Antibody production. TSWV isolate

Antibody production.
TSWV isolate KP (TSWV-KP) from pepper was propagated in Nicotiana rustica after mechanical inoculation with TSWV-KP particles.
For TSWV purification, the systemic leaves of the inoculated N. tabacum plants were harvested after 14 days inoculation and the leaf tissues.
The purified TSWV-KP particles were verified using SDS-PAGE analysis, according to standard protocol. Polyclonal antibodies were produced in rabbits by immunization with the purified TSWV-KP conjugates.
1. the immunogen (0.1 mg) was suspended in 2 ml of 0.5× phosphate buffer saline (PBS), emulsified with 2 ml Freund’s complete adjuvant and injected subcutaneously in two rabbits for each immunogen.
2. after the first immunization using 0.1 mg TSWV virions in 2 ml of 0.5× PBS buffer emulsified with Freund’s incomplete adjuvant.
3. About 10–12 ml serum was collected from the marginal ear vein, 14 days after each booster.
4. Sera that ex¬hibited a strong immunogenic response were further purified by affinity chromatography using ProteinA affinity chromatog¬raphy columns and dialyzed against 10 mM sodium phosphate buffer (pH 7.2)

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การผลิตแอนติบอดี TSWV แยก KP (TSWV-KP) จากพริกไทยถูกเผยแพร่ในอลมา Nicotiana หลัง inoculation กลกับอนุภาค TSWV KP สำหรับฟอก TSWV ใบไม้พืช tabacum inoculated ตอนเหนือระบบถูกเก็บเกี่ยวหลังจาก 14 วัน inoculation และเนื้อเยื่อของใบ อนุภาค TSWV KP บริสุทธิ์ถูกตรวจสอบโดยใช้การวิเคราะห์องค์กรหน้า ตามโพรโทคอลมาตรฐาน แอนตี้ polyclonal ถูกผลิตในกระต่าย โดยรับวัคซีนกับ conjugates TSWV KP บริสุทธิ์ 1 (0.1 มิลลิกรัม). immunogen ที่ถูกระงับใน 2 ml ของ 0.5 ×ฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ (PBS), emulsified กับประเมินสมบูรณ์ 2 ml Freund และฉีด subcutaneously ในกระต่ายที่สองสำหรับแต่ละ immunogen 2. หลังจากรับวัคซีนแรกใช้ virions TSWV มิลลิกรัม 0.1 ml 2 บัฟเฟอร์ PBS × 0.5 emulsified กับของ Freund ประเมินไม่สมบูรณ์3. เกี่ยวกับ 10 – 12 ml เซรั่มถูกรวบรวมจากหลอดเลือดดำหูกำไร 14 วันหลังจากแต่ละบูสเตอร์ 4. นโยบายที่ ex¬hibited คำตอบ immunogenic แข็งแรงขึ้นเพิ่มเติมบริสุทธิ์ โดย chromatography ความสัมพันธ์โดยใช้คอลัมน์ chromatog¬raphy ความเกี่ยวข้องของ ProteinA และ dialyzed กับ 10 mM โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.2)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การผลิตแอนติบอดี.
TSWV แยก KP (TSWV-KP) จากพริกถูกแพร่กระจายใน Rustica Nicotiana หลังจากฉีดวัคซีนกลที่มีอนุภาค TSWV-KP.
สำหรับการทำให้บริสุทธิ์ TSWV ใบระบบของเอ็นพืช tabacum เชื้อเก็บเกี่ยวหลังจากการฉีดวัคซีน 14 วันและใบ เนื้อเยื่อ.
บริสุทธิ์อนุภาค TSWV-KP ได้รับการยืนยันโดยใช้การวิเคราะห์ระบบ SDS-PAGE ตามโปรโตคอลมาตรฐาน แอนติบอดีโพลีมีการผลิตในกระต่ายโดยการฉีดวัคซีนกับบริสุทธิ์ conjugates TSWV-KP.
1 แอนติเจน (ที่ 0.1 มก.) ถูกระงับใน 2 มิลลิลิตร 0.5 ×น้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (พีบีเอส) emulsified 2 มล. สมบูรณ์แบบเสริม Freund และฉีดเข้าใต้ผิวหนังในสองกระต่ายสำหรับแต่ละแอนติเจน.
2 หลังจากการฉีดวัคซีนครั้งแรกที่ใช้ 0.1 มิลลิกรัม virions TSWV 2 มล. 0.5 ×พีบีเอสบัฟเฟอร์ emulsified กับเสริมที่ไม่สมบูรณ์ของ Freund.
3 เกี่ยวกับซีรั่ม 10-12 มล. ถูกเก็บรวบรวมจากหลอดเลือดดำหูขอบ 14 วันหลังจากที่สนับสนุนแต่ละ.
4 ซีรั่มที่ex¬hibitedการตอบสนองภูมิคุ้มกันที่แข็งแกร่งบริสุทธิ์ต่อไปโดยใช้ความสัมพันธ์โคคอลัมน์สัมพันธ์ที่ใกล้ชิดและ ProteinA chromatog¬raphy dialyzed กับโซเดียม 10 มิลลิฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.2)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การผลิตแอนติบอดี .
tswv แยก KP ( tswv-kp ) จากพริกไทยถูกขยายพันธุ์ในขนะบ้านหลังกลการอนุภาค tswv-kp .
สำหรับ tswv ฟอกใบทั่วร่างกายของเชื้อเอ็นทาบาคัมพืชเก็บเกี่ยวหลังจาก 14 วัน ( ใบและเนื้อเยื่อ .
tswv-kp อนุภาคถูกตรวจสอบโดยการวิเคราะห์ด้วย SDS-PAGE ,ตามขั้นตอนมาตรฐาน แอนติบอดีที่ผลิตใช้ในกระต่าย โดยการแยกสารประกอบด้วย tswv-kp .
1 รวมทั้ง ( 0.1 มิลลิกรัม ถูกพักงาน 2 ml 0.5 ×ฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ ( PBS ) ที่ใช้กับ 2 ml Freund และสมบูรณ์เสริมฉีด subcutaneously ในกระต่าย 2 ตัวสำหรับแต่ละอิม .
2 หลังจากการใช้ครั้งแรก 01 มิลลิกรัม tswv ไวรัส 2 ml 0.5 × PBS buffer ที่ใช้กับ Freund เป็นสมบูรณ์การพยาบาล .
3 ประมาณ 10 – 12 ml ซีรั่มถูกเก็บจากเส้นเลือดดำหูขอบ 14 วันหลังจากที่แต่ละบูสเตอร์
4 เซรา อดีต¬ hibited แข็งแรง immunogenic ตอบสนองได้บริสุทธิ์โดยวิธีโครมาโทกราฟีสามารถใช้โปรตีนจาก chromatog ¬ raphy คอลัมน์และผ่านกับ 10 มิลลิเมตรโซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.2 )