2.5. Pectin extraction and analysis

2.5. Pectin extraction and analysis
2.5.1. Cell wall preparation and pectin extraction
Cell wall materials (before treatment, day 1, 7, 13) were extrac-ted according to method described by with slight
modification. Samples (10 g) were ground and boiled in 200 mlethanol (80%, v/v) for 20 min. After cooled to room temperature,samples were filtered and the extraction process was repeated twomore times. Residue was incubated in 50 ml mixture of dimethyl sulphoxide (DMSO) and water (9:1, v/v) at 4?C overnight. Then the
residue was dipped in 200 ml mixture of chloroform and ethanol (2:1, v/v) for 10 min and washed with acetone until total whitening.
The residue was collected as cell wall materials.
Distilled water (10 ml) was added into cell wall materials and
agitated for 4 h at 25?C for WSP extraction. Supernatant was
collected after centrifugation at 10,000 g 4?C for 10 min. The above
process was repeated twice before addition of 10 ml 50 mM CDTA
(SigmaeAldrich) for CSP extraction. After the extraction process
was repeated twice more, supernatants were combined together
and collected as CSP. SSP was obtained by further extraction of the
residue with 10 ml 50 mM sodium carbonate (SigmaeAldrich)

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5. เพกทินสกัดและวิเคราะห์2.5.1. ผนังเซลล์สกัดเพกทินและเตรียมวัสดุผนังเซลล์ (ก่อนบำบัด วันที่ 1, 7, 13) มีเท็ด extrac ตามวิธีที่อธิบาย ด้วยเล็กน้อยปรับเปลี่ยน ตัวอย่าง (10 กรัม) มีพื้น และต้มใน 200 mlethanol (80%, v/v) ใน 20 นาที หลังจากระบายความร้อนด้วยอุณหภูมิห้อง มีกรองตัวอย่าง และการสกัด ซ้ำ twomore ครั้งนั้น สารตกค้างถูก incubated ส่วนผสม 50 ml ของ dimethyl sulphoxide (DMSO) และน้ำ (9:1, v/v) ที่ 4 C ค้างคืน นั้นสารตกค้างถูกจุ่มลงในส่วนผสม 200 ml ของคลอโรฟอร์มและเอทานอล (2:1, v/v) ใน 10 นาที และล้าง ด้วยอะซิโตนจนขาวทั้งหมดสารตกค้างถูกรวบรวมเป็นวัสดุผนังเซลล์น้ำกลั่น (10 ml) ถูกเพิ่มเข้าไปในวัสดุผนังเซลล์ และนั้นกระตุ้นทำสำหรับ h 4 ที่ 25 C สำหรับสกัด WSP Supernatant ถูกรวบรวมหลังจาก centrifugation ที่ 10000 g 4 C สำหรับ 10 นาที ข้างต้นกระบวนการถูกซ้ำสองครั้งก่อนนี้ 10 ml 50 มม. CDTA(SigmaeAldrich) สำหรับ CSP สกัด หลังจากกระบวนการแยกมีซ้ำสองขึ้น supernatants ถูกรวมเข้าด้วยกันและรวบรวมเป็น CSP SSP กล่าว โดยการสกัดสารตกค้างกับ 10 ml 50 mM โซเดียมคาร์บอเนต (SigmaeAldrich)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5 การสกัดเพคตินและการวิเคราะห์
2.5.1 เตรียมผนังเซลล์และการสกัดเพคตินวัสดุผนังเซลล์ (ก่อนการรักษาวันที่ 1, 7, 13) ได้สกัด-ted ตามวิธีการอธิบายโดยเล็กน้อยกับการปรับเปลี่ยน ตัวอย่าง (10 กรัม) เป็นพื้นดินและต้มใน 200 mlethanol (80% v / v) เป็นเวลา 20 นาที หลังจากที่ระบายความร้อนที่อุณหภูมิห้องตัวอย่างได้รับการกรองและกระบวนการสกัดซ้ำครั้ง twomore ที่เหลือถูกบ่มใน 50 มลส่วนผสมของไดเมทิล sulphoxide (DMSO) และน้ำ (9: 1, v / v) ที่ 4 C ในชั่วข้ามคืน? จากนั้นที่เหลือได้รับการจุ่มลงใน 200 มลส่วนผสมของคลอโรฟอร์มและเอทานอล (2: 1, v / v). เป็นเวลา 10 นาทีและล้างด้วยอะซิโตนจนกว่าไวท์เทนนิ่งรวม. ที่เหลือเก็บเป็นวัสดุผนังเซลล์น้ำกลั่น (10 มล.) ถูกเพิ่มเข้ามา เข้าวัสดุผนังเซลล์และตื่นเต้น4 ชั่วโมงที่ 25 องศาเซลเซียสในการสกัด WSP ใสได้รับภายหลังการหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 กรัม 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที ดังกล่าวข้างต้นกระบวนการซ้ำสองครั้งก่อนที่นอกเหนือจาก 10 มล. 50 มิลลิ CDTA (SigmaeAldrich) สำหรับการสกัด CSP หลังจากขั้นตอนการสกัดซ้ำอีกครั้ง, supernatants ถูกรวมเข้าด้วยกันและเก็บเป็นซีเอสพี เอสเอสที่ได้รับจากการสกัดต่อไปของสารตกค้างที่มี 10 มล. 50 มิลลิโซเดียมคาร์บอเนต (SigmaeAldrich)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.5 การสกัดเพคติน และการวิเคราะห์
ดาวน์โหลด . การเตรียมผนังเซลล์และเพคตินสกัด
เซลล์ผนังวัสดุ ( ก่อนการรักษา วันที่ 1 , 7 , 13 ) ถูกสกัด เท็ด ตามวิธีที่อธิบายไว้โดยมีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย

ตัวอย่าง ( 10 กรัม ) เป็นดิน และต้มใน 200 mlethanol ( 80 % v / v ) 20 นาที หลังจากเย็นที่อุณหภูมิห้องตัวอย่างกรองและกระบวนการสกัดซ้ำ twomore ครั้ง ตกค้างใน 50 มล. บ่มส่วนผสมของไดเมทิล sulphoxide ( DMSO ) และน้ำ ( 9 : 1 v / v ) ที่ 4 C ในชั่วข้ามคืน จากนั้น
กากถูกจุ่มลงในส่วนผสมของคลอโรฟอร์มและเอทานอล 200 ml ( 2 : 1 v / v ) เป็นเวลา 10 นาที และล้างด้วยอะซิโตนจนขาวทั้งหมด
ตกค้างรวบรวมเป็นวัสดุผนังเซลล์ .
น้ำกลั่น ( 10 ml ) ถูกเพิ่มลงในเซลล์และผนังวัสดุ
ปั่นป่วน 4 H 25 ? องศาเซลเซียสสำหรับการสกัด WSP . น่านคือ
เก็บหลังการปั่นเหวี่ยงที่ 10 , 000 G 4 C 10 นาทีขั้นตอนข้างต้น
ทำซ้ำสองครั้งก่อนที่จะเพิ่ม 10 มล. 50 mm cdta
( sigmaealdrich ) สำหรับการสกัด CSP . หลังจากกระบวนการทำซ้ำสองครั้งมากขึ้น

supernatants ถูกรวมเข้าด้วยกัน ,และการรวบรวมเป็น CSP . ตรวจได้จากการสกัดเพิ่มเติมของ
กากกับโซเดียมคาร์บอเนต 50 มม. 10 ml ( sigmaealdrich )