Bacterial strains and inoculum prep

Bacterial strains and inoculum preparation
Five strains of E. coli O157:H7 isolated from different sources: E009 (beef), EO932 (cattle), O157-1 (beef), O157-4 (human), and O157-5 (human) were used in this study. All bacterial strains were stored at −70 °C in tryptic soy broth (TSB) (Difco, Becton Dickinson, Sparks, MD, USA) containing 20% glycerol. Prior to the experiment, cultures were activated at least twice by growing them overnight in 10 mL of TSB at 37 °C. Later each bacterial stain was cultured separately in 10 mL of TSB and kept on a shaking incubator at 230 rpm and 37 °C for 16 h. Following the incubation, cells were harvested by sedimentation either once (4000 × g for 12 min) or resuspended and sedimented three times (3200 × g for 10 min) in sterile phosphate-buffered saline (PBS, pH 7.2) in order to determine the effect of cell harvesting conditions on the photocatalytic disinfection efficacy. The harvested cells were re-suspended in 10 mL PBS and equal volume of each strain suspension were combined to obtain 10 mL of a five strain cocktail containing approximately 108 CFU/mL. Cell concentration was adjusted by measuring the absorbance of bacterial suspension at 600 nm using UV/Vis spectrophotometer (Beckman DU520, Beckman Coulter Inc., Brea, CA, USA) and confirmed by plating 100 μL portions of the appropriate serial dilution on tryptic soy agar (TSA) (Difco Laboratories) plates incubated at 37 °C for 24 h.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สายพันธุ์แบคทีเรียและการเตรียม inoculumสายพันธุ์ที่ห้าของ O157:H7 E. coli ที่แยกต่างหากจากแหล่งต่าง ๆ: E009 (เนื้อ), EO932 (วัว), O157-1 (เนื้อ), O157-4 (บุคคล), และ O157-5 (มนุษย์) ใช้ในการศึกษานี้ สายพันธุ์แบคทีเรียทั้งหมดถูกเก็บไว้ที่ 20% −70 ° C ในซุปถั่วเหลือง tryptic (TSB) (Difco, Becton สัน สปาร์ค MD สหรัฐอเมริกา) ที่ประกอบด้วยกลีเซอร ก่อนทดลอง วัฒนธรรมถูกใช้งานอย่างน้อยสองครั้ง โดยขึ้นไปค้างคืนใน 10 mL ของ TSB ที่ 37 องศาเซลเซียส ในภายหลังแต่ละคราบแบคทีเรียถูกอ่างแยกต่างหากใน 10 mL ของ TSB และเก็บไว้ในการบ่มเพาะวิสาหกิจงก ๆ ที่ 230 rpm และ 37 ° C สำหรับ 16 h ต่อไปนี้คณะทันตแพทยศาสตร์ เซลล์เก็บเกี่ยว โดยการตกตะกอนเมื่อใด (4000 × g สำหรับ 12 นาที) หรือ resuspended และ sedimented 3 เวลา (3200 × g สำหรับ 10 นาที) ในกอซ buffered ฟอสเฟตน้ำเกลือ (PBS, pH 7.2) เพื่อกำหนดลักษณะพิเศษของเซลล์ที่เก็บเกี่ยวเงื่อนไขประสิทธิภาพฆ่าเชื้อกระ เซลล์ harvested ถูกหยุดชั่วคราวอีกครั้งใน 10 mL PBS และปริมาตรเท่าของแต่ละระบบกันสะเทือนต้องใช้ถูกรวมรับ 10 mL ของค็อกเทลประกอบด้วยประมาณ 108 CFU/mL ต้องใช้ห้า ความเข้มข้นของเซลล์ถูกปรับปรุง โดยการวัด absorbance ของระงับเชื้อแบคทีเรียที่ 600 nm โดยใช้เครื่องทดสอบกรดด่าง UV/Vis (Beckman DU520, Beckman Coulter Inc., Brea, CA, USA) และยืนยัน โดยชุบ 100 μL ส่วนของเจือจางประจำที่เหมาะสมบนแผ่นเต้าหู้ tryptic agar (TSA) (ห้องปฏิบัติการ Difco) incubated ที่ 37 ° C ใน 24 ชม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สายพันธุ์แบคทีเรียและการเตรียมหัวเชื้อ
ห้าสายพันธุ์ของเชื้อ E. coli O157: H7 ที่แยกได้จากแหล่งที่มาที่แตกต่างกัน: E009 (เนื้อ), EO932 (วัว) O157-1 (เนื้อ), O157-4 (มนุษย์) และ O157-5 (มนุษย์) ถูกนำมาใช้ในการศึกษานี้ แบคทีเรียทั้งหมดถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -70 ° C ในน้ำซุปถั่วเหลือง tryptic (TSB) (Difco, Becton Dickinson, ประกายไฟ, MD, USA) ที่มีกลีเซอรีน 20% ก่อนที่จะมีการทดลองวัฒนธรรมถูกเปิดใช้งานอย่างน้อยสองครั้งโดยพวกเขาเติบโตค้างคืนใน 10 มลของ TSB ที่ 37 ° C ต่อมาแต่ละคราบแบคทีเรียที่ถูกเลี้ยงแยกต่างหากใน 10 มลของ TSB และเก็บไว้ในตู้อบเขย่า 230 รอบต่อนาทีและ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 16 ชั่วโมง ต่อไปนี้การบ่มเซลล์ที่ถูกเก็บเกี่ยวโดยการตกตะกอนอย่างใดอย่างหนึ่งเพียงครั้งเดียว (4000 ×กรัมเป็นเวลา 12 นาที) หรือ resuspended และตกตะกอนสามครั้ง (3200 ×กรัมเป็นเวลา 10 นาที) ในสารละลายฟอสเฟตบัฟเฟอร์หมัน (พีบีเอสพีเอช 7.2) เพื่อตรวจสอบ ผลกระทบของภาวะเก็บเกี่ยวมือถือในการรับรู้ความสามารถฆ่าเชื้อโรคออกไซด์ เซลล์เก็บเกี่ยวเป็นอีกครั้งที่ลอยอยู่ในพีบีเอส 10 มิลลิลิตรและปริมาณที่เท่ากันของระบบกันสะเทือนแต่ละสายพันธุ์มารวมกันเพื่อให้ได้ 10 มลของค็อกเทลห้าสายพันธุ์ที่มีประมาณ 108 โคโลนี / มิลลิลิตร ความเข้มข้นของเซลล์มีการปรับโดยการวัดการดูดกลืนแสงของสารแขวนลอยแบคทีเรียที่ 600 นาโนเมตรโดยใช้ UV / Vis Spectrophotometer (Beckman DU520, Beckman Coulter อิงค์ Brea, CA, USA) และได้รับการยืนยันโดยการชุบ 100 ไมโครลิตรส่วนของการเจือจางอนุกรมที่เหมาะสมในอาหารเลี้ยงเชื้อถั่วเหลือง tryptic (TSA) (Difco ห้องปฏิบัติการ) แผ่นบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สายพันธุ์แบคทีเรีย 5 สายพันธุ์
การเตรียมเชื้อ Escherichia coli ที่แยกได้จากแหล่งต่าง ๆเป็นสมาชิก ) : e009 ( เนื้อ ) , eo932 ( ปศุสัตว์ ) o157-1 ( เนื้อ ) , o157-4 ( มนุษย์ ) และ o157-5 ( มนุษย์ ) สถิติที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ สายพันธุ์ของแบคทีเรียทั้งหมดที่อุณหภูมิ 70 องศา C −ในซุปถั่วเหลืองอาหาร ( TSB ) ( difco เบคตอน , ดิกคินสัน , ประกายไฟ , MD , USA ) ความเข้มข้น 20% รอล . ก่อนการทดลองวัฒนธรรมที่ถูกเปิดใช้งานอย่างน้อยสองครั้ง โดยปลูกไว้ค้างคืน 10 มิลลิลิตรที่อุณหภูมิ 37 องศา วางต่อมาในแต่ละคราบแบคทีเรียเลี้ยงแยก 10 ml ของ TSB และเก็บไว้บนตู้เขย่า 230 รอบต่อนาทีและ 37 ° C เป็นเวลา 16 ชั่วโมง ตามระยะเวลาเซลล์ถูกเก็บเกี่ยวโดยการตกตะกอนด้วยครั้งนึง ( 4 × G 12 นาที ) หรือ resuspended sedimented และสามครั้ง ( 3 × G 10 นาที ) ในฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือปลอดเชื้อ ( PBS , pH 7.2 ) เพื่อศึกษาผลของการเก็บเกี่ยวสภาพเซลล์ต่อประสิทธิภาพการฆ่าเชื้อโรครี .เซลล์ก็จะถูกเก็บเกี่ยวใน 10 PBS ml และขนาดเท่ากัน แต่ละสายพันธุ์มีรวมกันให้ได้ 10 มิลลิลิตร ช่วงล่างของห้าสายพันธุ์ค็อกเทลที่มีประมาณ 108 CFU / มล. ปริมาณเซลล์มีการปรับ โดยวัดการดูดกลืนแสงของ bacterial suspension ที่ 600 nm ใช้ UV / VIS Spectrophotometer ( du520 เบคแมน เบคแมน คูลเตอร์ , อิงค์ , เบรีย , แคลิฟอร์เนีย ,สหรัฐอเมริกา ) และได้รับการยืนยันโดยการชุบ 100 μ l ส่วนของการอนุกรมที่เหมาะสมบนอาหารวุ้นถั่วเหลืองอาหาร ( TSA ) ( difco ห้องปฏิบัติการ ) แผ่นบ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 24 ชั่วโมง