Leaves were ground to a fine powder

Leaves were ground to a fine powder in liquid nitrogen and mixed with an equal volume of 2×SDS sample buffer (0.125 M Tris-HCl, pH 6.8, 4% SDS, 20% glycerol, 10% 2 mercaptoethanol, 0.01% bromophenol blue). The homogenized sample was incubated at 95°C for 5 min and centrifuged for 5 min at 14,000 rpm. Equal volumes of each supernatant were loaded into wells of a 12% SDS-PAGE gel and subjected to electrophoresis at 4 V/cm. Proteins separated by the gel were transferred to an Immobilon-P PVDF membrane
(Millipore, MA USA) using a wet-type blotting apparatus followed by incubation in TBE blocking solution with 5% skimmed milk for 1 h. HA-PYR1 and p19-HA proteins were detected using an anti-HA monoclonal antibody conjugated with peroxidase (Roche, Basel Switzerland). Venus protein was detected using the anti-Green Fluorescent Protein (GFP)
polyclonal antibody (Abcam, Cambridge, UK) and the antirabbit IgG peroxidase-linked antibody (GE Healthcare, Little Chalfont, UK) as the primary and secondary antibodies,
respectively. Bands were visualized using the enhanced chemiluminescence (ECL) prime reagent (GE Healthcare) according to manufacturer’s instructions.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ใบไม้ก็จะเป็นผงละเอียดในไนโตรเจนเหลว และผสม ด้วยปริมาณเท่ากับ 2 × SDS อย่างบัฟเฟอร์ (0.125 M ทริสเรทติ้ง HCl, pH 6.8, 4% SDS กลีเซอร 20%, 10% 2 mercaptoethanol, 0.01% bromophenol blue) ตัวอย่าง homogenized เป็นกลุ่ม incubated ที่ 95° C สำหรับ 5 นาที และ centrifuged ใน 5 นาทีที่ 14000 รอบต่อนาที วอลุ่มเท่าของ supernatant ละถูกโหลดลงในบ่อของเจ SDS-หน้า 12% และอยู่ภายใต้การ electrophoresis ใน 4 V / ซม.โดยเจโปรตีนถูกโอนย้ายไปเมมเบรน PVDF Immobilon-P(มาก MA USA) ใช้เครื่อง blotting ชนิดเปียกตาม ด้วยฟักตัวในบล็อกด้วยนมขาดมันเนย 5% h. 1 ฮา PYR1 และโปรตีน p19 HA TBE พบโดยใช้การต่อต้านฮา monoclonal แอนติบอดีกลวงกับ peroxidase (โร บาเซิลสวิตเซอร์แลนด์) วีนัสโปรตีนพบโดยใช้การป้องกันสีเขียวเรืองแสงโปรตีน (GFP)polyclonal แอนติบอดี (Abcam เคมบริดจ์ สหราชอาณาจักร) และ antirabbit ที่ IgG แอนติบอดีเชื่อมโยง peroxidase (GE สุขอนามัย ชาร์ฟอร์นเซนน้อย UK) เป็นแอนตี้หลัก และรองตามลำดับ วงมี visualized ใช้ที่พิเศษ chemiluminescence (ECL) นายกรีเอเจนต์ (GE สุขภาพ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ใบมาบดให้เป็นผงละเอียดในไนโตรเจนเหลวและผสมกับปริมาณที่เท่ากันของ 2 ×บัฟเฟอร์ตัวอย่าง SDS (0.125 M Tris-HCl, pH 6.8, 4% SDS, กลีเซอรีน 20%, 10% 2 mercaptoethanol 0.01% bromophenol สีฟ้า) . กลุ่มตัวอย่างที่หดหายถูกบ่มที่ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีและปั่นเป็นเวลา 5 นาทีที่ 14,000 รอบต่อนาที ปริมาณที่เท่ากันของแต่ละใสถูกโหลดลงในหลุมของเจล 12% SDS-PAGE และยัดเยียดให้อิที่ 4 V / cm โปรตีนที่แยกจากกันโดยเจลถูกย้ายไปยังเมมเบรน PVDF Immobilon-P
(คซาชูเซตส์สหรัฐอเมริกา) โดยใช้เครื่องช่วยซับชนิดเปียกตามด้วยการบ่มในการแก้ปัญหาการปิดกั้น TBE 5% นมไขมันต่ำเป็นเวลา 1 ชั่วโมง HA-PYR1 และโปรตีน P19-HA ถูกตรวจพบโดยใช้แอนติบอดีต่อต้าน HA ผันกับ peroxidase (Roche, บาเซิลวิตเซอร์แลนด์) โปรตีนวีนัสถูกตรวจพบโดยใช้ต่อต้านโปรตีนเรืองแสงสีเขียว (GFP)
แอนติบอดีโพลี (Abcam เคมบริดจ์, สหราชอาณาจักร) และ antirabbit IgG แอนติบอดี peroxidase เชื่อมโยง (GE Healthcare เล็ก ๆ น้อย ๆ Chalfont สหราชอาณาจักร)
เป็นแอนติบอดี้ประถมศึกษาและมัธยมศึกษาตามลำดับ วงดนตรีที่ได้รับการมองเห็นการใช้ที่เพิ่มขึ้น chemiluminescence (ECL) สารสำคัญ (GE Healthcare) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ใบพื้นเพื่อผงละเอียดในไนโตรเจนเหลว และผสมกับปริมาณเท่ากับ 2 × SDS ตัวอย่างบัฟเฟอร์ ( 0.125 เมตรโดย HCl , pH 6.8 , 4 % SDS , 20 % กลีเซอรอล 10 % 2 mercaptoethanol โบรโมฟีน 0.01 % , สีฟ้า ) การบดตัวอย่างที่บ่มที่อุณหภูมิ 95 องศา C เป็นเวลา 5 นาทีและไฟฟ้าสำหรับ 5 นาทีที่ 10 , 000 รอบต่อนาทีปริมาณเท่ากันของแต่ละน่านถูกโหลดลงในหลุมของเจล SDS-PAGE 12% และภายใต้วิธีที่ 4 โวลท์ / เซนติเมตร โปรตีน แยกด้วยเจลถูกย้ายไป
immobilon-p เมมเบรน PVDF ( มิลลิ , MA USA ) ใช้ชนิดเปียก blotting เครื่องมือตามบ่มในทีบีบล็อกโซลูชั่น 5% นม 1 hha-pyr1 และโปรตีน p19 ฮาถูกตรวจพบโดยใช้โมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อต้านฮาเปอร์ออกซิเดส ( conjugated กับโรช , Basel สวิตเซอร์แลนด์ ) ดาวศุกร์ถูกตรวจพบการใช้โปรตีนเรืองแสงสีเขียว ( ป้องกันโปรตีน GFP )
ใช้แอนติบอดี ( ABCAM , เคมบริดจ์ , UK ) และ antirabbit peroxidase แอนติบอดี IgG เชื่อมโยง ( GE Healthcare น้อย , ริดสีดวงทวาร , UK ) เป็นแอนติบอดีประถมศึกษาและมัธยมศึกษา
ตามลำดับรัดมองเห็นการเพิ่มนโยบายแรงงาน ( ECL ) นายกรัฐมนตรีรีเอเจนต์ ( GE Healthcare ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต