2. Material and method2.1. Material

2. Material and method
2.1. Materials, reagents and instruments
Maxisorp polystyrene microtiter plates were purchased from
NUNC. 384-well microtiter plates were obtained from Molecular
Devices. 16-pad nitrocellulose coated FAST slides and incubation
chambers (6 mm  6 mm pad) were purchased from Whatman Int.
Ltd. AFB1, AFB2, AFG1, AFG2, AFB1-bovine serum albumin (AFB1-
BSA), monoclonal anti-AFB1antibody, sheep anti-mouse IgG eCy3
(IgG-Cy3), 3,30,5,50-Tetramethylbenzidine (TMB) liquid substrate
system (peroxidase substrate) solution were purchased from SigmaeAldrich.
Goat anti-mouse HRP conjugate IgG was purchased
from Abcam. Alexa Fluor® 647 Goat anti-Mouse IgG (H þ L), highly
cross-adsorbed antibody were purchased from Invitrogen. All other
chemicals were of analytical grade (A.R.) and purchased from SigmaeAldrich
(Dublin, Ireland). Q-Array System (Genetix) and 1
blunt-ended stainless steel print pin with a tip diameter of 150 mm
was used to generate the toxin microarrays. The arrays were
scanned using a confocal microarray reader (Genepix 4000B).
Washing steps for ELISA were performed by Fluido 2 microplate
washer (Anthos). The experimental data for ELISA were obtained by
Spectra MaxM2 microplate reader (Molecular device).
2.2. Competitive ELISA and cross-reactivity
Maxisorp plates coated with 50 mL/well of AFB1-BSA (1 mgml
1)
in bicarbonate buffer (100 mM Na2CO3 NaHCO3 pH 9.6) were
incubated at 4 C for overnight. After two washes with TBST
(150 mM NaCl, 10 mM Tris-HCL pH 7.5, 0.1% v/v Tween 20), plates
were blocked with skim milk powder 5% (v/v) in TBST (400 ml/well)
for 1 h at 37 C. Following three washes (50 ml/well), pre-incubated
AFB1 in different concentrations with monoclonal antibody were
incubated for 30 min at 37 C. After three washes, HRP conjugated
goat anti-mouse (0.2 mgml
1 in skim milk powder 5% (v/v) in TBST,
50 ml/well) were added for 1 h at 37 C. Followed by three washes,
TMB solution (50 ml/well) were added and plate were incubated for
30 min at 37 C. The final absorbance was measured at 650 nm. To
assess the specificity of developed ELISA, cross reactivity of Mab
were constructed by using AFB1, AFB2, AFG1 and AFG2 as
competitor under optimised condition. Four serial diluted standard
curves were performed in the ELISA and the competition curves
were graphed and fitted by a four-parameter logistic equation. The
50% inhibition concentration (IC50) values of different aflatoxins
were determined and the cross reactivity was gained by comparing
the IC50 values of analytes with the following formula: crossreactivity
(%) ¼ [IC50 (AFB1)/IC50 (analyte)]  100 (Jiang et al.,
2012).
2.3. Contact printing and immobilization of toxin microarray
16-pad nitrocellulose coated FAST slides were placed in Q-Array
spotting chamber with relative humidity of 60%e75%. Each subarray
consisted of 32 replicates of AFB1-BSA, 8 replicates of mouse
IgG-Cy3 (printing control), 4 replicates of monoclonal anti- AFB1
antibody (positive control) and 4 replicates of BSA 2% in PBS
(negative control). The average size of each generated spot was
around 200 mm. After printing, the microarray slides were stored at
4 C for at least 24 h before use.
2.4. Toxin microarray procedure
An indirect competitive immunoassay was performed on each
sub array after fixing spotting chambers on slides. Then slides were
blocked with 100 ml of BSA 2% in PBS for 1 h and washed two times
with PBST (0.01 M phosphate buffer contains 0.0027 M KCl and
0.137 M NaCl, pH 7.4, at 25 C, 0.01% (v/v) Tween 20). 50 ml preincubated
mixture of AFB1 standard solutions at different concentrations
with monoclonal anti-AFB1 (0.19 mg/ml) in BSA 1% PBST
were added and the slides incubated for 30 min at 37

C. Followed
by three washes, 50 ml of Alexa Fluor® 647 anti-mouse IgG
(1 mg ml
1 ) 1:5000 (v/v) in BSA 1%- PBST was added for 45 min in
37

C. Then slides were centrifuged at 3000 rpm for 3 min at 4

C
after last three washes. Dried slides were scanned at 532 nm and
635 nm wavelength with a scan resolution of 10 mm. Total procedure
completed in 3 h duration.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. วัสดุ reagents และเครื่องมือซื้อจาก Maxisorp microtiter โฟมแผ่นNUNC แผ่น microtiter 384-ดีได้รับมาจากโมเลกุลอุปกรณ์ nitrocellulose 16 แผ่นเคลือบภาพนิ่งอย่างรวดเร็วและคณะทันตแพทยศาสตร์ซื้อจากของดอกเบี้ย Whatman แชมเบอร์ส (มม. 6 มม. 6 แผ่น)จำกัด AFB1 AFB2, AFG1 AFG2, AFB1 วัว serum albumin (AFB1-บีเอสเอ), anti-AFB1antibody โมโน แกะเมาส์ป้องกัน IgG eCy3(IgG-Cy3), 3,30,5,50-Tetramethylbenzidine (ทหารไทย) พื้นผิวของเหลวแก้ปัญหาระบบ (พื้นผิว peroxidase) ที่ซื้อจาก SigmaeAldrichค่าสังยุค HRP เมาส์ป้องกันแพะ IgG ที่ซื้อได้จาก Abcam IgG เมาส์ป้องกันแพะ 647 ® Alexa Fluor (H þ L), สูงข้าม adsorbed แอนติบอดีถูกซื้อจาก Invitrogen อื่น ๆ ทั้งหมดสารเคมีเกรดวิเคราะห์ (A.R.) ได้ และซื้อจาก SigmaeAldrich(ดับลิน ไอร์แลนด์) ระบบคิวเรย์ (Genetix) และ 1เหล็กกล้าไร้สนิมทู่สิ้นสุดพิมพ์ pin ด้วยการแนะนำเส้นผ่านศูนย์กลาง 150 มม.ถูกใช้เพื่อสร้าง microarrays พิษ อาร์เรย์ถูกสแกนโดยใช้เครื่องอ่าน confocal microarray (Genepix 4000B)ดำเนินขั้นตอนการซักผ้าสำหรับ ELISA โดย microplate Fluido 2เครื่องซักผ้า (Anthos) ข้อมูลทดลอง ELISA ได้รับโดยแรมสเป็คตรา MaxM2 microplate reader (โมเลกุลอุปกรณ์)2.2 การแข่งขัน ELISA และ cross-reactivityMaxisorp แผ่นเคลือบ กับ 50 มล/ดี ของบีเอส เอ AFB1 (1 mgml 1)ในไบคาร์บอเนต มีบัฟเฟอร์ (100 มม. Na2CO3 NaHCO3 pH 9.6)incubated ที่ 4 C พรรณไม้หลากหลายชนิด หลังจากสอง washes กับ TBSTแผ่น (150 มม. 10 มม.ทริสเรทติ้ง HCL pH 7.5, 0.1% v/v Tween 20, NaCl),บล็อกกับ skim นมผง 5% (v/v) ใน TBST (400 ml/ดี)สำหรับ h 1 ที่ 37 เซลเซียส ต่อไปนี้สาม washes (50 ml/ดี), ก่อน incubatedAFB1 ในความเข้มข้นแตกต่างกันกับ monoclonal แอนติบอดีได้ใน 30 นาทีที่ 37 C. incubated หลังจากสาม washes, HRP กลวงครีมป้องกันเมาส์ (0.2 mgml 1 ใน skim นมผง 5% (v/v) TBST50 มล./ดี) ถูกเพิ่มสำหรับ h 1 ที่ 37 C. Followed โดย washes สามทหารไทยโซลูชั่น (50 ml/ดี) ถูกเพิ่ม และจานถูก incubated สำหรับ30 นาทีที่ 37 เซลเซียส ถูกวัด absorbance ที่สุดท้ายที่ 650 nm ถึงประเมิน specificity ของ ELISA ที่พัฒนา ข้ามเกิดปฏิกิริยาของมาบถูกสร้างโดย AFB1, AFB2, AFG1 และ AFG2 เป็นคู่แข่งภายใต้เงื่อนไขที่บวม ลำดับที่ 4 ทำให้มาตรฐานดำเนินการ ELISA และแข่งขันเส้นโค้งเส้นโค้งใช้สร้างกราฟ และตกแต่ง โดยมีพารามิเตอร์สี่โลจิสติกสมการการ ที่ค่าความเข้มข้น (IC50) ยับยั้งการ 50% aflatoxins ที่แตกต่างกันที่กำหนด และเกิดปฏิกิริยาไขว้ได้รับ โดยการเปรียบเทียบค่า IC50 ของ analytes ด้วยสูตรต่อไปนี้: crossreactivity(%) ¼ [IC50 (AFB1) / IC50 (analyte)] 100 (Jiang et al.,2012)2.3 การติดต่อการพิมพ์และการตรึงของ microarray พิษnitrocellulose 16 แผ่นเคลือบอย่างรวดเร็วนิ่งไว้ในคิวเรย์จำห้อง มีความชื้นสัมพัทธ์ 60% e75% แต่ละ subarrayประกอบด้วย 32 เหมือนกับของ AFB1-บีเอสเอ 8 เหมือนกับเมาส์IgG-Cy3 (พิมพ์ตัวควบคุม), 4 เหมือนกับของโมโนต่อต้าน-AFB1แอนติบอดี (บวกควบคุม) และ 4 เหมือนกับของบีเอสเอ 2% ใน PBS(ลบควบคุม) มีขนาดโดยเฉลี่ยของแต่ละจุดที่สร้างขึ้นประมาณ 200 มม. หลังจากพิมพ์ ภาพนิ่ง microarray ถูกเก็บไว้ที่C 4 สำหรับอย่างน้อย 24 ชมก่อนใช้2.4. พิษ microarray กระบวนImmunoassay แข่งขันทางอ้อมที่ทำในแต่ละอาร์เรย์ย่อยหลังจากที่การแก้ไขจำหอบนภาพนิ่ง แล้ว ภาพนิ่งได้บล็อกกับ 100 ml ของบีเอสเอ 2% ใน PBS 1 h และหินสองครั้งกับ PBST (0.01 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ประกอบด้วย 0.0027 M KCl และ0.137 M NaCl, pH 7.4 ที่ 25 C, 0.01% (v/v) Tween 20) 50 มล preincubatedส่วนผสมของ AFB1 โซลูชั่นมาตรฐานที่ความเข้มข้นแตกต่างกันด้วยโมโนต่อต้าน-AFB1 (0.19 mg/ml) ในบีเอสเอ 1% PBSTเพิ่ม และ incubated ภาพนิ่งสำหรับ 30 นาทีที่ 37C. ตามโดยสาม washes, 50 ml ของ IgG ป้องกันเมาส์ Alexa Fluor ® 647(มิลลิกรัมต่อ 1 มิลลิลิตร 1) 1:5000 (v/v) ในบีเอสเอ 1% PBST เพิ่มสำหรับ 45 นาทีใน37C. แล้ว ถูก centrifuged ที่ 3000 rpm สำหรับ 3 นาทีภาพนิ่งที่ 4Cหลังจากล่าสุด washes สาม ภาพนิ่งแห้งถูกสแกนที่ 532 nm และความยาวคลื่น nm 635 ด้วยความละเอียดการสแกน 10 mm. รวมกระบวนงานเสร็จสมบูรณ์ในช่วงเวลา 3 h

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 วัสดุน้ำยาและเครื่องมือสไตรีน Maxisorp แผ่นไมโครที่ซื้อมาจาก NUNC 384 แผ่นไมโครดีที่ได้รับจากโมเลกุลอุปกรณ์ 16 แผ่น nitrocellulose เคลือบภาพนิ่ง FAST และบ่มห้อง(6 มม 6 แผ่นมิลลิเมตร) ที่ซื้อมาจากเบอร์ Int. จำกัด AFB1, AFB2, AFG1, AFG2, ซีรั่มอัลบูมิ AFB1-วัว (AFB1- BSA) โมโนโคลนอลต่อต้าน AFB1antibody แกะต่อต้านเมาส์ IgG eCy3 (IgG-Cy3) 3,30,5,50-Tetramethylbenzidine (TMB) พื้นผิวที่มีสภาพคล่องระบบ (พื้นผิว peroxidase) วิธีการแก้ปัญหาที่ซื้อมาจาก SigmaeAldrich. แพะต่อต้านเมาส์ HRP ผัน IgG ถูกซื้อจากAbcam Alexa Fluor® 647 แพะ IgG ต่อต้านเมาส์ (H þ L) สูงแอนติบอดีข้ามดูดซับกำลังซื้อจากInvitrogen อื่น ๆสารเคมีที่เป็นของเกรดวิเคราะห์ (AR) และซื้อจาก SigmaeAldrich (ดับลินไอร์แลนด์) ระบบ Q-อาร์เรย์ (Genetix) และ 1 ทื่อสิ้นสุดวันที่สแตนเลสขาพิมพ์ที่มีขนาดเส้นผ่าศูนย์กลางปลาย 150 มมถูกนำมาใช้ในการสร้างmicroarrays พิษ อาร์เรย์ถูกสแกนโดยใช้เครื่องอ่าน microarray confocal (Genepix 4000B). ขั้นตอนการซักผ้าสำหรับวิธี ELISA ดำเนินการโดย Fluido 2 microplate เครื่องซักผ้า (Anthos) ข้อมูลการทดลองสำหรับวิธี ELISA ที่ได้รับจากผู้อ่านSpectra MaxM2 microplate (อุปกรณ์โมเลกุล). 2.2 วิธี ELISA แข่งขันและปฏิกิริยาข้ามแผ่นMaxisorp เคลือบด้วย 50 มล / ดี AFB1-BSA (1 mgml? 1) ในบัฟเฟอร์ไบคาร์บอเนต (100 มิลลิ Na2CO3 NaHCO3 ค่า pH 9.6) ได้รับการบ่มที่4 องศาเซลเซียสสำหรับในชั่วข้ามคืน หลังจากที่ทั้งสองล้างด้วย TBST (150 มิลลิโซเดียมคลอไรด์ 10 มิลลิ Tris-HCL พีเอช 7.5, 0.1% ปริมาตร / ปริมาตร Tween 20), จานถูกบล็อกด้วยผงนมพร่องมันเนย5% (v / v) ใน TBST (400 มล. / กัน) สำหรับ 1 ชั่วโมงที่ 37 องศาเซลเซียส ต่อไปนี้สามล้าง (50 มล. / กัน) ก่อนการบ่มAFB1 ในระดับความเข้มข้นที่แตกต่างกับโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่ถูกบ่มเป็นเวลา30 นาทีที่ 37 องศาเซลเซียส หลังจากสามล้าง HRP ผันแพะต่อต้านเมาส์(0.2 mgml 1 ในนมผงพร่องมันเนย 5% (v / v) ใน TBST, 50 มล. / ดี) มีการเพิ่มเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส ตามด้วยสามล้างการแก้ปัญหาทหารไทย (50 มล. / ดี) มีการเพิ่มและแผ่นถูกบ่มสำหรับ 30 นาทีที่ 37 องศาเซลเซียส การดูดกลืนแสงสุดท้ายคือวัดที่ 650 นาโนเมตร เพื่อประเมินความจำเพาะของวิธี ELISA ที่พัฒนาปฏิกิริยาข้ามบถูกสร้างขึ้นโดยใช้AFB1, AFB2, AFG1 และ AFG2 เป็นคู่แข่งภายใต้เงื่อนไขที่ดีที่สุด สี่มาตรฐานอนุกรมเจือจางโค้งได้ดำเนินการในวิธี ELISA และเส้นโค้งการแข่งขันได้รับการติดตั้งและกราฟโดยสี่พารามิเตอร์สมการโลจิสติก ความเข้มข้นของการยับยั้ง 50% (IC50) ค่านิยมของ aflatoxins ที่แตกต่างกันได้รับการพิจารณาและการเกิดปฏิกิริยาข้ามได้รับโดยการเปรียบเทียบค่าIC50 ของสารที่มีสูตรการคำนวณดังนี้ crossreactivity (%) ¼ [IC50 (AFB1) / IC50 (วิเคราะห์)] 100 (เจียง et al., 2012). 2.3 การพิมพ์รายชื่อและตรึง microarray พิษ16 แผ่น nitrocellulose เคลือบภาพนิ่ง FAST ถูกวางไว้ใน Q-อาร์เรย์จำห้องที่มีความชื้น60% E75% แต่ละ subarray ประกอบด้วย 32 ซ้ำของ AFB1-BSA, 8 ซ้ำเมาส์IgG-Cy3 (พิมพ์ควบคุม) 4 ซ้ำของ AFB1 ต่อต้านโมโนโคลนอลแอนติบอดี(ควบคุมบวก) และ 4 ซ้ำของบีเอสเอ 2% ในพีบีเอส(ควบคุมลบ) ขนาดเฉลี่ยของแต่ละจุดที่สร้างขึ้นเป็นประมาณ 200 มิลลิเมตร หลังจากการพิมพ์ภาพนิ่ง microarray ถูกเก็บไว้ที่4 องศาเซลเซียสเป็นเวลาอย่างน้อย 24 ชั่วโมงก่อนการใช้งาน. 2.4 ขั้นตอน microarray พิษimmunoassay แข่งขันทางอ้อมที่ได้ดำเนินการในแต่ละอาร์เรย์ย่อยหลังจากแก้ไขห้องจำบนสไลด์ แล้วสไลด์ถูกปิดกั้นด้วย 100 มล. ของบีเอสเอ 2% ในพีบีเอสเป็นเวลา 1 ชั่วโมงและล้างครั้งที่สองกับPBST (0.01 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์มี 0.0027 M KCl และ0.137 M NaCl ค่า pH 7.4 ที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียส, 0.01% (ปริมาตร / ปริมาตร ) Tween 20) 50 มล preincubated ส่วนผสมของ AFB1 โซลูชั่นมาตรฐานที่ระดับความเข้มข้นที่แตกต่างกันที่มีการป้องกันAFB1 โมโนโคลนอล (0.19 mg / ml) ในบีเอสเอ PBST 1% มีการเพิ่มและภาพนิ่งบ่มเป็นเวลา 30 นาทีที่ 37? C. ตามด้วยสามล้าง 50 มล. ของ Alexa Fluor® 647 IgG ต่อต้านเมาส์ที่1 (1 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร 1): 5000 (v / v) ในบีเอสเอ 1% - PBST ถูกบันทึกเป็นเวลา 45 นาทีใน37? C. ภาพนิ่งจากนั้นถูกหมุนเหวี่ยงที่ 3000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 3 นาทีที่ 4? C หลังจากช่วงสามล้าง สไลด์แห้งถูกสแกนที่ 532 นาโนเมตรและความยาวคลื่น635 นาโนเมตรที่มีความละเอียดในการสแกน 10 มม ขั้นตอนทั้งหมดแล้วเสร็จในระยะเวลา 3 ชั่วโมง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . วัสดุ สารเคมีและอุปกรณ์
maxisorp ไมโครโฟมแผ่นซื้อมาจาก
ขณะนี้ . เพราะงั้น แผ่นไมโครได้รับจากอุปกรณ์โมเลกุล

แผ่นเคลือบ 16 ไนโตรภาพนิ่งได้อย่างรวดเร็วและห้องบ่ม
( 6 มม. 6 มม.  แผ่น ) ซื้อจาก whatman int
จำกัด สาร afb2 afg1 afg2 , , , , ( สารสารอัลบูมิน ( -
)โมโนโคลนอล anti-afb1antibody แกะเมาส์ IgG anti ecy3
( igg-cy3 ) 3,30,5,50-tetramethylbenzidine ( TMB ) ระบบพื้นผิว
ของเหลว ( peroxidase พื้นผิว ) โซลูชั่นที่ซื้อมาจาก sigmaealdrich . HRP ป้องกันเมาส์
แพะคือ IgG ถูกซื้อจาก ABCAM
. Alexa Fluor ® 647 แพะ IgG anti เมาส์ ( H þ L )
( ขอข้ามเนื่องจากซื้อจาก Invitrogen .
ทั้งหมดอื่น ๆสารเคมีคือวิเคราะห์เกรด ( รถยนต์ ) และซื้อจาก sigmaealdrich
( ดับลิน , ไอร์แลนด์ ) ระบบ q-array ( genetix ) 1
ทื่อสิ้นสุดขาเหล็กสแตนเลสพิมพ์ด้วยเคล็ดลับขนาดเส้นผ่าศูนย์กลาง 150 มม.
ถูกใช้เพื่อสร้างสารพิษิ . อาร์เรย์เป็น
สแกนโดยใช้เครื่องอ่านไมโคร เรย์ด้วย ( genepix 4000b ) .
ขั้นตอนการล้างสำหรับ ELISA ได้ fluido 2 พื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย
เครื่องซักผ้า ( anthos )ข้อมูลที่ได้จากการทดลองสำหรับ ELISA
Spectra maxm2 พื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทยอ่าน ( อุปกรณ์โมเลกุล ) .
2.2 . วิธีแข่งขัน และขอประทาน
maxisorp แผ่นเคลือบด้วย 50 มิลลิลิตร / ดีของ afb1-bsa ( 1 mgml
1 )
ในไบคาร์บอเนตบัฟเฟอร์ ( 100 มม. Na2CO3 NaHCO3 pH 9.6 )
บ่มที่ 4  C สำหรับค้างคืน หลังจากสองตัวกับ tbst
( 150 mM NaCl 10 มม. นอกจากนี้ กรดไฮโดรคลอริก pH 7.5 , 0.1% Tween 20 v / v )
, จานที่ถูกบล็อกด้วยหางนมผง 5 % ( v / v ) ใน tbst ( 400 ml / )
1 H ที่ 37  C . ต่อไปนี้สามล้าง ( 50 มล. / ดี ) ก่อนเติมสารในความเข้มข้นที่แตกต่างกัน

กับโมโนโคลนอลแอนติบอดีถูกบ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที  หลังจากสามล้างชผลิตภัณฑ์ป้องกันเมาส์
แพะ ( 0.2 mgml
1 ในหางนมผง 5 % ( v / v ) ใน tbst 50 มิลลิลิตร /
, ) เพิ่ม 1 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิ 37  C ตามด้วยสามล้าง
โดย โซลูชั่น ( 50 มล. / ) โดยเพิ่มแผ่นสำหรับ
30 นาทีที่ 37  C สุดท้ายค่าวัดที่ 650 nm .

ประเมินความจำเพาะของวิธีการพัฒนา , ข้ามมาบ
ถูกสร้างโดยใช้สาร afb2 afg1 , , และเป็นคู่แข่ง -
afg2 ภายใต้เงื่อนไข ต่อเนื่อง 4 เจือจางเส้นโค้งมาตรฐาน
มีการปฏิบัติในวิธี ELISA และการแข่งขันโค้ง
เป็นกราฟและติดตั้งโดยสี่พารามิเตอร์ขนส่งสมการ
50% inhibition ( ic50 ) ค่าความเข้มข้นของสารละลายและแตกต่างกันซิน

ขอประทานได้โดยการเปรียบเทียบค่า ic50 ของสารที่มีสูตรต่อไปนี้ : crossreactivity
( % ) ¼ [ ic50 ( สาร ) / ic50 ( ครู ) ]  100 ( เจียง et al . ,
2012 )
2.3 ติดต่อพิมพ์และการตรึงสารพิษ microarray
แผ่นเคลือบ 16 ไนโตรภาพนิ่งอย่างรวดเร็วอยู่ใน q-array
เฉพาะห้องที่มีความชื้นสัมพัทธ์ 60 % E75 % แต่ละ subarray
จำนวน 32 ซ้ำ afb1-bsa 8 ซ้ำ igg-cy3 เมาส์
( การควบคุมการพิมพ์ ) , 4 แบบโมโนโคลนอลแอนติบอดี ( สาร Anti -
ควบคุมบวก ) และ 4 ซ้ำ ( 2% ใน PBS
( ดิน ) ขนาดเฉลี่ยของแต่ละสร้างจุด
ประมาณ 200 มิลลิเมตรหลังจากการพิมพ์ microarray ภาพนิ่งที่อุณหภูมิ
4  C เป็นเวลาอย่างน้อย 24 ชั่วโมง ก่อนใช้
2.4 . ขั้นตอน microarray สารพิษ
เป็นทางอ้อมคือการแข่งขันในแต่ละ
ย่อยเรย์หลังจากแก้ไขเฉพาะห้องบนสไลด์ แล้วสไลด์เป็น
บล็อก 100 มิลลิลิตรของ BSA 2% ใน PBS เป็นเวลา 1 ชั่วโมงและล้าง 2 ครั้ง
กับ pbst ( 0.01 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ที่มี 0.0027 M และ M NaCl KCl
0.137 , pH 7.4 ,25  C 0.01 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) Tween 20 ) 50 ml preincubated
ส่วนผสมของโซลูชั่นมาตรฐานสารในความเข้มข้นต่างๆ
กับโมโนโคลนอล anti-afb1 ( 0.19 mg / ml ) ในกลุ่ม 1% pbst
เพิ่มภาพนิ่ง บ่มเป็นเวลา 30 นาทีที่ 37

C
3  ตามล้าง 50 มิลลิลิตรของ Alexa Fluor ® 647 ป้องกันเมาส์ IgG
( 1 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร
1 ) 1:5000 ( v / v ) ใน ( 1 ) pbst เพิ่ม 45 นาที 37


Cแล้วสไลด์เป็นระดับที่ 3000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 3 นาทีที่ 4

C
หลังสามตัว . สไลด์แห้งถูกสแกนที่ 635 nm ความยาวคลื่น 532 nm และ
กับสแกนความละเอียด 10 มิลลิเมตร
ขั้นตอนทั้งหมดเสร็จใน 3 ชั่วโมง ระยะเวลา