Replication protein A (RPA) is the

Replication protein A (RPA) is the main human single-stranded DNA (ssDNA)-binding protein. It is essential for cellular DNA metabolism and has important functions in human cell cycle and DNA damage signaling. RPA is indispensable for accurate homologous recombination (HR)-based DNA double-strand break (DSB) repair and its activity is regulated by phosphorylation and other post-translational modifications. HR occurs only during S and G2 phases of the cell cycle. All three subunits of RPA contain phosphorylation sites but the exact set of HR-relevant phosphorylation sites on RPA is unknown. In this study, a high resolution capillary isoelectric focusing immunoassay, used under native conditions, revealed the isoforms of the RPA heterotrimer in control and damaged cell lysates in G2. Moreover, the phosphorylation sites of chromatin-bound and cytosolic RPA in S and G2 phases were identified by western and IEF analysis with all available phosphospecific antibodies for RPA2. Strikingly, most of the RPA heterotrimers in control G2 cells are phosphorylated with 5 isoforms containing up to 7 phosphates. These isoforms include RPA2 pSer23 and pSer33. DNA damaged cells in G2 had 9 isoforms with up to 14 phosphates. DNA damage isoforms contained pSer4/8, pSer12, pThr21, pSer23, and pSer33 on RPA2 and up to 8 unidentified phosphorylation sites.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

จำลองโปรตีน A (RPA) เป็นตัวหลักมนุษย์เดียวควั่น DNA (ssDNA) -ผูกโปรตีน มันเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการเผาผลาญเซลล์ดีเอ็นเอ และมีฟังก์ชั่นที่สำคัญในวงจรของเซลล์มนุษย์และดีเอ็นเอเสียหายตามปกติ RPA จะขาดไม่ได้สำหรับแม่นยำ homologous recombination (HR) -ซ่อมแซมตามดีเอ็นเอแบ่งสองสแตรนด์ (DSB) และกิจกรรมของกำหนด phosphorylation และการปรับเปลี่ยนอื่น ๆ post-translational HR เกิดขึ้นในระหว่างขั้นตอน S และ G2 ของวงจรเซลล์เท่านั้น Subunits สามทั้งหมดของ RPA ประกอบด้วยไซต์ phosphorylation แต่ชุดแน่นอนไซต์ phosphorylation HR ที่เกี่ยวข้องบน RPA จะไม่รู้จัก ในการศึกษานี้ ความละเอียดสูงรูพรุน isoelectric เน้น immunoassay ใช้สภาวะดั้งเดิม เปิดเผย isoforms heterotrimer RPA ควบคุมและ lysates เซลล์ที่เสียหายใน G2 นอกจากนี้ ไซต์ phosphorylation ของ RPA ผูกโครมาติน และ cytosolic ในระยะ S และ G2 ได้ระบุวิเคราะห์ IEF และตะวันตกกับแอนตี้ phosphospecific มีทั้งหมดสำหรับ RPA2 กว่า ส่วนใหญ่ของ heterotrimers RPA ในเซลล์ควบคุม G2 มี phosphorylated กับ isoforms 5 ประกอบด้วยถึง 7 ฟอสเฟต Isoforms เหล่านี้ได้แก่ RPA2 pSer23 และ pSer33 เซลล์ดีเอ็นเอที่เสียหายใน G2 isoforms 9 กับ 14 ถึงฟอสเฟตได้ ดีเอ็นเอเสียหาย isoforms อยู่ pSer4/8, pSer12, pThr21, pSer23 และ pSer33 RPA2 และ ถึงอเมริกาไม่ phosphorylation 8

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

โปรตีนจำลอง (RPA) คือดีเอ็นเอสายเดี่ยวสายหลักของมนุษย์ (ssDNA) โปรตีน -binding มันเป็นสิ่งสำคัญสำหรับการเผาผลาญดีเอ็นเอของเซลล์และมีหน้าที่สำคัญในวงจรของเซลล์มนุษย์และทำลายดีเอ็นเอการส่งสัญญาณ RPA ที่ขาดไม่ได้สำหรับการรวมตัวเดียวกันที่ถูกต้อง (HR) ดีเอ็นเอชั่พักสองฝั่ง (DSB) ซ่อมแซมและกิจกรรมของถูกควบคุมโดย phosphorylation และการปรับเปลี่ยนการโพสต์แปลอื่น ๆ HR เกิดขึ้นเฉพาะในช่วง S และ G2 ขั้นตอนของวงจรมือถือ ทั้งสามหน่วยย่อยของ RPA มีเว็บไซต์ phosphorylation แต่ชุดที่แน่นอนของเว็บไซต์ phosphorylation บุคคลที่เกี่ยวข้องใน RPA ไม่เป็นที่รู้จัก ในการศึกษานี้ immunoassay ความละเอียดสูงเส้นเลือดฝอย isoelectric เน้นใช้ภายใต้เงื่อนไขพื้นเมืองเปิดเผยไอโซฟอร์มของ heterotrimer RPA ในการควบคุมและ lysates เซลล์ความเสียหายใน G2 นอกจากนี้เว็บไซต์ phosphorylation ของโครมาติผูกพันและ cytosolic RPA ใน S และขั้นตอน G2 ถูกระบุโดยการวิเคราะห์ตะวันตกและ IEF กับแอนติบอดี phosphospecific ทั้งหมดที่มีอยู่สำหรับ RPA2 อย่างยอดเยี่ยมที่สุดของ heterotrimers RPA ในการควบคุมเซลล์ G2 เป็น phosphorylated 5 ไอโซฟอร์มที่มีถึง 7 ฟอสเฟต ไอโซฟอร์มเหล่านี้รวมถึง RPA2 pSer23 และ pSer33 ดีเอ็นเอเสียหายเซลล์ใน G2 มี 9 ไอโซฟอร์มที่มีถึง 14 ฟอสเฟต ไอโซฟอร์มเสียหายของดีเอ็นเอที่มี pSer4 / 8, pSer12, pThr21, pSer23 และ pSer33 ใน RPA2 และถึง 8 เว็บไซต์ phosphorylation ไม่ปรากฏชื่อ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การโปรตีน ( RPA ) เป็นหลัก มนุษย์เดียวควั่นดีเอ็นเอ ( ssdna ) - ปกโปรตีน มันเป็นเรื่องจำเป็นสำหรับการเผาผลาญของเซลล์ดีเอ็นเอ และมีหน้าที่สำคัญในวัฏจักรเซลล์มนุษย์และความเสียหายของดีเอ็นเอส่งสัญญาณเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการเปรียบเทียบ RPA ถูกต้อง ( HR ) - ดีเอ็นเอเส้นคู่แบ่งตาม ( DSB ) ซ่อมและกิจกรรมของมันจะถูกควบคุมโดยปฏิกิริยาฟอสโฟรีเลชันและการปรับเปลี่ยนไปรษณีย์ - แปลอื่น ๆ HR เกิดขึ้นเฉพาะในระหว่างและเฟส G2 ของวัฏจักรของเซลล์ ทั้ง 3 หน่วยของ RPA ประกอบด้วยฟอสโฟริเลชันเว็บไซต์แต่ตั้งค่าที่แน่นอนของ HR ที่เกี่ยวข้องบนเว็บไซต์ ฟอสโฟริเลชัน RPA เป็นไม่รู้จักในการศึกษานี้ มีความละเอียดสูงที่มีเส้นเลือดฝอย Isoelectric สำใช้ภายใต้เงื่อนไขพื้นเมือง ได้แก่ ไอโซฟอร์มของ heterotrimer RPA ในการควบคุม และเซลล์เสียหาย lysates ใน G2 . นอกจากนี้ ฟอสโฟริเลชันเว็บไซต์การมัดและ cytosolic RPA ใน S และ G2 ขั้นตอนกลุ่มตะวันตกและบทสรุปการวิเคราะห์กับแอนติบอดี phosphospecific ที่มีอยู่ทั้งหมดสำหรับ rpa2 .มากที่สุดของ heterotrimers RPA ในการควบคุมเซลล์ G2 ฟอสฟอรีเลเตต 5 ไอโซฟอร์มที่มีถึง 7 ฟอสเฟต . ไอโซฟอร์มเหล่านี้รวมถึง rpa2 pser23 และ pser33 . ดีเอ็นเอเซลล์ที่เสียหายใน G2 มี 9 ไอโซฟอร์มด้วยถึง 14 ฟอสเฟต . ต่อความเสียหายของดีเอ็นเอที่มีอยู่ pser4 / 8 , pser12 pthr21 pser23 , , , และ pser33 บน rpa2 ถึง 8 แห่ง กรุงเทพมหานคร ที่ไม่สามารถระบุได้