Substrate specificity analysis of P

Substrate specificity analysis of PmproPO1 and PmproPO2 was achieved by examining the ability of the PmproPO1 and PmproPO2 gene-silenced shrimp to hydrolyze various PO substrates. At 48 h after the second dsRNA injection (or 150 mM NaCl only for the control), hemolymph was collected from the gene silenced and control shrimp and 400 lg of this was separately mixed with the PO substrates of: the monophenol L-tyrosine, the diphenols L-DOPA or dopamine, and the catechol compound DHI, all in 10 mM Tris–HCl buffer (pH 8.0). The reaction mixture was incubated at room temperature (RT) for 30 min before an equal volume of 10% (v/v) acetic acid was added. The increase in the absorbance at 490 nm (A490) was subsequently monitored using a SpectraMax M5 microplate reader (Molecular Devices). The protein concentration was determined by the Bradford assay (Bio-Rad). The addition of reaction buffer instead of shrimp hemolymph was used as the negative control. The activity of the PO enzyme was defined as DA490/mg total protein/min. The experiment was performed in triplicate with three samples from three pooled shrimp/group.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การวิเคราะห์ความจำเพาะของพื้นผิวจาก PmproPO1 PmproPO2 และก็ประสบความสำเร็จด้วยการตรวจสอบความสามารถในการ PmproPO1 และ PmproPO2 กุ้งยีนเงียบในการย่อยสลายสารตั้งต้น PO ต่างๆ ใน 48 ชั่วโมงหลังจากการฉีด dsRNA ที่สอง (หรือ 150 มิลลิโซเดียมคลอไรด์เฉพาะสำหรับการควบคุม) เลือดถูกเก็บรวบรวมจากยีนเงียบและกุ้งควบคุมและ 400 LG นี้ผสมแยกกับพื้นผิวของ PO: monophenol L-tyrosine, diphenols L-DOPA ห​​รือโดพามีนและสาร catechol DHI ทั้งหมดใน 10 มมบัฟเฟอร์ Tris-HCl (pH 8.0) ผสมปฏิกิริยาถูกบ่มที่อุณหภูมิห้อง (RT) เป็นเวลา 30 นาทีก่อนที่ปริมาณเท่ากับ 10% (v / v) กรดอะซิติกถูกเพิ่มเข้ามา เพิ่มขึ้นในการดูดกลืนแสงที่ 490 นาโนเมตร (A490) คือการตรวจสอบในภายหลังโดยใช้ M5 SpectraMax อ่าน microplate (โมเลกุลอุปกรณ์) ความเข้มข้นของโปรตีนที่ถูกกำหนดโดยการทดสอบแบรดฟอ (Bio-Rad) นอกจากนี้ของบัฟเฟอร์ปฏิกิริยาแทนเลือดกุ้งที่ใช้เป็นตัวควบคุมเชิงลบ กิจกรรมของเอนไซม์ PO ถูกกำหนดเป็น DA490 / มิลลิกรัมโปรตีนทั้งหมด / นาที การทดลองดำเนินการในเพิ่มขึ้นสามเท่าสามตัวอย่างจากสาม pooled กุ้ง / กลุ่ม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การวิเคราะห์พื้นผิวและความจำเพาะของ pmpropo1 pmpropo2 ทําได้โดยการตรวจสอบความสามารถของ pmpropo1 และยีน pmpropo2 silenced กุ้ง , พื้นผิว PO ต่างๆ ที่ 48 ชั่วโมงหลังฉีด dsRNA ที่สอง ( หรือ 150 mM NaCl เท่านั้นเพื่อควบคุม ) สามารถเก็บข้อมูลจากยีนและการควบคุม และให้กุ้ง 400 LG นี้แยกผสมกับพื้นผิวของ : ปอการ monophenol แอลไทโรซีน , diphenols แอล - โดปา หรือ โดพามีน และแคติคอลผสม Dh ทั้งหมดใน 10 มิลลิเมตรโดย– HCl บัฟเฟอร์ pH 8.0 ) ปฏิกิริยาผสมบ่มที่อุณหภูมิห้อง ( RT ) สำหรับ 30 นาทีก่อนมีปริมาณเท่ากับ 10% ( v / v ) กรดอะซิติกถูกเพิ่มเข้ามา เพิ่มขึ้นในการดูดกลืนแสงที่ 490 nm ( a490 ) และการติดตามการใช้ spectramax M5 พื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทยอ่าน ( อุปกรณ์ระดับโมเลกุล )ระดับโปรตีน ถูกกำหนดโดยวิธี Bradford ( ไบโอ ราด ) นอกเหนือจากปฏิกิริยาแทนบัฟเฟอร์ของกุ้งสามารถใช้ควบคุมลบ กิจกรรมของเอนไซม์โปถูกกำหนดไว้เป็น da490 / มิลลิกรัมโปรตีน / นาที โดยทดสอบทั้งสามใบสามตัวอย่างจากสามรวมกุ้ง

/ กลุ่ม