I've seen some people use either -2

I've seen some people use either -20oC ethanol or methanol for cell fixation for imaging. Just wondering if there is any particular difference in using either?

I'm currently using -20oC methanol for fixation.
-xtrios-
Hi!

If you only stain cells, I guess there is no difference.

I usually use Methanol for fixation, but I was told that if you stain some filters, e.g. PCF filters Ethanol is recommended. Why it is better to use Ethanol then I don't know... Maybe there is interaction between the surface of the filter and the Methanol...?

In other cases it doesn't matter (until now wink.gif ).
-Chakchel-
some fixations methods might preserve the cell morphology better. So one has to try different ones if one is not satisfied with a particular fixative.
-scolix-
"There are always many ways to skin a cat"

YOU SHOULD ALWAYS OPTIMISE YOUR CONDITIONS


I look after a Leica SP1 Confocal and have end users coming to me with cells that they have stained. I ask every user if they have optimised their conditions and they look blankly at me.

The fixation protocols could include :-

1,2,3,4 % Ethanol for 5,10,20,30,60 minutes
1,2,3,4 % Methanol for 5,10,20,30,60 minutes
1,2,3,4 % Glutaraldehyde for the same times as above
1,2,3,4 % Paraformaldehyde for the above times


And there are other fixatives, blocking steps and other variables such as primary and secondary antibodies.
-Rhombus-
I have tried everything, but recently went with a 4% paraformaldehyde-0.25% Triton X-100 for 15 mins at room temp. We do a lot of immunoflouresence

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ผมเคยเห็นบางคนใช้ - 20oC เอทานอลหรือเมทานอลสำหรับปฏิกิริยาการตรึงเซลล์สำหรับภาพ เพียงแค่สงสัยว่า ถ้า มีความแตกต่างเฉพาะในการใช้หรือไม่ ฉันกำลังใช้ - 20oC เมทานอลสำหรับเบี-xtrios-สวัสดีถ้าคุณติดเซลล์เท่านั้น ผมคิดว่า ไม่แตกต่างฉันมักจะใช้เมทานอลสำหรับเบี แต่ที่บอกว่า ถ้าคุณติดตัวกรองบางตัว เช่นกรอง PCF เอทานอลแนะนำ ทำไมการใช้เอทานอล แล้วอย่า... อาจมีการโต้ตอบระหว่างพื้นผิวของตัวกรองและเมทานอล...ในกรณีอื่นๆ มันไม่ได้เรื่อง (จนถึงตอนนี้ wink.gif)-Chakchel-บางวิธี fixations อาจรักษาสัณฐานวิทยาของเซลล์ดีขึ้น ดังนั้นหนึ่งได้ไปลองอื่นถ้าหนึ่งไม่พอใจ ด้วยการตรึงโดยเฉพาะ-scolix-"มีเสมอหลายวิธีเพื่อผิวแมว"คุณควรจะเพิ่มประสิทธิภาพของเงื่อนไขของคุณผมดูหลังจากไล SP1 Confocal และมีผู้มาให้ฉันกับเซลล์ที่จะมีสี ผมขอให้ผู้ใช้ทุกคนถ้า มีเหมาะงานกราฟฟิกของเงื่อนไขของพวกเขา และพวกเขามอง blankly ที่ฉันโพรโทคอลที่เบีอาจรวมถึง: -1,2,3,4% เอทานอล 5,10,20,30,60 นาที1,2,3,4% เมทานอล 5,10,20,30,60 นาที1,2,3,4% glutaraldehyde ในเดียวกันเวลาดังกล่าว1,2,3,4% paraformaldehyde เวลาข้างต้นและมี fixatives อื่น ๆ บล็อกขั้นตอนและตัวแปรอื่น ๆ เช่นแอนตี้หลัก และรอง-บัส-ฉันได้พยายามทุกอย่าง แต่ล่าสุด ไปกับการ paraformaldehyde-0.25% 4% ไตรตั้น X-100 สำหรับ 15 นาทีที่อุณหภูมิห้อง เราทำของ immunoflouresence

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ผมเคยเห็นบางคนใช้เอทานอลเมทานอล -20 หรือการตรึงเซลล์สำหรับการถ่ายภาพ เพียงแค่สงสัยว่าถ้ามีความแตกต่างใด ๆ โดยเฉพาะอย่างยิ่งในการใช้อย่างใดอย่างหนึ่ง? คือฉันกำลังใช้-20 เมทานอลในการตรึง. -xtrios- Hi! ถ้าคุณเพียงเซลล์คราบผมคิดว่ามีความแตกต่างไม่. ฉันมักจะใช้เมทานอลในการตรึง แต่ฉัน มีคนบอกว่าถ้าคุณเปื้อนตัวกรองบางเช่น PCF กรองเอทานอลจะแนะนำ ทำไมมันจึงดีกว่าการใช้เอทานอลจากนั้นผมไม่ทราบว่า ... อาจจะมีปฏิสัมพันธ์ระหว่างพื้นผิวของตัวกรองและเมทานอล ... ? ในกรณีอื่น ๆ มันไม่สำคัญ (จนถึงขณะนี้ wink.gif). - Chakchel- วิธีการยึดติดบางคนอาจจะรักษาลักษณะทางสัณฐานวิทยาของเซลล์ที่ดีกว่า ดังนั้นหนึ่งที่มีการพยายามที่แตกต่างกันถ้าคนหนึ่งไม่พอใจกับการตรึงโดยเฉพาะอย่างยิ่ง. -scolix- "มีหลายวิธีที่จะผิวแมว" คุณควรเพิ่มประสิทธิภาพเงื่อนไขของคุณผมมองหลังจาก Leica SP1 Confocal และมีผู้ใช้ที่จะมาถึง ฉันกับเซลล์ที่พวกเขาได้สี ผมขอให้ผู้ใช้ทุกคนถ้าพวกเขาได้ปรับเงื่อนไขของพวกเขาและพวกเขาดู blankly ที่ผม. โปรโตคอลตรึงอาจรวมถึง: - 1,2,3,4% เอทานอลสำหรับ 5,10,20,30,60 นาที1,2,3 4% เมทานอลสำหรับ 5,10,20,30,60 นาที1,2,3,4% Glutaraldehyde สำหรับเวลาเดียวกับข้างต้น1,2,3,4% paraformaldehyde สำหรับเวลาดังกล่าวข้างต้นและมีfixatives อื่น ๆ ขั้นตอนการปิดกั้น และตัวแปรอื่น ๆ เช่นแอนติบอดีประถมศึกษาและมัธยมศึกษา. -Rhombus- ฉันได้พยายามทุกอย่าง แต่เมื่อเร็ว ๆ นี้ไปกับ 4% paraformaldehyde-0.25% Triton X-100 เป็นเวลา 15 นาทีที่อุณหภูมิห้อง เราทำมาก immunoflouresence

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ผมเคยเห็นบางคนใช้ - 20oc เอทานอลหรือเมทานอลสำหรับการตรึงเซลล์สำหรับถ่ายภาพ แค่สงสัยว่ามีความแตกต่างใด ๆ โดยเฉพาะในการใช้ด้วย

ตอนนี้ผมใช้ - 20oc เมทานอลสำหรับการตรึง .
-
xtrios - ไฮ !

ถ้าคุณเพียงคราบเซลล์ ผมเดาว่าไม่มีความแตกต่าง

ผมมักจะใช้เมทานอลสำหรับการตรึง แต่ ฉัน บอก ว่า ถ้าคุณคราบ บางตัว เช่นเอทานอลพรรคคอมมิวนิสต์ฝรั่งเศสกรอง แนะนํา ทำไมมันเป็นดีกว่าการใช้เอทานอลแล้วไม่รู้ . . . . . . . อาจจะมีปฏิสัมพันธ์ระหว่างพื้นผิวของตัวกรองและอล . . . . . . . ?

ในกรณีอื่น ๆมันไม่สำคัญ ( จนถึงตอนนี้ wink.gif )
- -
chakchel ไหลเกี่ยวกับเวทมนต์บ้างบางวิธีอาจจะรักษารูปร่างของเซลล์ดีขึ้น ดังนั้นหนึ่งจะต้องพยายามที่แตกต่างกันหากไม่พอใจกับ
ฟิกเซทีฟโดยเฉพาะ- scolix -
" มีหลายวิธีที่จะผิวแมว "

คุณควรเพิ่มประสิทธิภาพของคุณภาพ


ผมดูหลังจาก Leica SP1 ด้วยและมีผู้ใช้มาฉันกับเซลล์ที่พวกเขามีลักษณะ ฉันถามผู้ใช้ทุกคน ถ้าพวกเขามีการปรับปรุงเงื่อนไขของพวกเขาและพวกเขามองอย่างเมินเฉยใส่ฉัน

การตรึงโปรโตคอลอาจรวมถึง : --

1 , 2 , 3 , 4 % เอทานอลสำหรับ 5,10,20,30,60 นาที
1 , 2 , 3 , 4 % เมทานอลสำหรับ 5 , 10 ,20,30,60 นาที
1 , 2 , 3 , 4 % glutaraldehyde ในเวลาเดียวกับพาราฟอร์มาลดิไฮด์ 1 , 2 , 3 , 4 % ขึ้นไป สำหรับ



ข้างบน และมีเวลา fixatives อื่น ๆ , บล็อกขั้นตอนและตัวแปรอื่น ๆเช่น ประถมศึกษา และมัธยมศึกษา แอนติบอดี .
- คลุกคลี -
ฉันได้พยายามทุกอย่าง แต่เพิ่งได้ไปกับ paraformaldehyde-0.25 4 % Triton X-100 15 นาที ที่อุณหภูมิห้อง เราทำหลาย immunoflouresence