Aggregation assays. S. pyogenes MGA

Aggregation assays. S. pyogenes MGAS6180 was initially grown in C medium for 16 h (Lyon et al., 1998) and harvested by centrifugation at 5000 g for 10 min. Bacterial cell pellets were resuspended in either 1 ml C medium or an appropriate concentration of manuka honey (5 and 10 %; w/v) dissolved in C medium and the OD600 of the culture was adjusted to 1.0 (±0.05) if necessary. In both cases, manuka honey at twice the desired concentration was dissolved in double strength TH and diluted to the required concentration using TH; cell pellets were resuspended in either 5 or 10 % (w/v) honey solutions. In an untreated control, manuka honey was replaced with PBS added to maintain the appropriate volume and concentration of TH media. Aggregation assays were carried out in triplicate as described previously (Jakubovics et al., 2005). Briefly, cell suspensions were incubated statically at 37 uC in 1.5 ml semimicrocuvettes and OD600 readings were taken at 30 min intervals over a period of 6 h to monitor the extent of bacterial aggregation. Bacterial aggregation was monitored by observing a reduction on the OD600 over 6 h. Controls containing no manuka honey were analysed simultaneously. Aggregation was expressed as a percentage fall in OD600 relative to the control; triplicate biological samples were assayed and statistical analysis (Students t-test to compare 5 and 10 % honey treatment, individually, to the no honey control) was undertaken using Minitab (version 14).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

รวม assays S. pyogenes MGAS6180 เริ่มต้นปานกลาง C h 16 (ลียงและ al., 1998) การเติบโต และเก็บเกี่ยว โดย centrifugation ที่ 5000 g สำหรับ 10 นาทีเซลล์แบคทีเรียขี้ถูก resuspended ใน 1 ml C ปานกลางหรือมีความเข้มข้นที่เหมาะสมของน้ำผึ้งมานูก้า (5 และ 10%, w/v) ละลายในกลาง C และ OD600 ของวัฒนธรรมถูกปรับปรุง 1.0 (± 0.05) ถ้าจำเป็น ในทั้งสองกรณี น้ำผึ้งมานูก้าที่สองระบุความเข้มข้นละลายในความแข็งแกร่งคู่ TH และผสมกับความเข้มข้นต้องใช้ TH เซลล์ขี้ถูก resuspended ใน 5 หรือน้ำผึ้ง 10% (w/v) โซลูชั่น ในตัวควบคุมไม่ถูกรักษา น้ำผึ้งมานูก้าถูกแทนที่ ด้วย PBS เพิ่มเพื่อรักษาระดับเสียงที่เหมาะสมและความเข้มข้นของสื่อ TH รวม assays ถูกดำเนินใน triplicate อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Jakubovics et al., 2005) สั้น ๆ บริการเซลล์ถูก incubated ฟิกแบบคงที่ uC 37 ใน semimicrocuvettes 1.5 ml และอ่าน OD600 ที่ถ่ายในช่วงเวลา 30 นาทีระยะ 6 h การตรวจสอบขอบเขตของการรวมกลุ่มแบคทีเรีย รวมแบคทีเรียถูกตรวจสอบ โดยการสังเกตการลดใน OD600 กว่า 6 h. ควบคุมประกอบด้วยน้ำผึ้งมานูก้าไม่ได้ analysed กัน รวมได้แสดงที่อยู่เปอร์เซ็นต์ OD600 สัมพันธ์ควบคุม ตัวอย่างชีวภาพ triplicate ถูก assayed และวิเคราะห์ทางสถิติ (นักเรียน t-ทดสอบการเปรียบเทียบ 5 และ 10% น้ำผึ้งบำบัด แยก ควบคุมน้ำผึ้งไม่) ถูกดำเนินการโดยใช้ปัจจัย (รุ่น 14)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การตรวจการรวม S. pyogenes MGAS6180 ปลูกครั้งแรกในกลางเซลเซียสเป็นเวลา 16 ชั่วโมง (ลียง et al., 1998) และการเก็บเกี่ยวโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 5,000 กรัมเป็นเวลา 10 นาที เม็ดเซลล์ของแบคทีเรียถูก resuspended ทั้งใน 1 มิลลิลิตรขนาดกลาง C หรือความเข้มข้นที่เหมาะสมของน้ำผึ้ง (5 และ 10% w / v) ละลายในกลาง C และ OD600 ของวัฒนธรรมปรับ 1.0 (± 0.05) ในกรณีที่จำเป็น ในทั้งสองกรณีน้ำผึ้งที่สองเท่าของความเข้มข้นที่ต้องการก็เลือนหายไปในความแข็งแรงคู่ TH และเจือจางความเข้มข้นของใช้ที่จำเป็น TH; เม็ดเซลล์ถูก resuspended ทั้งใน 5 หรือ 10% (w / v) โซลูชั่นน้ำผึ้ง ในการควบคุมได้รับการรักษาน้ำผึ้งถูกแทนที่ด้วยพีบีเอสเพิ่มในการรักษาปริมาณและความเข้มข้นที่เหมาะสมของสื่อ TH การตรวจการรวมได้ดำเนินการเพิ่มขึ้นสามเท่าในขณะที่อธิบายไว้ก่อนหน้า (Jakubovics et al., 2005) สั้น ๆ , แขวนลอยเซลล์ถูกบ่มแบบคงที่ที่ 37 UC 1.5 มล. semimicrocuvettes และ OD600 อ่านถูกนำวันที่ 30 ช่วงเวลานาทีในช่วง 6 ชั่วโมงในการตรวจสอบขอบเขตของการรวมแบคทีเรีย การรวมตัวของเชื้อแบคทีเรียได้รับการตรวจสอบโดยการสังเกตการลด OD600 ที่กว่า 6 ชั่วโมง การควบคุมที่มีน้ำผึ้งไม่ได้วิเคราะห์ไปพร้อม ๆ กัน รวมได้รับการแสดงเป็นฤดูใบไม้ร่วงในอัตราร้อยละญาติ OD600 เพื่อควบคุม; เพิ่มขึ้นสามเท่าตัวอย่างทางชีวภาพถูก assayed และการวิเคราะห์ทางสถิติ (นักเรียน t-test เพื่อเปรียบเทียบ 5 และการรักษาน้ำผึ้ง 10% เป็นรายบุคคลที่จะไม่มีการควบคุมน้ำผึ้ง) ได้ดำเนินการโดยใช้ Minitab (รุ่น 14)