To confirm presence, microorganisms were stained with fresh
4,6-diamidino-2-phenylindole dihydrochloride (DAPI) staining
solution (100mM Tris–HCl [pH 7.2], 0.9M NaCl, and
25 mg DAPI per 1mL H2O) for 2 min. Fluorescence of stained
microorganismswas visualized using an upright epifluorescence
microscope (Nikon model E-600, Melville, NY) equipped with
a digital CCD camera (Spot Advanced RT Monochrome, Diagnostic
Instruments, Sterling Heights, MI). Digital images were
captured and exported for analysis with MetaMorph Imaging
software (version 4.6, Universal Imaging Corp., Downingtown
PA). All paraffin surfaces were examined at 40× magnification
and an average often random microscope fields (images)
were collected from each chip to ensure a total count of at
least 250 objects from each paraffin surface. Semi-automated
image analysis included manual thresholding with and without
the use of the unsharp mask for enhanced edge detection of
objects, followed by integrated morphometry analysis of a suite
of parameters.
เพื่อยืนยันการปรากฏตัวของจุลินทรีย์ที่ถูกย้อมด้วยสีสด
4, 6 diamidino-2-phenylindole dihydrochloride (DAPI)
การย้อมสีการแก้ปัญหา(100 มม Tris-HCl [พีเอช 7.2], โซเดียมคลอไรด์ 0.9 เมตรและ
25 มิลลิกรัมต่อ 1 mL DAPI H2O) เป็นเวลา 2 นาที . เรืองแสงของสี
microorganismswas มองเห็นการใช้ epifluorescence
ตรงกล้องจุลทรรศน์(Nikon รุ่น E-600, เมลวิลล์, นิวยอร์ก)
พร้อมกับกล้องดิจิตอลที่CCD (จุดขาวดำ RT ขั้นสูง,
การวินิจฉัยเครื่องมือ, Sterling Heights, MI) ภาพดิจิตอลที่ถูกจับและส่งออกสำหรับการวิเคราะห์ที่มีการถ่ายภาพ MetaMorph ซอฟแวร์ (รุ่น 4.6, ยูนิเวอร์แซถ่ายภาพคอร์ป, ดาวนิงตันPA) ทุกพื้นผิวพาราฟินมีการตรวจสอบที่ 40 ×ขยายและโดยเฉลี่ยมักสาขากล้องจุลทรรศน์แบบสุ่ม(ภาพ) ที่ถูกเก็บรวบรวมจากแต่ละชิปเพื่อให้แน่ใจว่าการนับรวมอย่างน้อย 250 วัตถุจากพื้นผิวแต่ละพาราฟิน กึ่งอัตโนมัติการวิเคราะห์ภาพรวม thresholding คู่มือที่มีและไม่มีการใช้หน้ากากไม่ชัดในการตรวจหาขอบที่เพิ่มขึ้นของวัตถุตามด้วยการวิเคราะห์morphometry บูรณาการของชุดของพารามิเตอร์
การแปล กรุณารอสักครู่..