fixed jejunal tissue sampleswere em

fixed jejunal tissue sampleswere embedded in paraffin. Then, 3 μmsections
were cut and placed onto silanized slides. After deparaffinized in
xylene and rehydrated in decreasing concentrations of ethanol, the
slideswere placed in citrate buffer (pH 6.0) and subjected to microwave
for antigen retrieval. To block endogenous peroxidase activity, slides
were incubated with 3% H2O2 for 20 min at room temperature. After
being washed in phosphate buffer saline (PBS, 0.01 M pH 7.2), the sections
were incubated in normal rabbit serum for 30 min. Subsequently,
rabbit anti-pig sIgA polyclonal primary antibodies (Invitrogen) was diluted
1:100 in PBS buffer (0.01 M, pH 7.2) and incubated overnight at
4 °C. Thereafter, the sections were incubated with a biotinylated secondary
goat anti-rabbit antibody for 10 h at 4 °C, followed by a 45-
min incubation with avidin-biotin complex (ABC) reagent for 30 min
at roomtemperature. The sectionswerewashed three times in PBS during
all incubations. 3,3′-diaminobenzidine (DAB) was used as substrate
to visualize the bound antibodies and the sections were counterstained
with hematoxylin and mounted with glycerol gelatin. Finally, the sections
were imaged using a Leica DMIRB microscope (Leica, Germany),
and the image of each slice at least in 5 different fields was analyzed.
The average integrated optical density of the positive products was detected
by using the Image-pro plus software (version 6.0 forWindows)
at 200× magnification.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

sampleswere jejunal ถาวรเนื้อเยื่อที่ฝังตัวในพาราฟิน แล้ว 3 μmsectionssilanized ตัด และวางลงบนภาพนิ่งได้ หลังจาก deparaffinized ในไซลีนและ rehydrated ในลดความเข้มข้นเอทานอล การslideswere วางในซิเตรตบัฟเฟอร์ (pH 6.0) และขึ้นอยู่กับไมโครเวฟสำหรับ antigen เรียก การบล็อกกิจกรรมภายนอกฮอส ภาพนิ่งได้รับการกก 3% H2O2 20 นาทีที่อุณหภูมิห้อง หลังจากล้างในน้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (PBS, 0.01 M pH 7.2), ส่วนได้รับการกกในกระต่ายปกติซีรั่ม 30 นาที ต่อมากระต่ายหมูป้องกัน sIgA โพลีแอนติหลักแอนติบอดี (Invitrogen) ถูกเจือจาง1: 100 ใน PBS buffer (0.01 M, pH 7.2) และได้รับการกกค้างคืนที่4 องศาเซลเซียส หลังจากนั้น ส่วนได้รับการกกกับ biotinylated ที่รองแอนติบอดีต่อต้านกระต่ายแพะสำหรับ 10 ชม.ที่ 4 ° C ตาม ด้วย 45-นาทีบ่มกับ avidin-ไบโอตินคอมเพล็กซ์ (ABC) น้ำยา 30 นาทีที่ roomtemperature Sectionswerewashed สามครั้งใน PBS ในระหว่างincubations ทั้งหมด 3, 3′-diaminobenzidine (DAB) ถูกใช้เป็นพื้นผิวเห็นภาพขอบ แอนติบอดีและส่วนถูก counterstainedกับ hematoxylin และเมาท์กับกลีเซอรอลวุ้น ในที่สุด ส่วนถ่ายภาพโดยใช้กล้องจุลทรรศน์ DMIRB ไล (ไลก้า เยอรมนี),และภาพของแต่ละชิ้นน้อยในสาขาต่าง ๆ 5 พบเฉลี่ยรวมแสงความหนาแน่นของผลิตภัณฑ์บวกโดยใช้ภาพ pro plus ซอฟต์แวร์ (สำหรับ Windows รุ่น 6.0)ที่กำลังขยาย 200 ×

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

คง sampleswere เนื้อเยื่อ jejunal ฝังตัวอยู่ในพาราฟิน จากนั้น 3 μmsections
ถูกตัดและวางลงบนสไลด์ silanized หลังจาก deparaffinized ใน
ไซลีนและคืนรูปในการลดความเข้มข้นของเอทานอลที่
slideswere วางไว้ในบัฟเฟอร์ซิเตรต (pH 6.0) และเป็นไปไมโครเวฟ
สำหรับการเรียกแอนติเจน เพื่อป้องกันการกิจกรรม peroxidase ภายนอกภาพนิ่ง
ถูกบ่มกับ 3% H2O2 สำหรับ 20 นาทีที่อุณหภูมิห้อง หลังจากที่
ถูกล้างในน้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (พีบีเอส 0.01 M ค่า pH 7.2) ส่วน
ถูกบ่มในซีรั่มกระต่ายปกติเป็นเวลา 30 นาที ต่อจากนั้น
กระต่ายป้องกันหมู sIgA โพลีแอนติบอดีปฐมภูมิ (Invitrogen) ถูกเจือจาง
1: 100 ในพีบีเอสบัฟเฟอร์ (0.01 M ค่า pH 7.2) และบ่มค้างคืนที่
4 องศาเซลเซียส หลังจากนั้นเป็นต้นมาส่วนถูกบ่มกับ biotinylated รอง
แอนติบอดีต่อต้านแพะกระต่าย 10 ชั่วโมงที่ 4 องศาเซลเซียสตามด้วย 45-
บ่มนาที avidin-ไบโอตินที่ซับซ้อน (ABC) สารเป็นเวลา 30 นาที
ที่ roomtemperature sectionswerewashed สามครั้งในพีบีเอสในช่วง
ฟักตัวของเชื้อทั้งหมด 3,3'-diaminobenzidine (DAB) ถูกนำมาใช้เป็นสารตั้งต้น
ที่จะเห็นภาพแอนติบอดี้ที่ถูกผูกไว้และส่วนที่ถูก counterstained
กับ hematoxylin และติดตั้งที่มีกลีเซอรอลเจลาติน สุดท้ายส่วน
ที่ถูกถ่ายภาพโดยใช้ Leica DMIRB กล้องจุลทรรศน์ (Leica, เยอรมนี)
และภาพของแต่ละชิ้นอย่างน้อยใน 5 สาขาที่แตกต่างได้รับการวิเคราะห์.
เฉลี่ยความหนาแน่นของแสงแบบบูรณาการของผลิตภัณฑ์ในเชิงบวกที่ตรวจพบ
โดยใช้ Plus ภาพ-Pro ซอฟแวร์ (รุ่น 6.0 forWindows)
ที่ 200 ×ขยาย

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แก้ไข jejunal เนื้อเยื่อเพื่อฝังในพาราฟิน แล้ว 3 msections μที่ถูกตัดและวางลงบน silanized สไลด์ หลังจาก deparaffinized ในไซลีนลดลง และได้ทำการ รีไฮเดรทมความเข้มข้นของเอทานอล ,slideswere วางไว้ในซิเตรตบัฟเฟอร์ ( pH 6.0 ) และภายใต้ ไมโครเวฟสำหรับค้นแอนติเจน บล็อกกิจกรรมในทั้งภาพนิ่งถูกบ่มกับ 3% H2O2 เป็นเวลา 20 นาที ที่อุณหภูมิห้อง หลังจากการล้างในฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ ( PBS 0.01 M pH 7.2 ) , ส่วนถูกบ่มในซีรั่มกระต่ายปกติ 30 นาทีต่อมาหมูกระต่าย ต่อต้านการใช้แอนติบอดี ( SIGA Invitrogen ) เจือจางการศึกษาใน PBS buffer ( 0.01 M pH 7.2 ) และบ่มค้างคืนที่4 ° C ) , ส่วนที่ถูกบ่มกับไล มัธยมศึกษาแพะ กระต่าย แอนติบอดีต่อต้าน 10 H 4 ° C ตามด้วย 45 -มินบ่มด้วยวิดินไบโอติน คอมเพล็กซ์ ( ABC ) ใช้ 30 นาทีที่อุณหภูมิห้อง . การ sectionswerewashed 3 ครั้งในช่องระหว่างทั้งหมด incubations . 3 , 3 ’ - diaminobenzidine ( ป้าย ) ใช้เป็นวัตถุดิบเห็นภาพผูกแอนติบอดีและบางส่วนถูก counterstainedกับย้อมติดกับกลีเซอรอลและเจลาติน ในที่สุด ส่วนเป็นภาพลักษณ์โดยใช้กล้องจุลทรรศน์ dmirb ไลก้า ( Leica , เยอรมนี )และภาพลักษณ์ของแต่ละชิ้น อย่างน้อยใน 5 สาขาที่แตกต่างกัน คือ วิเคราะห์แบบเฉลี่ยแสง ความหนาแน่นของผลิตภัณฑ์บวกพบโดยการใช้ภาพ โปรพลัสซอฟแวร์ ( รุ่น 6.0 ผลการวิจัย )ที่ 200 ×ขยาย .