& Var, 2008; Pierides, El-Nezami, P

& Var, 2008; Pierides, El-Nezami, Peltonem, Salminen, & Ahokas,
2000). There is no previous report on the use of S. cerevisiae for
decontamination of milk containing AFM1. Therefore, the aim of the
present study was to evaluate the ability of a S. cerevisiae strain,
alone or in combination with a pool of three commercially available
LAB strains, to bind AFM1 in UHT (ultra-high-temperature) skim
milk spiked with 0.5 mg AFM1 L
1
, during contact times of 30 min
and 60 min.
2. Material and methods
2.1. S. cerevisiae and LAB strains
Commercially available dry lager yeast strain (S. cerevisiae,
SAFLAGER W37/70, Fermentis Ltd., France) and three LAB strains
(Lactobacillus delbrueckii spp. bulgaricus LB340, Lactobacillus rhamnosus
HOWARU and Bifidobacterium lactis FLORA-FIT BI07 donated
by Danisco Ltd., Brazil) were used in the experiment. LAB strains
have been previously evaluated and showed individual percentages
of AFM1 removal in UHT milk at 37 C ranging from 24.5 to 33.5%
(Bovo et al., 2012).
The lyophilized yeasts were reactivated in sterile water and
cultivated at 23 C, according to recommendations of Fermentis Ltd.
The number of yeast cells in the suspension was determined by light
microscopy using a modified Neubauer chamber. The suspension
was diluted with sterile water until reaching a cell concentration of
1.0  109 cells mL
1
.
Individual LAB lyophilized strains were reactivated in MRS (de
Man, Rogosa and Sharpe) broth (Acumedia, Lansing, MI, USA) and
incubated at 37 C until reaching at least 1.0  109 colony forming
units (CFU) mL
1
, as determined by serial dilution and pour plate
counting (Wehr & Frank, 2004) after incubation at 37 C for 24 h
under anaerobic condition. Convenient volumes of each cultured
broth were mixed to achieve a pool of the three LAB strains containing
a total cell concentration of 1.0  1010 cells mL
1
. All S.
cerevisiae and LAB cells were heat-killed, being inactivated by
boiling at 100 C for 1 h before the binding assays, to avoid any
possible milk fermentation during the contact time.
2.2. Aflatoxin M1 binding assays
The ability of S. cerevisiae and LAB strains to bind AFM1 was
evaluated using commercial UHT skim milk samples previously
evaluated for AFM1 to confirm levels below the detection limit of
the method (0.01 ng mL
1
), spiked with 0.5 ng mL
1
. AFM1 standard
solution (Supelco, Bellefonte, PA, USA) was diluted in
acetonitrile in order to obtain a 2.5 mg mL
1 working solution,
which was calibrated according to Scott (1990). Two-hundred
microliters of the working solution were transferred to an Erlenmeyer,
evaporated to dryness under N2 and then 1 L of UHT skim
milk was added to the flask. Spiked milk samples were stirred, kept
at 37 C for 15 min, and immediately used in the binding assays
with S. cerevisiae and LAB strains.
The AFM1 binding assays were performed in triplicate as
described by Pierides et al. (2000) with some modifications.
Convenient volumes of culture broths containing 109 cells of
S. cerevisiae, 1010 cells of LAB pool, or 109 cells of S. cerevisiae þ 1010
cells of LAB pool were transferred to Eppendorf tubes and centrifuged
(Microcentrifuge CT-14000, Cientec, Piracicaba, SP, Brazil)
at 1800 g for 15 min. The supernatant was discharged and the
bacterial or yeast pellets were washed twice with sterile ultrapure
water (Milli-Q, Millipore, Bedford, MA, USA). After, the pellets were
resuspended in 1.0 mL of UHT skim milk containing AFM1, vortexed
for 3 min and incubated at 37 C during 30 min or 60 min. Following
the contact times, the tubes were centrifuged again at 1800 g for
15 min,

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

และ Var, 2008 Pierides เอ Nezami, Peltonem, Salminen, & Ahokas2000) รายงานก่อนหน้านี้ไม่มีการใช้ S. cerevisiae สำหรับdecontamination นมประกอบด้วย AFM1 ดังนั้น จุดมุ่งหมายของการปัจจุบันศึกษาเป็นการ ประเมินความสามารถของต้องใช้ S. cerevisiaeคนเดียว หรือร่วมกับกลุ่ม 3 ใช้ได้ในเชิงพาณิชย์สายพันธุ์ห้องปฏิบัติการ การผูก AFM1 ใน skim ยูเอชที (ultra-สูงอุณหภูมิ)นม spiked กับ 0.5 มิลลิกรัม AFM1 L 1ในช่วงเวลาติดต่อของ 30 นาทีและ 60 นาที2. วัสดุและวิธีการ2.1. S. cerevisiae และ LAB สายพันธุ์ต้องใช้ยีสต์แห้งลาเกอร์ใช้ได้ในเชิงพาณิชย์ (S. cerevisiaeSAFLAGER W37/70, Fermentis Ltd. ฝรั่งเศส) และห้องปฏิบัติการสายพันธุ์ที่สาม(แลคโตบาซิลลัส delbrueckii โอ bulgaricus LB340, rhamnosus แลคโตบาซิลลัสบริจาค HOWARU และ Bifidobacterium lactis BI07 ดอกไม้พอดีโดย Danisco บราซิล) ใช้ในการทดลอง ห้องปฏิบัติการสายพันธุ์ได้เคยประเมิน และแสดงให้เห็นว่าแต่ละเปอร์เซ็นต์ลบ AFM1 ในน้ำนมยูเอชทีที่ 37 C ตั้งแต่ 24.5 33.5(Bovo et al., 2012)Lyophilized yeasts ถูกเรียกใช้ในกระบอกน้ำ และcultivated ที่ 23 C ตามคำแนะนำของ Fermentisกำหนดจำนวนของเซลล์ยีสต์ในการระงับ โดยแสงmicroscopy ใช้หอ Neubauer แก้ไข การระงับผสมกับน้ำใส่จนถึงเซลล์เข้มข้นของ1.0 เซลล์ 109 mL 1.สายพันธุ์แต่ละแล็บ lyophilized ถูกเรียกใช้ใน MRS (deคน Rogosa และ Sharpe) ซุป (Acumedia, Lansing, MI สหรัฐอเมริกา) และincubated จนถึง 109 1.0 น้อยอาณานิคมขึ้นรูปที่ 37 Cหน่วย (CFU) mL 1เจือจางและเทจานประจำนับ (Wehr และ Frank, 2004) หลังจากบ่มที่ 37 C ใน 24 ชมภายใต้เงื่อนไขไม่ใช้ออกซิเจน ไดรฟ์ข้อมูลที่สะดวกของแต่ละอ่างซุปที่ผสมเพื่อให้ได้กลุ่มของสายพันธุ์ห้องปฏิบัติการ 3 ประกอบด้วยรวมเซลล์เข้มข้น 1.0 1010 เซลล์ mL 1. S ได้ทั้งหมดcerevisiae และ LAB เซลล์ถูกความร้อนฆ่า ถูกยกเลิกโดยเดือดที่ 100 C สำหรับ h 1 ก่อน assays ผูก หลีกเลี่ยงการใด ๆหมักนมเป็นไปได้ในช่วงเวลาติดต่อ2.2. aflatoxin M1 รวม assaysความสามารถของ S. cerevisiae และ LAB สายพันธุ์ผูก AFM1 ถูกถูกประเมินโดยใช้ตัวอย่าง skim นมยูเอชทีพาณิชย์ก่อนหน้านี้ประเมิน AFM1 เพื่อยืนยันระดับขีดจำกัดการตรวจสอบของวิธีการ (0.01 ng มล 1), spiked กับ ng 0.5 mL 1. มาตรฐาน AFM1โซลูชั่น (Supelco, Bellefonte, PA สหรัฐอเมริกา) ถูกทำให้เจือจางในacetonitrile เพื่อรับปัญหาทำงาน 2.5 มิลลิกรัมมล. 1ที่ถูกปรับเทียบตามสก็อต (1990) สอง - ร้อยmicroliters ของการแก้ปัญหาการทำงานถูกโอนย้ายไป Erlenmeyerหายไปกับความแห้งกร้านภายใต้ N2 แล้ว skim ยูเอชที 1 Lนมถูกเพิ่มเข้าไปจะหนาว เก็บตัวอย่างได้กวน นมถูกแทงที่ 37 C สำหรับ 15 นาที และใช้ทันทีใน assays ผูกS. cerevisiae และ LAB สายพันธุ์ดำเนิน assays ผูก AFM1 ใน triplicate เป็นอธิบายโดย Pierides et al. (2000) มีการปรับเปลี่ยนบางอย่างไดรฟ์ข้อมูลที่สะดวกของวัฒนธรรม broths 109 เซลล์ของS. cerevisiae, 1010 เซลล์ของห้องปฏิบัติการ หรือ 109 เซลล์ของ S. cerevisiae þ 1010โอนย้ายไปยังท่อ Eppendorf และ centrifuged เซลล์ของห้องปฏิบัติการ(Microcentrifuge CT-14000, Cientec, Piracicaba, SP บราซิล)ที่ g 1800 สำหรับ 15 นาที Supernatant ที่ออกและแบคทีเรียหรือยีสต์ขี้ถูกล้างสองครั้งกับกอซ ultrapureน้ำ (-Q มาก กลาสโกว์ MA สหรัฐอเมริกา) หลังจาก ขี้ได้resuspended ใน 1.0 mL ของ skim นมยูเอชทีประกอบด้วย AFM1, vortexedใน 3 นาที และ incubated ที่ 37 C ระหว่าง 30 นาทีหรือ 60 นาทีต่อไปนี้เวลาติดต่อ หลอดถูก centrifuged อีกที่ g 1800 สำหรับ15 นาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

และ Var, 2008; Pierides, El-Nezami, Peltonem, Salminen และ Ahokas,
2000) ไม่มีรายงานก่อนหน้านี้เกี่ยวกับการใช้เอส cerevisiae สำหรับคือ
การปนเปื้อนของนมที่มี AFM1 ดังนั้นจุดมุ่งหมายของการ
ศึกษาครั้งนี้เพื่อประเมินความสามารถของเอส cerevisiae สายพันธุ์,
คนเดียวหรือร่วมกับสระว่ายน้ำสามใช้ได้ในเชิงพาณิชย์
สายพันธุ์ LAB, การผูก AFM1 ในยูเอชที (Ultra-อุณหภูมิสูง) หาง
นมถูกแทงด้วย 0.5 มก AFM1 L 1
ในช่วงเวลาของการติดต่อ 30 นาที
และ 60 นาที.
2 วัสดุและวิธีการ
2.1 S. cerevisiae และสายพันธุ์ LAB
เบียร์ใช้ได้ในเชิงพาณิชย์แห้งยีสต์ (S. cerevisiae,
SAFLAGER W37 / 70, Fermentis จำกัด , ฝรั่งเศส) และสามสายพันธุ์ LAB
(Lactobacillus delbrueckii spp. bulgaricus LB340, Lactobacillus rhamnosus
HOWARU และ Bifidobacterium lactis FLORA-FIT BI07 บริจาค
โดย Danisco จำกัด บราซิล) ถูกนำมาใช้ในการทดลอง สายพันธุ์ LAB
ได้รับการประเมินก่อนหน้านี้และแสดงให้เห็นว่าร้อยละของแต่ละบุคคล
ในการกำจัด AFM1 ในนมยูเอชทีซีที่ 37 ตั้งแต่ 24.5-33.5%
(Bovo et al., 2012).
ยีสต์แห้งที่ถูกเปิดใช้งานในน้ำหมันและ
ได้รับการปลูกฝังที่ 23 C ตาม คำแนะนำของ Fermentis จำกัด
จำนวนของเซลล์ยีสต์ในการระงับถูกกำหนดโดยแสง
กล้องจุลทรรศน์โดยใช้ห้อง Neubauer การแก้ไข ระงับ
ถูกเจือจางด้วยน้ำหมันจนกว่าจะถึงความเข้มข้นของเซลล์
1.0? 109 มิลลิลิตรเซลล์? 1
.
LAB ส่วนบุคคลสายพันธุ์แห้งที่ถูกเปิดใน MRS (เด
ผู้ชาย, Rogosa และชาร์ป) น้ำซุป (Acumedia แลนซิง, MI, USA) และ
บ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสจนกว่าจะถึงอย่างน้อย 1.0? สร้างอาณานิคม 109
หน่วย (CFU) มิลลิลิตร 1
ตามที่กำหนดโดยเจือจางอนุกรมและเทแผ่น
นับ (Wehr และแฟรงก์, 2004) หลังจากการบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง
ภายใต้เงื่อนไขแบบไม่ใช้ออกซิเจน ปริมาณสะดวกของแต่ละเลี้ยง
น้ำซุปผสมเพื่อให้บรรลุสระว่ายน้ำของทั้งสามสายพันธุ์ LAB ที่มี
ความเข้มข้นของเซลล์รวม 1.0? 1,010 มิลลิลิตรเซลล์?
1 ทั้งหมด S.
cerevisiae และเซลล์ LAB มีความร้อนฆ่าตายถูกยกเลิกโดย
เดือดที่ 100 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมงก่อนที่จะมีผลผูกพันการตรวจเพื่อหลีกเลี่ยงการใด ๆ
ที่เป็นไปได้หมักนมในช่วงเวลาที่ติดต่อ.
2.2 อะฟลาท็อกซิน M1 ผูกพันการวิเคราะห์
ความสามารถของเอส cerevisiae และสายพันธุ์ LAB ที่จะผูก AFM1 ได้รับการ
ประเมินโดยใช้ยูเอชทีในเชิงพาณิชย์ตัวอย่างนมพร่องมันเนยก่อนหน้านี้
ประเมิน AFM1 เพื่อยืนยันระดับที่ต่ำกว่าขีด จำกัด ของการตรวจสอบ
วิธีการ (0.01 นาโนกรัมมิลลิลิตร 1
) ถูกแทงด้วย 0.5 นาโนกรัม มิลลิลิตร?
1 AFM1 มาตรฐาน
วิธีการแก้ปัญหา (Supelco ?, เบลลาฟอน, PA, สหรัฐอเมริกา) ถูกเจือจางใน
acetonitrile เพื่อให้ได้ 2.5 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร 1 การแก้ปัญหาการทำงาน
ซึ่งได้รับการสอบเทียบตามที่สกอตต์ (1990) สองร้อย
microliters ของการแก้ปัญหาการทำงานถูกย้ายไป Erlenmeyer,
ระเหยแห้งภายใต้ N2 แล้ว 1 ลิตรของยูเอชทีหาง
นมถูกบันทึกอยู่ในขวด ตัวอย่างนมถูกแทงถูกกวนเก็บไว้
ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 นาทีและใช้งานได้ทันทีในการตรวจที่มีผลผูกพัน
กับเอส cerevisiae และสายพันธุ์ LAB.
ตรวจผูกพัน AFM1 ได้ดำเนินการในขณะที่เพิ่มขึ้นสามเท่า
อธิบายโดย Pierides et al, (2000) ที่มีการปรับเปลี่ยนบางอย่าง.
ปริมาณสะดวกของซุปมิโสะวัฒนธรรมที่มี 109 เซลล์ของ
เอส cerevisiae 1010 เซลล์ของสระว่ายน้ำ LAB หรือ 109 เซลล์ของ S. cerevisiae þ 1010
เซลล์ของสระว่ายน้ำ LAB ถูกโอนไปยังหลอด Eppendorf และหมุนเหวี่ยง
(ไมโคร CT-14000, Cientec, Piracicaba, SP, บราซิล)
ที่ 1,800 กรัมเป็นเวลา 15 นาที ใสถูกปลดและ
เม็ดแบคทีเรียหรือยีสต์ถูกล้างครั้งที่สองที่มีการฆ่าเชื้อบริสุทธิ์
น้ำ (Milli-Q ค, ฟอร์ด, MA, USA) หลังจากเม็ดถูก
resuspended ใน 1.0 มิลลิลิตรยูเอชทีหางนมที่มี AFM1, การ vortex
เวลา 3 นาทีและบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสในช่วง 30 นาทีหรือ 60 นาที ต่อไปนี้
ครั้งติดต่อหลอดที่ถูกปั่นอีกครั้งที่ 1,800 กรัมสำหรับ
15 นาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

& var , 2008 ; pierides เอล nezami peltonem salminen , , ,
ahokas & , 2000 ) มีรายงานก่อนหน้านี้ใช้ของ S . cerevisiae สำหรับ
ในนมที่มี afm1 . ดังนั้น เป้าหมายของ
ปัจจุบันศึกษา เพื่อประเมินความสามารถของ S . cerevisiae สายพันธุ์
คนเดียวหรือใช้ร่วมกับระ 3 สายพันธุ์ Lab อาด
,รวม afm1 ในนมยูเอชที ( Ultra อุณหภูมิสูง ) หาง
นมแหลม 0.5 มิลลิกรัม afm1 ผม
1
, ในช่วงเวลาที่ติดต่อ 30 นาทีและ 60 นาที

2 วัสดุและวิธีการ
2.1 . S . cerevisiae สายพันธุ์ยีสต์ห้องปฏิบัติการ
อาดใหญ่แห้ง ( S . cerevisiae สายพันธุ์
saflager , w37 / 70 fermentis จำกัด , ฝรั่งเศส ) และสามแลบสายพันธุ์ Lactobacillus bulgaricus lb340
( delbrueckii spp . , Lactobacillus rhamnosus
howaru Bifidobacterium lactis และ flora-fit bi07 บริจาค
โดย danisco จำกัด , บราซิล ) ถูกใช้ในการทดลอง แล็บสายพันธุ์
ได้รับก่อนหน้านี้การประเมินและแสดงเปอร์เซ็นต์ของแต่ละคน
afm1 เอาในนมยูเอชที ที่ 37 องศาเซลเซียส ตั้งแต่ 3 ถึง 33.5 %
( GenericName et al . , 2012 ) .
แห้งยีสต์ถูกเปิดในน้ำหมันและ
บ่มที่อุณหภูมิ 23 องศาเซลเซียส ตามข้อเสนอแนะของ fermentis จำกัด
จำนวนเซลล์ยีสต์ในจังหวะถูกกำหนดด้วยกล้องจุลทรรศน์แสง
นูเบาเออร์ที่ใช้แก้ไขห้อง การระงับ
เจือจางด้วยน้ำปลอดเชื้อ จนกว่าจะเข้าสู่เซลล์ความเข้มข้น
1.0  109 เซลล์ ml
1
.
แต่ละ Lab แห้งสายพันธุ์นี้ในนาง ( de
มนุษย์ และ rogosa ชาร์ป ) ซุป ( USA acumedia แลนซิง , มิชิแกน , ) และ
บ่มที่ 37 C จนถึงอย่างน้อย 10  109 อาณานิคมสร้างหน่วย ( CFU ) มล.

1
, ตามที่กำหนดโดยอุทิศถวายและเทลงจาน
นับ ( wehr &แฟรงค์ , 2004 ) หลังจากบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่
ภายใต้สภาวะไร้ออกซิเจน ปริมาณที่สะดวกของแต่ละสูตรซุป
ผสมเพื่อให้บรรลุระสามแลบสายพันธุ์ที่มีความเข้มข้นเซลล์รวม
1.0  1010 เซลล์ ml
1

ทั้งหมด และเป็นห้องปฏิบัติการเซลล์
cerevisiae ความร้อนฆ่าถูกยับยั้งโดย
เดือดที่ 100 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ก่อนที่จะใช้ผูก เพื่อหลีกเลี่ยงการใด ๆที่เป็นไปได้ในระหว่างการหมักนม

ติดต่อครั้ง 2.2 . อะฟลาท็อกซิน M1
ผูกพันหรือความสามารถของ S . cerevisiae สายพันธุ์ที่จะผูกเป็นแล็บ afm1
ประเมินตัวอย่างนม UHT นมพาณิชย์ประเมินก่อนหน้านี้
afm1 ยืนยันระดับต่ำกว่าขีดจำกัดของ
วิธี ( 0.01 ของมล
1
)ถูกแทงด้วย 0.5 ng ml
1

afm1 สารละลายมาตรฐาน
( supelco  bellefonte , PA , USA ) เจือจางใน
ไนเพื่อให้ได้ 2.5 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร
1 ทำงานแก้ปัญหา
ซึ่งเทียบตาม สก็อต ( 1990 ) สองร้อย
ตัวเลขของโซลูชั่นการทำงานที่ถูกย้ายไปยังเออร์เลนเมเยอร์
, ระเหยแห้งได้ที่ 2 แล้ว 1 ลิตรของน้ำนมยูเอชทีหาง
เพิ่มขวดตัวอย่างนมแหลมเป็นคนเก็บไว้
37 C เป็นเวลา 15 นาที และใช้งานได้ทันทีในการจับกับ S . cerevisiae และแล็บ )

) สายพันธุ์ afm1 ผูกได้ทั้งสามใบเป็น
อธิบายโดย pierides et al . ( 2000 ) กับการปรับเปลี่ยนบางอย่าง .
) สะดวกของวัฒนธรรมาที่มี 109 เซลล์ของ S . cerevisiae 1010
, เซลล์ของแล็บพูล หรือ 109 เซลล์ของ S . cerevisiae þ 1010
เซลล์ของแล็บพูลมีการโอนเพนดอร์ฟ หลอดไฟฟ้า
( ไมโครเซนตริฟิวจ์ ct-14000 cientec ปิราคิคาบ้า , , , SP , ประเทศบราซิล )
1 , 800 กรัม เป็นเวลา 15 นาที และนำออกมาและแบคทีเรียหรือยีสต์เม็ดถูกล้าง

น้ำสองครั้งกับหมันบริสุทธิ์มาก ( milli-q มิลลิ , ฟอร์ด , MA , USA ) หลังจากที่เม็ดถูก
resuspended ใน 1.0 มล. ยูเอชทีหางนมที่มี afm1 vortexed
,3 นาทีและบ่มที่ 37 องศาเซลเซียส ในช่วง 30 นาทีหรือ 60 นาที ดังต่อไปนี้
ติดต่อครั้ง , ท่อ คือที่ระดับอีกครั้งที่ 1800 g
15 นาที