลล์มีการเปิดรับควรได้รับการปรับให้เหมาะสมกับแต่ละเซลล์
ชนิดและแต่ละหัววัดเรืองแสงเพื่อลด phototoxicity
และ photobleaching เพื่อให้การตายของเซลล์ภายใต้เงื่อนไขที่ควบคุม
โดยไม่มีสิ่งเร้าที่จะลดลง ซึ่งหมายความว่าเวลารับแสงสั้นต่ำ
แรงดันไฟฟ้าหลอดไฟขนาดเล็กจำนวนมากส่วน Z-และกรอบเวลาและ
binning ของพิกเซลบนกล้อง CCD Binning ช่วยให้ค่าใช้จ่ายจาก
พิกเซลที่อยู่ติดกับนำมารวมกันซึ่งจะช่วยให้การสัมผัสที่สั้นกว่า
ครั้ง ประโยชน์ของเทคนิคนี้คือการเปิดรับแสงที่สั้นกว่า
ครั้งมีความจำเป็นเพราะความไวเพิ่มขึ้นกับ binning
ปัจจัยซึ่งแปลเป็น phototoxicity ลดลง แต่ค่าใช้จ่าย
ของความละเอียดเชิงพื้นที่ลดลง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

4.1.1 . ตัวอย่างการเตรียม
ปไทม์ , เซลล์ ( 2 – 5  103 เซลล์ต่อห้อง )
เป็นเมล็ดสองวันก่อนการวิเคราะห์ในแปดที่ดัดแปลงให้ใช้
ครอบแก้ว ( ห้องปฏิบัติการเทค  ดัดแปลงให้ใช้#สำหรับครอบแก้ว borosilicate
ระบบขณะนี้ ) เพื่อช่วยให้เซลล์ที่จะแนบไปที่ด้านล่างและ
กลายเป็นแบนดังนั้น โปรไฟล์ของดีขึ้นได้ .
แล้วเซลล์ตายเกิดทันทีหลังจากเพิ่ม
การตายของเซลล์กระตุ้น ที่ดัดแปลงให้ใช้ครอบแก้วในสอบถาม
กล้องจุลทรรศน์ เซลล์อื่นๆ โดยใช้ 3 มิติ ( x , y และ z )
ล่วงเลยเวลาใช้กับเลนส์ DIC . เพื่อตรวจสอบการเปลี่ยนแปลงทางสัณฐานวิทยาและการซึมผ่านเมมเบรน
ขนานดจะถูกเพิ่มเพื่อ
สุดท้ายความเข้มข้น 3 อิมพร้อมกับการตายของเซลล์กระตุ้น .
กล้องจุลทรรศน์สามมิติไทม์จะดําเนินการโดยใช้การรวมกันของ DIC และ epifluorescence
ทัศนศาสตร์ ปริมาณแสง
ที่เซลล์สัมผัสควรจะเหมาะสำหรับแต่ละประเภทและแต่ละเซลล์
เรืองแสงโพรบเพื่อลดและ phototoxicity
photobleaching ดังนั้นการตายของเซลล์ภายใต้การควบคุมสภาวะ
โดยไม่ต้องกระตุ้นน้อยที่สุด นี้หมายความว่า เวลาเปิดรับแสงสั้นต่ำ
โคมไฟแรงดัน จำนวนเล็ก ๆของ z-sections และกรอบเวลาและ
บินนิ่งของพิกเซลบน CCD กล้อง . บินนิ่งช่วยค่าใช้จ่ายจาก
พิกเซลที่อยู่ติดกันรวมซึ่งช่วยให้สั้นกว่าแสง
ครั้ง ข้อดีของเทคนิคนี้คือการที่สั้นกว่าแสง
ครั้งเป็นเพราะความไวเพิ่มขึ้น ด้วยการบินนิ่ง
ปัจจัยซึ่งแปลเป็น phototoxicity ลดลง แต่ค่าใช้จ่าย
การลดความละเอียด