DNA hybridization
Labeled DNA was dissolved in 50 μl hybridization buffer (40%
formamide, 25% SSC, 5 μg of unlabeled herring sperm DNA [Promega,
Madison, WI], and 0.1% SDS) and 2 μl universal standard DNA
(0.2 pmol μl
−1
) labeled with fluorescent dye Cy5. The samples were
then mixed by vortexing, incubated at 95 °C for 5 min, and maintained
at 50 °C until hybridization. Microarrays were scanned by a NimbleGen
MS 200 Microarray Scanner (Roche NimbleGen, Madison, WI) for
approximately 16 h at 42 °C. Then scanned images were quantified by
NimbleScan software as previously described [6].
ดีเอ็นเอ
ที่ติดป้ายดีเอ็นเอถูกกลืนหายไปใน 50 บัฟเฟอร์ไฮบริไมโครลิตร (40%
ไมด์, เอสเอส 25%, 5 ไมโครกรัมของดีเอ็นเอสเปิร์มที่ไม่มีป้ายกำกับแฮร์ริ่ง [Promega,
Madison, WI] และ 0.1% SDS) และ 2 ไมโครลิตรดีเอ็นเอมาตรฐานสากล
(0.2 pmol ไมโครลิตร
-1
) ป้ายเรืองแสงสีย้อม Cy5 ตัวอย่างที่ถูก
ผสมแล้วโดย vortexing, บ่มที่อุณหภูมิ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีและการบำรุงรักษา
ที่ 50 องศาเซลเซียสจนการผสมข้ามพันธุ์ microarrays ถูกสแกนโดย NimbleGen
MS 200 Microarray เครื่องสแกนเนอร์ (Roche NimbleGen, Madison, WI) สำหรับ
ประมาณ 16 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 42 ° C จากนั้นภาพที่สแกนถูกวัดโดย
ซอฟต์แวร์ NimbleScan ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [6]
การแปล กรุณารอสักครู่..