The transient gene expression syste

The transient gene expression system using plant protoplasts has become widely used for highthroughput analysis
and functional characterization of genes. In this work we investigated protoplast isolation and green fluorescent protein (GFP) transient transfection and their main affecting factors, such as mannitol concentration in enzymolysis solution,
enzymolysis time, and glycol (PEG) concentration and transfection time, on ‘xintaimici’ cucumber. The results showed that when the enzyme solution had 1.5% cellulase R-10 (w/v), 0.4% macerozyme R-10 (w/v), 0.4mM
2-morpholinoethanesulfonic acid, 10 mM CaCl, 0.1% bovine serum albumin, and was at pH 5.8 with an enzymolysis time of 8 h, the protoplast yield was 6–7 × 106/g fresh weight. Viability was about 90%. GFP was used as the reporter gene to measure protoplast transformation efficiency. When the concentration of PEG4000 was 20% and transfection time was 20
or 30 min, transformation polyethylene M efficiency than 50% and the green fluorescent signal could be detected in the cytoplasm, chloroplasts, and plasma membrane. We show here an efficient PEG-mediated cucumber protoplast transient expression system using GFP reporter gene, laying a technical foundation for future research in cucumber molecular biology.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ระบบแสดงยีนชั่วคราวใช้พลาสต์พืชกลายเป็นอย่างกว้างขวางใช้สำหรับการวิเคราะห์ highthroughput และคุณลักษณะการทำงานของยีน ในงานนี้ เราตรวจสอบแยก protoplast และ fluorescent สีเขียวโปรตีน (GFP) ชั่วคราว transfection และ ปัจจัย affecting ของพวกเขาหลัก เช่นความเข้มข้นของ mannitol ใน enzymolysis enzymolysis เวลา และไกลคอล (PEG) ความเข้มข้นและ transfection เวลา แตงกวา 'xintaimici' ผลลัพธ์แสดงให้เห็นว่าเมื่อมีการแก้ไขเอนไซม์ cellulase 1.5% R-10 (w/v), macerozyme 0.4% (w/v), R-10 0.4 มม.กรด 2-morpholinoethanesulfonic, 10 มม. CaCl, 0.1% วัว serum albumin และที่ pH 5.8 มีเวลา enzymolysis ชม. 8 ผล protoplast ถูก 6-7 × 106/กรัม น้ำหนักสด ชีวิตถูกประมาณ 90% GFP ใช้เป็นยีนข่าววัด protoplast แปลง efficiency เมื่อความเข้มข้นของ PEG4000 20% และเวลา transfection ได้ 20 หรือ 30 นาที efficiency M ลีแปลงมากกว่า 50% และสัญญาณ fluorescent สีเขียวถูกตรวจพบในไซโทพลาซึม chloroplasts และเยื่อ เราแสดงที่นี่รวมแตงกวามีหมุด protoplast นิพจน์ชั่วคราวระบบการใช้ยีน GFP ข่าว วางรากฐานทางเทคนิคสำหรับการวิจัยในอนาคตในแตงกวาอณูชีววิทยา

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ระบบการแสดงออกของยีนชั่วคราวโดยใช้โปรโตพลาได้กลายเป็นพืชที่ใช้กันอย่างแพร่หลายสำหรับการวิเคราะห์ highthroughput
และลักษณะการทำงานของยีน ในงานนี้เราตรวจสอบการแยกโปรโตพลาและชั้นสีเขียว uorescent โปรตีน (GFP) transfection ชั่วคราวและปัจจัยที่มีผลหลักของพวกเขาเช่นความเข้มข้นของแมนนิทอลในการแก้ปัญหา enzymolysis,
enzymolysis เวลาและไกลคอล (PEG) ความเข้มข้นและเวลา transfection ในแตงกวา 'xintaimici' ผลการศึกษาพบว่าเมื่อแก้ปัญหามีเอนไซม์เซลลูเลส 1.5% R-10 (w / v) 0.4% macerozyme R-10 (w / v) 0.4mm
กรด 2 morpholinoethanesulfonic 10 มิลลิแคลเซียมคลอไรด์, 0.1% ซีรั่มอัลบูมิวัว และได้รับการที่ pH 5.8 ที่มีเวลา enzymolysis 8 ชั่วโมงผลผลิตโปรโตพลาเป็น 6-7 × 106 / กรัมน้ำหนักสด มีชีวิตเป็นประมาณ 90% GFP ถูกใช้เป็นยีนนักข่าวในการวัดการเปลี่ยนแปลงโปรโตพลาประสิทธิภาพการไฟ เมื่อความเข้มข้นของ PEG4000 เป็น 20% และเวลา transfection 20
หรือ 30 นาที, การเปลี่ยนแปลงของเอทิลิน M ciency EF ไฟกว่า 50% และสัญญาณ uorescent ชั้นสีเขียวจะได้รับการตรวจพบในพลาสซึม, คลอโรพลาและพลาสม่าเมมเบรน เราจะแสดงที่นี่ EF ไฟเพียงพอแตงกวา PEG-พึ่งโปรโตพลาระบบการแสดงออกชั่วคราวโดยใช้ยีน GFP นักข่าว, การวางรากฐานทางเทคนิคสำหรับการวิจัยในอนาคตในแตงกวาอณูชีววิทยา

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การแสดงออกของยีนชั่วคราวโดยใช้ระบบเอนไซม์พืชได้กลายเป็นที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในการวิเคราะห์ highthroughputและลักษณะการทำงานของยีน งานวิจัยนี้ศึกษาการแยกโปรโตพลาสต์และโปรตีนflสีเขียว uorescent ( GFP ) สำหรับปัจจัยชั่วคราวของพวกเขาหลัก เช่น mannitol ที่ความเข้มข้นใน enzymolysis สารละลายเวลา enzymolysis และไกลคอล ( PEG ) ความเข้มข้นและเวลาสำหรับใน ' ' xintaimici แตงกวา ผลการศึกษาพบว่า เมื่อสารละลายเอนไซม์เซลลูเลส r-10 ได้ 1.5 % ( w / v ) , 0.4% macerozyme r-10 ( w / v ) 0.4 มม.2-morpholinoethanesulfonic กรดกลาง 10 มม. , 0.1% bovine serum albumin และที่ pH 5.8 กับ enzymolysis เวลา 8 ชั่วโมง จำนวนผลผลิต 6 – 7 × 106 / กรัมน้ำหนักสด . ความมีชีวิตอยู่ประมาณ 90% ยีน GFP ถูกใช้เป็นนักข่าวเพื่อวัดประสิทธิภาพการถ่ายทอดโปร EF . เมื่อความเข้มข้นของ peg4000 เป็น 20% และสำหรับเวลาอายุ 20หรือ 30 นาทีการเปลี่ยนแปลงชนิด M EF จึงประสิทธิภาพกว่า 50% และflสีเขียว uorescent สัญญาณอาจถูกตรวจพบใน cytoplasm ปล้อน , และพลาสมาเมมเบรน เราแสดงที่นี่เป็น EF จึง cient หมุดโปร ) แตงกวาชั่วคราวโดยใช้ระบบการแสดงออกยีน GFP นักข่าว วางรากฐานทางเทคนิคสำหรับการวิจัยในอนาคต ในการศึกษาชีววิทยาระดับโมเลกุล แตงกวา