Planar lipid bilayers were formed f

Planar lipid bilayers were formed from a solution of synthetic 1-palmitoyl-2-oleoyl-glycero-3-phosphoco line (POPC) and
1-palmitoyl-2-oleoyl-glycero-3-phosphoet hanolaminein (POPE, Avanti Polar Lipids, Birmingham, AL) in ratio 3:1 in
n-decane (Aldrich). The solution was used to paint a bilayer in an aperture of ~150 μm diameter in a Delrin cup (Warner Instruments, Hamden, CT) between symmetric aqueous bathing solutions of 150 mM KCl, 20 mM Hepes, pH 7.2, at 22°C. All salts were ultrapure (>99%) (Aldrich). Bilayer capacitances were in the range of 50–75 pF. After the bilayers were formed, 0.2–0.5 μl of the TRPM8 micellar solution (2 μg/ml) was added to the cis compartment with gentle stirring. Unitary currents were recorded with an integrating patch clampamplifier (Axopatch 200A, Axon Instruments). The trans solution (voltage command side) was connected to the CV 201A head stage input, and the cis solution was held at virtual ground via a pair of matched Ag-AgCl electrodes. Currents through the voltage-clamped bilayers (background conductance

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Planar lipid bilayers were formed from a solution of synthetic 1-palmitoyl-2-oleoyl-glycero-3-phosphoco line (POPC) and 1-palmitoyl-2-oleoyl-glycero-3-phosphoet hanolaminein (POPE, Avanti Polar Lipids, Birmingham, AL) in ratio 3:1 in n-decane (Aldrich). The solution was used to paint a bilayer in an aperture of ~150 μm diameter in a Delrin cup (Warner Instruments, Hamden, CT) between symmetric aqueous bathing solutions of 150 mM KCl, 20 mM Hepes, pH 7.2, at 22°C. All salts were ultrapure (>99%) (Aldrich). Bilayer capacitances were in the range of 50–75 pF. After the bilayers were formed, 0.2–0.5 μl of the TRPM8 micellar solution (2 μg/ml) was added to the cis compartment with gentle stirring. Unitary currents were recorded with an integrating patch clampamplifier (Axopatch 200A, Axon Instruments). The trans solution (voltage command side) was connected to the CV 201A head stage input, and the cis solution was held at virtual ground via a pair of matched Ag-AgCl electrodes. Currents through the voltage-clamped bilayers (background conductance <3 pS) were filtered at the amplifier output (low pass, −3 dB at 10 kHz, 8-pole Bessel response). Data were secondarily filtered at 50 Hz through an 8-pole Bessel filter (950 TAF,Frequency Devices) and digitized at 1 kHz using an analog-to-digital converter (Digidata 1322A, Axon Instruments), controlled by pClamp9 software (Axon Instruments). Single-channel conductance events, all points’ histograms, open probabilities and other parameters were identified and analyzed using the Clampfit9software (Axon Instruments).

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

bilayers ภาพถ่ายไขมันเกิดจากการแก้ปัญหาของสังเคราะห์ 1 palmitoyl-2-oleoyl-glycero-3-phosphoco เส้น (popc) และ
1 palmitoyl-2-oleoyl-glycero-3-phosphoet hanolaminein (POPE, Avanti ขั้วโลกไขมัน, เบอร์มิงแฮม อัล) ในอัตราส่วน 3: 1 ใน
n-decane (ดิช) วิธีการแก้ปัญหาที่ใช้ในการวาด bilayer ในรูรับแสงของ ~ 150 ไมโครเมตรเส้นผ่าศูนย์กลางในถ้วย Delrin (วอร์เนอร์เครื่องมือ, แฮมเดน, CT) ระหว่างวิธีการอาบน้ำด้วยน้ำสมมาตร 150 มิลลิ KCl 20 มิลลิ HEPES ค่า pH 7.2 ที่ 22 ° C เกลือทุกคนบริสุทธิ์พิเศษ (> 99%) (ดิช) bilayer capacitances อยู่ในช่วง 50-75 pF หลังจากที่กำลังก่อตัวขึ้น bilayers, 0.2-0.5 ไมโครลิตรของการแก้ปัญหา TRPM8 micellar (2 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร) ถูกบันทึกอยู่ในช่องที่ถูกต้องกับกวนอ่อนโยน กระแสที่ถูกบันทึกไว้รวมกับแพทช์การบูรณาการ clampamplifier (Axopatch 200A, Axon Instruments) วิธีการแก้ปัญหาทรานส์ (คำสั่งด้านแรงดันไฟฟ้า) เชื่อมต่อกับ CV 201A ป้อนข้อมูลขั้นตอนหัวและแก้ปัญหาที่ถูกต้องถูกจัดขึ้นที่พื้นดินเสมือนจริงผ่านทางคู่ของการจับคู่ขั้ว Ag-AgCl กระแสผ่าน bilayers แรงดันจับยึด (conductance พื้นหลัง <3 PS) ได้รับการกรองที่การส่งออกเครื่องขยายเสียง (ผ่านต่ำ, -3 dB ที่ 10 kHz การตอบสนอง 8 ขั้ว Bessel) ข้อมูลกรองครั้งที่สองที่ 50 เฮิร์ตซ์ผ่าน Bessel 8 ขั้วกรอง (950 TAF อุปกรณ์ความถี่) และดิจิตอล ณ วันที่ 1 เฮิร์ทซ์โดยใช้ตัวแปลงสัญญาณอนาล็อกเป็นดิจิตอล (Digidata 1322A, Axon Instruments) ควบคุมโดยซอฟต์แวร์ pClamp9 (Axon Instruments) . เหตุการณ์ conductance ช่องทางเดียว, histograms ทุกจุด 'ความน่าจะเป็นที่เปิดกว้างและพารามิเตอร์อื่น ๆ ที่ถูกระบุและวิเคราะห์โดยใช้ Clampfit9software (Axon Instruments)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ระนาบลิพิดสองชั้นถูกสร้างขึ้นจากการแก้ไขบรรทัด 1-palmitoyl-2-oleoyl-glycero-3-phosphoco สังเคราะห์ ( popc )
1-palmitoyl-2-oleoyl-glycero-3-phosphoet hanolaminein ( สมเด็จพระสันตะปาปา ลุกขึ้น polar lipids เบอร์มิงแฮม , อัล ) ในอัตราส่วน 3 : 1 ใน
n-decane ( ดิช ) สารละลายที่ใช้ในการวาดสองชั้นในช่องμ ~ 150 เมตรในวันพระถ้วย ( ใช้แฮมวอร์เนอร์ ,CT ) ระหว่างสารละลายสมมาตรอาบน้ำโซลูชั่นของโพแทสเซียม 150 มม. , 20 มม. ฮีเปส , pH 7.2 ที่ 22 องศา ทั้งหมดนี้พบว่าบริสุทธิ์มาก ( > 99% ) ( อัลดริช ) capacitances สองชั้นอยู่ในช่วง 50 - 75 pf . หลังจากที่ฟุ่มเฟือยขึ้น 0.2 และ 0.5 μ L ของ trpm8 ไมเซลล่า โซลูชั่น ( 2 μ g / ml ) ที่ถูกเพิ่มเข้าไปใน CIS ช่องพร้อมอ่อนโยนปลุกเร้ารวมกระแสที่ถูกบันทึกไว้ด้วยการบูรณาการแก้ไข clampamplifier ( axopatch 200a เครื่องมือแอกซอน ) ทรานส์ โซลูชั่น ( ด้านควบคุมแรงดันไฟฟ้า ) เชื่อมกับ CV 201a หัวเวทีป้อนข้อมูลและ CIS โซลูชั่นจัดขึ้นที่พื้นเสมือนผ่านคู่จับคู่โดย 0.46% ขั้วไฟฟ้ากระแสผ่านแรงดันหนีบผักหนอง ( พื้นหลังรูป < 3 PS ) กรองที่แอมป์ออก ( ผ่านต่ำ − 3 dB ที่ 10 kHz 8-pole เบสเซลตอบกลับ ) จำนวนครั้งที่สองกรองที่ 50 Hz ผ่านกรองเบสเซล 8-pole ( อุปกรณ์ความถี่ 950 TAF ) และดิจิทัลที่ 1 kHz โดยใช้การแปลงสัญญาณอนาล็อกเป็นดิจิตอล ( digidata 1322a เครื่องมือแอกซอน )ควบคุมโดยซอฟต์แวร์ pclamp9 ( เครื่องมือแอกซอน ) เหตุการณ์ระบบช่องทางเดียวทุกจุด ' ฮิสโตแกรมความน่าจะเป็น , เปิดและพารามิเตอร์อื่น ๆระบุ และวิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้ clampfit9software
( เครื่องมือแอกซอน )