Antiviral sesquiterpenes from leave

Antiviral sesquiterpenes from leaves of Nicotiana tabacum

Three unreported sesquiterpenes possessing two new skeletons, tabasesquiterpenes A–C (1–3), together with
three known sesquiterpenes (3–6) were isolated from the leaves of Nicotiana tabacum. Their structures were determined
mainly by spectroscopic methods, including extensive 1D- and 2D-NMR techniques. Compounds 1–6
were evaluated for their anti-tobacco mosaic virus (anti-TMV) activities. The results showed that compound 2
exhibited high anti-TMV activity with inhibition rate of 35.2%, which were higher than that of positive control
(ningnanmycin). The other compounds also showed potential anti-TMV activity with inhibition rates in the
range of 20.5–28.6%.


Nicotiana tabacum, tobacco, is a stout herbaceous plant in the
Solanaceae (nightshade family) that originated in the tropical
Americas (South America, Mexico, and the West Indies) and now cultivated
worldwide as the primary commercial source of tobacco, which
is smoked or chewed as a drug for its mild stimulant effects [1–2].
N. tabacum is a kind of plant containing most complex secondary
metabolites in nature. It was reported that more than 2549 kinds of
chemical compositions have been identified in N. tabacum, while up to
8700 kinds of chemical compositions were found in tobacco and tobacco
substitutes and cigarette smoke (including combustion products) [3].
Our previous investigation of this species led to the discovery of a
number of new compounds that showed various bioactivities, such as
anti-HIV-1, anti-TMV, and cytotoxicity by our groups [4–9]. In continuing
efforts to utilize N. tabacum and identify bioactive natural products,
the phytochemistry investigation of the leaves of Yunyan 201 (a variety
of N. tabacum) led to the isolation of three new (1–3) and three known
(4–6) sesquiterpenes, of which possessed two unprecedented skeletons
(one skeleton for compounds 1 and 2 while the other for compound 3).
This paper deals with the isolation, structural elucidation, and anti-TMV
activity of these compounds.

2. Experimental
2.1. General experimental procedures
UV spectra were obtained using a Shimadzu UV-2401A spectrophotometer.
A Tenor 27 spectrophotometer was used for scanning IR
spectroscopy with KBr pellets. 1D- and 2D-NMR spectra were recorded
on DRX-500 spectrometers with TMS as internal standard. Unless
otherwise specified, chemical shifts (δ) were expressed in ppm with
reference to the solvent signals. HRESIMS was performed on an API
QSTAR time-of-flight spectrometer, or a VG Autospec-3000 spectrometer,
respectively. Preparative HPLC was performed on a Shimadzu
LC-8A preparative liquid chromatograph with a ZORBAX PrepHT GF
(21.2 mm × 25 cm, 7 μm) column or a Venusil MP C18 (20 mm ×
25 cm, 5 μm) column. Column chromatography was performed with
Si gel (200–300 mesh, Qing-dao Marine Chemical, Inc., Qingdao,
China). The fractions were monitored by TLC, and spots were visualized
by heating Si gel plates sprayed with 5% H2SO4 in EtOH.
2.2. Plant material
The leaves of tobacco (Yunyan 201, a variety of N. tabacum L widely
planted in Yunnan) were collected from Yuxi County, Yunnan Province,
P. R. China, in September 2014.
2.3. Extraction and isolation
The air-dried and powdered leaves of N. tabacum (6.0 kg) were
extracted four times with 70% aqueous acetone (3 × 12 L) at room
temperature and filtered. The solvent was evaporated in vacuo, and the
crude extract was dissolved in H2O and partitioned with EtOAc. The
EtOAc partition (220 g) was applied to silica gel (200–300 mesh) column
chromatography, eluting with a CHCl3–(CH3)2CO gradient system
(10:0, 9:1, 8:2, 7:3, 6:4, 5:5, 0:10), to give six fractions A–F. Further separation
of fraction B (9:1, 25.4 g) by silica gel column chromatography,
eluted with CHCl3–(CH3)2CO (14:1–1:1), yielded mixtures B1–B6.
Fraction B2 (11:1, 4.1 g) was subjected to silica gel column chromatography
using petroleum ether–acetone and semi-preparative HPLC (40%
Acetonitrile-H2O, flow rate 12 mL/min) to give 1 (11.2 mg), 2 (8.5 mg),
and 3 (9.7 mg). Fraction B2 (9:1, 5.1 g) was subjected to silica gel
column chromatography using petroleum ether–acetone and semipreparative
HPLC (37% Acetonitrile-H2O, flow rate 12 mL/min) to give
4 (10.8 mg), 5 (12.4), and 6 (14.4).
Tabasesquiterpene A (1): obtained as pale-yellow gum; UV (MeOH),
λmax (log ε) 210 (4.17), 252 (3.56) nm; IR (KBr) νmax 3386, 2926, 1605,
1538, 1446, 1142, 1057, 857 cm−1
; 1
H NMR and 13C NMR data (C5D5N,
500 and 125 MHz, respectively), Table 1; ESIMS (negative ion mode)
m/z 233 [M − H]−; HRESIMS (negative ion mode) m/z 233.1549
[M − H]− (calcd 233.1542 for C15H21O2).
Tabasesquiterpene B (2): obtained as pale-yellow gum; UV (MeOH),
λmax (log ε) 210 (4.22), 257 (3.63) nm; IR (KBr) νmax 3386, 2928, 1657,
1600, 1546, 1433, 1158, 1064, 936 cm−1
; 1
H NMR and 13C NMR data
(C5D5N, 500 and 125 MHz, respectively), Table 1; ESIMS (negative
ion mode) m/z 247 [M − H]−; HRESIMS (negative ion mode) m/z
247.1327 [M − H]− (calcd 247.1334 for C15H20O3).
Tabasesquiterpene (3): obtained as pale-yellow gum; UV (MeOH),
λmax (log ε) 210 (4.09), 250 (3.50) nm; IR (KBr) νmax 3386, 2,926,130,
1602, 1535, 1450, 1136, 1063, 865 cm−1
; 1
H NMR and 13C NMR data
(C5D5N, 500 and 125 MHz, respectively), Table 1; ESIMS (negative
ion mode) m/z 233 [M − H]−; HRESIMS (negative ion mode) m/z
233.1546 [M − H]− (calcd 233.1542 for C15H21O2).
2.4. Anti-MTV assay
TMV (U1 strain) was obtained from the Key Laboratory of Tobacco
Chemistry of Yunnan Province, Yunnan Academy of Tobacco Science,
P. R. China. The virus was multiplied in N. tabacum cv. K326 and
purified as described [10]. The concentration of TMV was determined
as 20 mg/mL with a UV spectrophotometer [virus concentration =
(A260 × dilution ratio) / E1 m
0.1% ,260nm]. The purified virus was kept at
−20 °C and was diluted to 32 μg/mL with 0.01 M PBS before use.
Nicotiana glutinosa plants were cultivated in an insect-free greenhouse.
N. glutinosa was used as a local lesion host. The experiments
were conducted when the plants grew to the 5–6-leaf stage. The tested
compounds were dissolved in DMSO and diluted with distilled H2O
to the required concentrations. A solution of equal concentration of
DMSO was used as a negative control. The commercial antiviral agent
ningnanmycin was used as a positive control.
For the half-leaf method [11], the virus was inhibited by mixing with
the solution of compound. After 30 min, the mixture was inoculated
on the left side of the leaves of N. glutinosa, whereas the right side of
the leaves was inoculated with the mixture of DMSO solution and the
virus as control. The local lesion numbers were recorded 3 or 4 days
after inoculation. Three repetitions were conducted for each compound.
The inhibition rates were calculated according to the formula.
Inhibition rate ð Þ¼ % ½ ð Þ C−T =C 100%
where C is the average number of local lesions of the control and T is the
average number of local lesions of the treatment.
3. Results and discussion
A 70% aq. acetone extract prepared from the leaves of N. tabacum
was partitioned between EtOAc and H2O. The EtOAc layer was subjected
repeatedly to column chromatography on Si gel and preparative HPLC
to afford compounds 1–6. Compounds 1–3 were identified as new
compounds, and being named as tabasesquiterpenes A–C (1–3). Their
structures are shown in Fig. 1, and the 1
H and 13C NMR data of
compounds 1–3 are listed in Table 1. The known compounds, comparing
with the published literatures, were identified as balsamiferine
B (4) [12], samboginone (5) [13], and ent-4(15)-eudesmen-1α,11-diol
(6) [14].
Compound 1, obtained as pale-yellow gum, had a molecular formula
C15H22O2 as established by the quasimolecular ion peak observed using
HRESIMS measurement at m/z 233.1549 [M − H]− (calcd for 233.1542),
suggesting 5º of unsaturation. The UV spectrum showed absorption
maxima at 210 and 252 nm, and the IR spectrum showed absorption
bands at 3386, 1605, and 1538 cm−1
, indicating the presence of hydroxy
group(s), and an aromatic ring. The HMQC data of 1 showed a
pentasubstituted aromatic ring [δC 152.6 (s, C-4), 124.8 (s, C-5), 134.4
(s, C-6), 144.2 (s, C-8), 132.7 (s, C-9), and δC 122.3 (d, C-7), δH 6.80
(s, H-7)], three methyls [δH 1.17 (s, H3-13 and H3-14), 2.20 (s, H3-15)],
and five methylene groups (including an oxygenated one) [δH 2.90
(s, H2-1), 2.82 (s, H2-3), 2.64 (t, H2-10), 1.83 (m, H2-11), 3.54 (t, H2-12)]
(Table 1). The 1
H–1
H COSY correlations of H2-10/H2-11/H2-12, which
showed the connection pattern of C-10–C-11–C-12, together with
the HMBC correlations of H-10 with C-4, C-5, and C-6; of H-11 with C-5,
determined the presence of a 3-hydroxypropyl group being located
at C-5 (Fig. 2). The HMBC correlations of H-15 with C-5 (δC 131.9), C-6
(δC 113.2), and C-7 (δC 122.2); of H-7 with C-5 and C-6, suggested that
C-15 was connected with the aromatic ring at C-6. The phenolic hydroxyl
group (δH 10.3, s) was located at C-4 on the basis of its correlation with
C-4. The strong HMBC correlations from H-13, H-14 to C-1, C-2, C-3
indicated that the C-13 and C-14 were connected with the quaternary
carbon C-2 (δc 40.1, s); furthermore, the weak correlations from H-13,
H-14 to C-8 and C-9, as well as the correlations from H-3 to C-4, C-8
and C-9; from H-1 to C-8, C-9, and C-7, suggested that C-2 was connected
with the aromatic ring by the linkages C-2–C-3–C-9 and
C-2–C-1–C-8. Therefore, the structure of 1 was established and named
as tabasesquiterpene A.
Compound 2 gave an [M − H]− peak at m/z 247.1327 in the
HRESIMS (negative ion mode), consistent with a molecular formula of
C15H20O3. The 1D NMR data of 1 showed a close relationship to those
of 2, which indicated that they should possess the same skeleton
(Table 1). It was found that the major differences of their NMR data
were the disappearance of a methylene group and the addition of a
carbonyl group. The reason f

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ยาต้านไวรัส sesquiterpenes จากใบไม้ Nicotiana tabacumSesquiterpenes ไม่ถูกรายงานสามมีสองใหม่โครงกระดูก tabasesquiterpenes A-C (1-3), พร้อมกับsesquiterpenes ชื่อดัง 3 (3 – 6) ได้แยกต่างหากจากใบไม้ Nicotiana tabacum มีกำหนดโครงสร้างของพวกเขาโดยวิธีการด้าน รวมเทคนิค D - และ 2D-NMR 1 อย่างละเอียด สาร 1 – 6ถูกประเมินสำหรับกิจกรรมของไวรัส (anti-TMV) ยาสูบป้องกันกระเบื้องโมเสค แสดงให้เห็นผลลัพธ์ที่ผสม 2จัดแสดงกิจกรรมต้าน TMV สูงยับยั้งอัตรา 35.2% ซึ่งสูงกว่าที่ควบคุมบวก(ningnanmycin) สารประกอบอื่น ๆ ยังพบกิจกรรมต้าน TMV มีศักยภาพยับยั้งราคาในการช่วง 20.5 – 28.6%Nicotiana tabacum ยาสูบ เป็นพืช herbaceous stout ในการSolanaceae (ตระกูล nightshade) ที่เป็นต้นกำเนิดในเขตร้อนอเมริกา (อเมริกาใต้ เม็กซิโก และ West Indies) และตอนนี้ cultivatedทั่วโลกเป็นแหล่งค้าหลักของยาสูบ ที่รมควัน หรือ chewed เป็นยาสำหรับผลกระตุ้นอ่อน [1-2]Tabacum ตอนเหนือเป็นชนิดของพืชที่ประกอบด้วยความซับซ้อนมากที่สุดรองmetabolites ในธรรมชาติ มีรายงานชนิดนั้นมากกว่า ๒๕๔๙ ของสารเคมีจนได้รับการระบุใน tabacum ตอนเหนือ ในขณะที่ถึงจนเคมี 8700 ชนิดพบในยาสูบและยาสูบทดแทนและควันบุหรี่ (รวมถึงผลิตภัณฑ์เผาไหม้) [3]ของเราก่อนหน้านี้การตรวจสอบชนิดนี้นำไปสู่การค้นพบจำนวนของสารใหม่ที่แสดงฤทธิ์ทางชีวภาพต่าง ๆ เช่นป้องกัน-HIV-1 ต้าน TMV ทาง cytotoxicity โดยกลุ่มของเรา [4-9] ในการดำเนินการต่อไปพยายามใช้ tabacum ตอนเหนือ และระบุธรรมชาติกรรมการกการสอบสวนพฤกษเคมีของใบไม้ 201 Yunyan (ความหลากหลายของตอนเหนือ tabacum) นำไปแยกสามใหม่ (1-3) และสามที่รู้จักกันsesquiterpenes (4-6) ซึ่งต้องมีโครงกระดูกเป็นประวัติการณ์ที่สอง(หนึ่งโครงกระดูกในสารประกอบ 1 และ 2 ในขณะที่อื่น ๆ สำหรับ 3 ผสม)กระดาษนี้เกี่ยวข้องกับการแยก elucidation โครงสร้าง การต่อต้าน TMVกิจกรรมของสารประกอบเหล่านี้2. ทดลอง2.1 การขั้นตอนการทดลองที่ทั่วไปแรมสเป็คตรา UV ได้รับมาใช้เป็นเครื่องทดสอบกรดด่าง Shimadzu UV 2401Aเครื่องทดสอบกรดด่าง 27 เทเนอร์ที่ใช้สำหรับการสแกน IRกกับ KBr ขี้ บันทึก 1 D - และ 2D-NMR แรมสเป็คตราในตรวจ DRX 500 กับ TMS เป็นมาตรฐานภายใน เว้นแต่มิฉะนั้น ระบุ เคมีกะ (δ) ถูกแสดงใน ppm มีอ้างอิงกับสัญญาณเป็นตัวทำละลาย HRESIMS ทำตาม API การสเปกโตรมิเตอร์เวลาของเที่ยวบิน QSTAR หรือสเปกโตรมิเตอร์ VG Autospec-3000ตามลำดับ ทำตาม Shimadzu preparative HPLCLC-8A preparative เหลว chromatograph กับ GF PrepHT เป็น ZORBAXคอลัมน์ (μm 21.2 mm × 25 ซม. 7) หรือ Venusil MP C18 (× 20 มม.25 ซม. 5 μm) คอลัมน์ คอลัมน์ chromatography ทำด้วยเจซี (200 – 300 ตาข่าย ชิงดาวทะเลเคมี Inc. ชิงเต่าChina). The fractions were monitored by TLC, and spots were visualizedby heating Si gel plates sprayed with 5% H2SO4 in EtOH.2.2. Plant materialThe leaves of tobacco (Yunyan 201, a variety of N. tabacum L widelyplanted in Yunnan) were collected from Yuxi County, Yunnan Province,P. R. China, in September 2014.2.3. Extraction and isolationThe air-dried and powdered leaves of N. tabacum (6.0 kg) wereextracted four times with 70% aqueous acetone (3 × 12 L) at roomtemperature and filtered. The solvent was evaporated in vacuo, and thecrude extract was dissolved in H2O and partitioned with EtOAc. TheEtOAc partition (220 g) was applied to silica gel (200–300 mesh) columnchromatography, eluting with a CHCl3–(CH3)2CO gradient system(10:0, 9:1, 8:2, 7:3, 6:4, 5:5, 0:10), to give six fractions A–F. Further separationof fraction B (9:1, 25.4 g) by silica gel column chromatography,eluted with CHCl3–(CH3)2CO (14:1–1:1), yielded mixtures B1–B6.Fraction B2 (11:1, 4.1 g) was subjected to silica gel column chromatographyusing petroleum ether–acetone and semi-preparative HPLC (40%Acetonitrile-H2O, flow rate 12 mL/min) to give 1 (11.2 mg), 2 (8.5 mg),and 3 (9.7 mg). Fraction B2 (9:1, 5.1 g) was subjected to silica gelcolumn chromatography using petroleum ether–acetone and semipreparativeHPLC (37% Acetonitrile-H2O, flow rate 12 mL/min) to give4 (10.8 mg), 5 (12.4), and 6 (14.4).Tabasesquiterpene A (1): obtained as pale-yellow gum; UV (MeOH),Λmax (ล็อกε) 210 (4.17) (3.56) 252 nm IR (KBr) νmax 3386, 2926, 16051538, 1446, 1142, 1057, 857 cm−1; 113C และ H NMR NMR ข้อมูล (C5D5N500 และ 125 MHz ตามลำดับ), ตารางที่ 1 ESIMS (โหมดไอออนลบ)m/z 233 [M − H] − HRESIMS (โหมดไอออนลบ) m/z 233.1549[M − H] − (ปี 233.1542 ใน C15H21O2)บี Tabasesquiterpene (2): รับเป็นหมากฝรั่งสีเหลืองจาง UV (ทานอลΛmax (ล็อกε) 210 (4.22) 257 (3.63) nm IR (KBr) νmax 3386, 2928, 16571600, 1546, 1433, 1158, 1064, 936 cm−1; 1ข้อมูล NMR H NMR และ 13C(C5D5N, 500 และ 125 MHz ตามลำดับ), ตารางที่ 1 ESIMS (ลบที่โหมดไอออน) m/z 247 [M − H] − HRESIMS (โหมดไอออนลบ) m/z− [M − H] 247.1327 (ปี 247.1334 ใน C15H20O3)Tabasesquiterpene (3): รับเป็นหมากฝรั่งสีเหลืองจาง UV (ทานอลΛmax (ล็อกε) 210 (4.09) 250 (3.50) nm IR (KBr) νmax 3386, 2,926,1301602, 1535, 1450, 1136, 1063, 865 cm−1; 1ข้อมูล NMR H NMR และ 13C(C5D5N, 500 และ 125 MHz ตามลำดับ), ตารางที่ 1 ESIMS (ลบที่โหมดไอออน) m/z 233 [M − H] − HRESIMS (โหมดไอออนลบ) m/z− [M − H] 233.1546 (ปี 233.1542 ใน C15H21O2)2.4 การวิเคราะห์ป้องกันเอ็มTMV (ต้องใช้ U1) ได้รับจากห้องปฏิบัติการคีย์ของยาสูบเคมีวิทยาศาสตร์สถาบันยาสูบ ยูนนานP. R. China ไวรัสถูกคูณในตอนเหนือ tabacum พันธุ์ K326 และบริสุทธิ์ที่อธิบาย [10] กำหนดความเข้มข้นของ TMVเป็น 20 mg/mL มีเครื่องทดสอบกรดด่างเป็น UV [ไวรัสเข้มข้น =(อัตราส่วนเจือจาง A260 ×) / E1 m0.1%, 260nm] มีเก็บเชื้อบริสุทธิ์ที่−20 ° C และถูกทำให้เจือจางเพื่อ μg 32 mL ด้วย PBS 0.01 M ก่อนใช้Nicotiana glutinosa พืชที่ปลูกในเรือนกระจกปราศจากแมลงGlutinosa ตอนเหนือถูกใช้เป็น host ภายในแผล การทดลองได้ดำเนินเมื่อพืชโตไประยะ 5 – 6 ใบ การทดสอบสารละลายใน DMSO และผสมกับ H2O กลั่นเพื่อความเข้มข้นที่ต้องการ ปัญหาของความเข้มข้นเท่าของDMSO ถูกใช้เป็นตัวควบคุมค่าลบ ตัวแทนยาต้านไวรัสเพื่อการค้ามีใช้ ningnanmycin เป็นตัวควบคุมบวกสำหรับวิธีครึ่งใบ [11], ไวรัสถูกห้าม โดยผสมกับโซลูชั่นของสารประกอบ หลังจาก 30 นาที ส่วนผสม inoculatedทางด้านซ้ายของใบไม้ glutinosa ตอนเหนือ ในขณะที่ด้านขวาของใบไม้มี inoculated มีส่วนผสมของ DMSO และไวรัสเป็นตัวควบคุม หมายเลขภายในแผลได้รับการบันทึกวันที่ 3 หรือ 4หลังจาก inoculation นั้น ทำซ้ำสามได้ดำเนินการในแต่ละบริเวณราคายับยั้งคำนวณได้ตามสูตรยับยั้งอัตราðÞ¼%½ðÞ C−T = C 100%ที่ C เป็นจำนวนเฉลี่ยของท้องถิ่นได้ของตัวควบคุม และ Tจำนวนเฉลี่ยของท้องถิ่นได้รับการรักษา3. ผลลัพธ์ และสนทนาสารสกัดจากอะซีโตน 70% aq. ที่เตรียมจากใบไม้ tabacum ตอนเหนือที่กั้นระหว่าง EtOAc และ H2O ชั้น EtOAc ที่ถูกต้องซ้ำ ๆ กับคอลัมน์ chromatography เจซีและ preparative HPLCการจ่ายสาร 1 – 6 ระบุสาร 1 – 3 เป็นใหม่สาร และการตั้งชื่อเป็น tabasesquiterpenes A-C (1-3) ของพวกเขาแสดงโครงสร้างใน Fig. 1, 1H และ 13C ข้อมูล NMR ของสาร 1 – 3 แสดงในตารางที่ 1 สารชื่อดัง การเปรียบเทียบมี literatures ประกาศ ระบุเป็น balsamiferineSamboginone (5) [13], และเอนท์-4 (15) -eudesmen-1α, 11-diol, B (4) [12](6) [14]สารประกอบ 1 รับเป็นที่เหงือกสีเหลืองจาง มีสูตรโมเลกุลสังเกต C15H22O2 ก่อตั้งขึ้น โดยสูงสุด quasimolecular ไอออนโดยใช้วัด HRESIMS ที่− [M − H] 233.1549 m/z (ปีสำหรับ 233.1542),แนะนำ 5º ของ unsaturation สเปกตรัมรังสียูวีแสดงให้เห็นว่าการดูดซึมแมกที่ 210 และ 252 nm และดูดซึมอินฟราเรดสเปกตรัมแสดงให้เห็นว่าวงที่ 3386, 1605 และไปรษณีย์ที่: cm−1แสดงสถานะการออนไลน์ของ hydroxyกลุ่ม และแหวนหอม ข้อมูล HMQC 1 แสดงให้เห็นว่าการpentasubstituted หอมแหวน [δC 152.6 (s, C-4), (s, C-5), 124.8 134.4(s, C-6), (s, C-8), 144.2 132.7 (s, C-9), และ δC 122.3 (d, C-7), δH 6.80(s, H 7)], [δH ความ 1.17 (s, H3-13 และ H3 14), 2.20 (s, H3-15)], 3 methylsและเมทิลีนได 5 กลุ่ม (รวมถึงเป็น oxygenated) [δH 2.90(s, H2-1), 2.82 (s, H2-3), (t, H2-10), 2.64 1.83 (m, H2-11), (t, H2-12) 3.54](ตาราง 1) 1H-1โคซี่ H สัมพันธ์ของ H2-10/H2-11/H2-12 ที่แสดงให้เห็นว่ารูปแบบการเชื่อมต่อของ C-10 – C-11 – C-12 กันสัมพันธ์ HMBC H-10 กับ C 4, C-5 และ C 6 H-11 กับซี-5กำหนดสถานะของกลุ่ม 3 hydroxypropyl ถูกตั้งอยู่ที่ C-5 (Fig. 2) สัมพันธ์ HMBC H-15 กับซี-5 (δC 131.9), C-6(ΔC 113.2), และ C-7 (δC 122.2); H-7 กับ C 5 และ C-6 แนะนำที่C-15 ถูกเชื่อมต่อกับวงแหวนหอมที่ C-6 ไฮดรอกซิลฟีนอกลุ่ม (δH 10.3, s) มีอยู่ C 4 โดยใช้ความสัมพันธ์ของกับC-4 สัมพันธ์ HMBC แข็งแรง 13 H, H-14 C-1 ซี 2, C 3ระบุว่า C 13 และ C-14 มีการเชื่อมต่อกับควอเทอร์นารีคาร์บอน C-2 (δc 40.1, s); นอกจากนี้ สัมพันธ์อ่อน H-13H-14 C-8 และซี 9 รวมทั้งความสัมพันธ์ที่ H-3 C-4, C-8และ C-9 H-1-C 8, C-9 และ C-7 แนะนำว่า C-2 ถูกเชื่อมต่อมีแหวนหอมโดยเชื่อมโยง C-2-C-3 – C-9 และC-2-C-1-C-8 ดังนั้น ก่อตั้งขึ้น และตั้งชื่อโครงสร้าง 1เป็น tabasesquiterpene อ.สารประกอบ 2 ให้สูงสุด− [M − H] การที่ m/z 247.1327 ในการHRESIMS (ไอออนลบโหมด), สอดคล้องกับสูตรโมเลกุลของC15H20O3 ข้อมูล NMR 1D 1 แสดงให้เห็นความสัมพันธ์ใกล้ชิดกับ2 ซึ่งระบุว่า พวกเขาควรมีโครงกระดูกเหมือนกัน(ตาราง 1) ก็พบว่าความแตกต่างที่สำคัญของข้อมูล NMRการสูญหายของกลุ่มเมทิลีนไดและการเพิ่มการกลุ่ม carbonyl F เหตุผล

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ไวรัส sesquiterpenes จากใบ Nicotiana tabacum สาม sesquiterpenes รายงานมีสองโครงกระดูกใหม่ tabasesquiterpenes A-C (1-3) ร่วมกับสามsesquiterpenes ที่รู้จักกัน (3-6) ที่แยกได้จากใบ Nicotiana tabacum โครงสร้างของพวกเขาได้รับการพิจารณาเป็นหลักโดยวิธีสเปกโทรสโกรวมทั้งกว้างขวาง 1D- และเทคนิค 2D-NMR สารประกอบที่ 1-6 ได้รับการประเมินสำหรับไวรัสต่อต้านบุหรี่ของพวกเขา (ต่อต้าน TMV) กิจกรรม ผลการศึกษาพบว่าสาร 2 แสดงฤทธิ์ต้าน TMV สูงที่มีอัตราการยับยั้งการ 35.2% ซึ่งสูงกว่าที่ควบคุมบวก(ningnanmycin) สารประกอบอื่น ๆ ยังแสดงให้เห็นกิจกรรมการต้าน TMV ศักยภาพที่มีอัตราการยับยั้งในช่วง20.5-28.6%. Nicotiana tabacum ยาสูบเป็นไม้ล้มลุกอ้วนในSolanaceae (ครอบครัว nightshade) ที่เกิดขึ้นในเขตร้อนอเมริกา (อเมริกาใต้เม็กซิโก และหมู่เกาะอินเดียตะวันตก) และได้รับการปลูกฝังในขณะนี้ทั่วโลกเป็นแหล่งที่มาหลักของการค้ายาสูบซึ่งเป็นรมควันหรือเคี้ยวเป็นยาเสพติดสำหรับผลกระตุ้นอ่อน[1-2]. เอ็น tabacum เป็นชนิดของพืชที่มีมากที่สุดรองซับซ้อนสารในธรรมชาติ มีรายงานว่ามากกว่า 2,549 ชนิดขององค์ประกอบทางเคมีที่ได้รับการระบุไว้ในเอ็นtabacum ในขณะที่ได้ถึง8,700 ชนิดขององค์ประกอบทางเคมีที่พบในใบยาสูบและยาสูบทดแทนและควันบุหรี่(รวมถึงผลิตภัณฑ์ที่เผาไหม้) [3]. การตรวจสอบก่อนหน้านี้ของเรา สายพันธุ์นี้จะนำไปสู่การค้นพบที่จำนวนของสารใหม่ที่แสดงให้เห็นว่าฤทธิ์ทางชีวภาพต่างๆเช่นการป้องกันเอชไอวี-1 ต่อต้าน TMV และเป็นพิษโดยกลุ่มของเรา [4-9] ในการดำเนินการต่อไปความพยายามที่จะใช้ประโยชน์จากเอ็น tabacum และระบุผลิตภัณฑ์ธรรมชาติที่มีฤทธิ์ทางชีวภาพ, การตรวจสอบพฤกษเคมีของใบของ Yunyan 201 (ความหลากหลายของtabacum เอ็น) นำไปสู่การแยกของใหม่สาม (1-3) และสามที่รู้จักกัน(4-6 ) sesquiterpenes ซึ่งมีสองโครงกระดูกเป็นประวัติการณ์(หนึ่งโครงกระดูกสารประกอบที่ 1 และ 2 ขณะที่อื่น ๆ สำหรับสารประกอบ 3). นี้ข้อเสนอที่กระดาษที่มีการแยกการชี้แจงโครงสร้างและต่อต้าน TMV กิจกรรมของสารเหล่านี้. 2 การทดลอง2.1 ขั้นตอนการทดลองทั่วไปสเปกตรัมรังสียูวีที่ได้รับใช้ spectrophotometer Shimadzu UV-2401A. spectrophotometer อายุ 27 ถูกนำมาใช้สำหรับการสแกน IR สเปกโทรสโกกับเม็ด KBr 1D- และสเปกตรัม 2D-NMR ถูกบันทึกไว้ในสเปกโทรมิเตอร์DRX-500 กับ TMS เป็นมาตรฐานภายใน ยกเว้นกรณีที่ระบุเป็นอย่างอื่นการเปลี่ยนแปลงทางเคมี (δ) ถูกนำมาแสดงใน ppm มีการอ้างอิงถึงสัญญาณตัวทำละลาย HRESIMS ได้ดำเนินการใน API QSTAR สเปกโตรมิเตอร์เวลาของเที่ยวบินหรือสเปกโตรมิเตอร์ Autospec VG-3000 ตามลำดับ เตรียม HPLC ได้ดำเนินการใน Shimadzu LC-8A chromatograph ของเหลวเตรียมกับ ZORBAX PrepHT GF (21.2 มม× 25 ซม. 7 ไมครอน) คอลัมน์หรือ Venusil MP C18 (20 มิลลิเมตร× 25 ซม. 5 ไมครอน) คอลัมน์ คอลัมน์ได้ดำเนินการกับเจลศรี (200-300 ตาข่ายชิง dao ทะเลเคมี, Inc, ชิงเต่า, จีน) โดยเศษที่ได้รับการตรวจสอบโดย TLC และจุดที่ได้รับการมองเห็นด้วยความร้อนศรีแผ่นเจลสเปรย์ที่มี5% H2SO4 ใน EtOH. 2.2 วัสดุปลูกใบยาสูบ (Yunyan 201, ความหลากหลายของเอ็น tabacum L กันอย่างแพร่หลายปลูกในมณฑลยูนนาน) ที่ถูกเก็บรวบรวมจากยู่ซีมณฑลมณฑลยูนนานสาธารณรัฐประชาชนจีนในเดือนกันยายนปี 2014 2.3 การสกัดและการแยกใบอากาศแห้งและผง tabacum เอ็น (6.0 กิโลกรัม) ถูกสกัดสี่ครั้งกับ70% อะซีโตนน้ำ (3 × 12 L) ณ ห้องอุณหภูมิและกรอง ตัวทำละลายที่ระเหยได้ในสุญญากาศและสารสกัดถูกละลายใน H2O และแบ่งพาร์ติชันที่มี EtOAc พาร์ทิชัน EtOAc (220 กรัม) ถูกนำไปใช้ซิลิกาเจล (200-300 ตาข่าย) คอลัมน์โครมา, เคลือบด้วย CHCl3- (CH3) ระบบการไล่ระดับสี 2CO (10: 0, 9: 1, 8: 2, 7: 3, 6 : 4, 5: 5, 00:10) เพื่อให้หกเศษส่วน A-F แยกเพิ่มเติมของส่วน B (9: 1, 25.4 กรัม) โดยซิลิกาคอลัมน์เจลชะที่มีCHCl3- (CH3) 2CO (14: 1-1: 1) ผลผสม B1-B6. เศษบี 2 (11: 1, 4.1 กรัม) ก็ยังถูกคอลัมน์ซิลิกาเจลโดยใช้อีเทอร์อะซีโตนปิโตรเลียมและกึ่งเตรียมHPLC (40% Acetonitrile-H2O, อัตราการไหล 12 มิลลิลิตร / นาที) เพื่อให้ที่ 1 (11.2 มก.) 2 (8.5 มก.) และ 3 (9.7 มก.) ส่วนบี 2 (9: 1, 5.1 กรัม) ได้ภายใต้การซิลิกาเจลคอลัมน์โดยใช้อีเทอร์อะซีโตนปิโตรเลียมและsemipreparative HPLC (37% Acetonitrile-H2O, อัตราการไหล 12 มิลลิลิตร / นาที) เพื่อให้4 (10.8 มก.), 5 (12.4 ) และ 6 (14.4). Tabasesquiterpene A (1): ได้รับเป็นหมากฝรั่งอ่อนสีเหลือง รังสียูวี (เมธานอล) λmax (log ε) 210 (4.17), 252 (3.56) นาโนเมตร; IR (KBr) νmax 3386, 2926, 1605, 1538, 1446, 1142, 1057, 857 ซม. 1; 1 H NMR และ 13C NMR ข้อมูล (C5D5N, 500 และ 125 MHz ตามลำดับ) ตารางที่ 1; ESIMS (โหมดไอออนลบ) ม. / z 233 [M - H] -; HRESIMS (โหมดไอออนลบ) ม. / z 233.1549 [M - H] - (calcd 233.1542 สำหรับ C15H21O2). Tabasesquiterpene B (2): ได้รับเป็นหมากฝรั่งอ่อนสีเหลือง รังสียูวี (เมธานอล) λmax (log ε) 210 (4.22), 257 (3.63) นาโนเมตร; IR (KBr) νmax 3386, 2928, 1657, 1600, 1546, 1433, 1158, 1064, 936 ซม. 1; 1 H NMR และ 13C NMR ข้อมูล(C5D5N, 500 และ 125 MHz ตามลำดับ) ตารางที่ 1; ESIMS (ลบโหมดไอออน) ม. / z 247 [M - H] -; HRESIMS (โหมดไอออนลบ) ม. / z 247.1327 [M - H] - (calcd 247.1334 สำหรับ C15H20O3). Tabasesquiterpene (3): ได้รับเป็นหมากฝรั่งอ่อนสีเหลือง รังสียูวี (เมธานอล) λmax (log ε) 210 (4.09), 250 (3.50) นาโนเมตร; IR (KBr) νmax 3386, 2926130, 1,602, 1,535, 1,450, 1,136, 1,063, 865 ซม. 1; 1 H NMR และ 13C NMR ข้อมูล(C5D5N, 500 และ 125 MHz ตามลำดับ) ตารางที่ 1; ESIMS (ลบโหมดไอออน) ม. / z 233 [M - H] -; HRESIMS (โหมดไอออนลบ) ม. / z 233.1546 [M - H] - (calcd 233.1542 สำหรับ C15H21O2). 2.4 ทดสอบต่อต้านเอ็มทีวีTMV (สายพันธุ์ U1) ที่ได้รับจากห้องปฏิบัติการที่สำคัญของยาสูบเคมีของมณฑลยูนนานมณฑลยูนนานของสถาบันยาสูบวิทยาศาสตร์PR จีน ไวรัสที่ได้รับเพิ่มขึ้นอีกในเอ็นพันธุ์ tabacum K326 และบริสุทธิ์ตามที่อธิบายไว้[10] ความเข้มข้นของ TMV ถูกกำหนดถึง20 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรด้วย UV spectrophotometer [ความเข้มข้นของไวรัส = (A260 ×อัตราส่วนในการเจือจาง) / E1 ม0.1%, 260nm] ไวรัสบริสุทธิ์ถูกเก็บไว้ที่-20 องศาเซลเซียสและถูกเจือจางถึง 32 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร 0.01 M พีบีเอสก่อนการใช้งาน. Nicotiana พืช glutinosa ได้รับการปลูกฝังในเรือนกระจกแมลงฟรี. เอ็น glutinosa ถูกใช้เป็นโฮสต์แผลท้องถิ่น การทดลองได้ดำเนินการเมื่อพืชขยายตัวไปยังขั้นตอนที่ 5-6 ใบ ที่ผ่านการทดสอบสารถูกละลายใน DMSO และเจือจางด้วย H2O กลั่นความเข้มข้นที่จำเป็น วิธีการแก้ปัญหาของความเข้มข้นเท่ากับของDMSO ถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมเชิงลบ ตัวแทนต้านไวรัสในเชิงพาณิชย์ningnanmycin ถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมบวก. สำหรับวิธีครึ่งใบ [11] ไวรัสถูกยับยั้งโดยการผสมกับสารละลายของสารประกอบ หลังจาก 30 นาทีส่วนผสมที่ถูกเชื้อทางด้านซ้ายของใบของglutinosa เอ็นในขณะที่ทางด้านขวาของใบได้รับเชื้อที่มีส่วนผสมของการแก้ปัญหาDMSO และไวรัสเป็นตัวควบคุม ตัวเลขแผลท้องถิ่นที่ถูกบันทึกไว้ 3 หรือ 4 วันหลังจากการฉีดวัคซีน สามซ้ำได้ดำเนินการสำหรับแต่ละสารประกอบ. อัตราการยับยั้งจะถูกคำนวณตามสูตร. อัตราการยับยั้งðÞ¼% ½ðÞ C-T = C 100% ที่ซีเป็นจำนวนเฉลี่ยของรอยโรคในท้องถิ่นของการควบคุมและ T เป็นค่าเฉลี่ยจำนวนของรอยโรคในท้องถิ่นของการรักษา. 3 ผลการทดลองและการอภิปรายAQ 70% สารสกัดจากอะซิโตนที่ทำจากใบของ tabacum เอ็นกั้นระหว่างEtOAc และ H2O ชั้น EtOAc ถูกยัดเยียดซ้ำๆ เพื่อคอลัมน์เจลศรี HPLC และเตรียมที่จะจ่ายสาร1-6 สารประกอบ 1-3 ถูกระบุว่าเป็นใหม่สารประกอบและถูกตั้งชื่อเป็นtabasesquiterpenes A-C (1-3) ของพวกเขาโครงสร้างจะแสดงในรูป 1 และ 1 H และ 13C NMR ข้อมูลของสารประกอบที่1-3 มีการระบุไว้ในตารางที่ 1 สารที่รู้จักกันเมื่อเปรียบเทียบกับการศึกษาต่างที่ถูกระบุว่าเป็นbalsamiferine B (4) [12], samboginone (5) [13] และกิจการ-4 (15) -eudesmen-1α 11 ไดออล(6) [14]. Compound 1 ได้รับเป็นเหงือกซีดสีเหลืองมีสูตรโมเลกุลC15H22O2 ที่จัดตั้งขึ้นตามยอดไอออน quasimolecular สังเกตโดยใช้การวัดที่HRESIMS ม. / z 233.1549 [M - H] - (calcd สำหรับ 233.1542) บอก5ºของไม่อิ่มตัว สเปกตรัมรังสียูวีที่แสดงให้เห็นว่าการดูดซึมสูงสุดที่ 210 และ 252 นาโนเมตรและ IR สเปกตรัมแสดงให้เห็นว่าการดูดซึมวงดนตรีที่3386, 1605 และ 1538 ซม-1 แสดงให้เห็นการปรากฏตัวของไฮดรอกซีกลุ่ม (s), และแหวนหอม ข้อมูล HMQC 1 แสดงให้เห็นว่าหอมแหวนpentasubstituted [δC 152.6 (s, C-4) 124.8 (s, C-5) 134.4 (s, C-6) 144.2 (s, C-8) 132.7 ( s, C-9) และδC 122.3 (ง C-7), δH 6.80 (s, H-7)] สาม methyls [δH 1.17 (s, H3-13 และ H3-14) 2.20 (s, H3-15)] และห้ากลุ่มเมทิลีน (รวมถึงหนึ่งออกซิเจน) [δH 2.90 (s, H2-1) 2.82 (s, H2-3) 2.64 (t, H2-10) 1.83 (เมตร H2 -11) 3.54 (t, H2-12)] (ตารางที่ 1) 1 H-1 H สัมพันธ์โคซี่ของ H2-10 / H2-11 / H2-12 ซึ่งแสดงให้เห็นว่ารูปแบบการเชื่อมต่อของC-10 C-11-C-12 พร้อมกับความสัมพันธ์ของHMBC H-10 ด้วย C -4, C-5, และ C-6; ของ H-11 ด้วย C-5, กำหนดการปรากฏตัวของกลุ่มที่ 3 ไฮดรอกซีถูกตั้งอยู่ที่C-5 (รูปที่. 2) ความสัมพันธ์ HMBC ของ H-15 ด้วย C-5 (δC 131.9), C-6 (δC 113.2) และ C-7 (δC 122.2); ของ H-7 ด้วย C-5 และ C-6 บอกว่าC-15 ได้รับการเชื่อมต่อกับหอมแหวนที่ C-6 ไฮดรอกซิฟีนอลกลุ่ม (δH 10.3 s) ตั้งอยู่ที่ C-4 บนพื้นฐานของความสัมพันธ์ของตนกับ C-4 ความสัมพันธ์ HMBC ที่แข็งแกร่งจาก H-13 H-14 C-1 C-2, C-3 ชี้ให้เห็นว่า C-13 และ C-14 ได้รับการเชื่อมต่อกับไตรมาสคาร์บอนC-2 (δc 40.1, s) นอกจากนี้ความสัมพันธ์ที่อ่อนแอจาก H-13 H-14 C-8 และ C-9 เช่นเดียวกับความสัมพันธ์จาก H-3 กับ C-4 C-8 และ C-9; จาก H-1 กับ C-8, C-9, และ C-7, ชี้ให้เห็นว่า C-2 มีการเชื่อมต่อกับหอมแหวนโดยเชื่อมโยงC-2-C-3-C-9 และC-2-C- 1-C-8 ดังนั้นโครงสร้างของ 1 ได้ก่อตั้งขึ้นและตั้งชื่อเป็นtabasesquiterpene เอCompound 2 ให้ [M - H] - สูงสุดที่ม. / z 247.1327 ในHRESIMS (โหมดไอออนลบ) ให้สอดคล้องกับสูตรโมเลกุลC15H20O3 ข้อมูล 1D NMR 1 แสดงให้เห็นความสัมพันธ์ใกล้ชิดกับผู้ที่2 ซึ่งชี้ให้เห็นว่าพวกเขาควรจะมีโครงกระดูกเดียวกัน(ตารางที่ 1) มันก็พบว่าแตกต่างที่สำคัญของข้อมูล NMR ของพวกเขาได้หายตัวไปของกลุ่มเมทิลีนและนอกเหนือจากที่กลุ่มคาร์บอนิล ฉเหตุผล

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เซสควิเทอร์ปีนมากจากไวรัสใบยาสูบ ( พืช )

สามแต่เซสควิเทอร์ปีนมากมีกระดูกสองใหม่ tabasesquiterpenes เป็น– C ( 1 – 3 ) ร่วมกับ
3 รู้จักเซสควิเทอร์ปีนมาก ( 3 – 6 ) ที่แยกได้จากใบยาสูบ ( พืช ) . โครงสร้างของพวกเขาได้รับการพิจารณา
ส่วนใหญ่โดยวิธีการสเปกโทรสโกปี รวมถึง 1D อย่างละเอียด - และเทคนิค 2d-nmr . สารประกอบ 1 – 6
ศึกษาของพวกเขาต่อต้านยาสูบทำด้วยโมเสคไวรัส ( Anti tmv ) กิจกรรม ผลการศึกษาพบว่าสารประกอบ 2
) สูงต่อต้าน tmv กับกิจกรรมการยับยั้งของ 35.2 เปอร์เซ็นต์ ซึ่งสูงกว่าของ
ควบคุมบวก ( ningnanmycin ) สารประกอบอื่น ๆมีศักยภาพต่อต้านกิจกรรม tmv กับการยับยั้งอัตราในช่วง 20.5 - 28.6 %
.

การคูณ ยาสูบเป็นพืชไม้ล้มลุก อ้วนใน
Solanaceae ครอบครัว Nightshade ) ที่มาในทวีปอเมริกาเขตร้อน
( อเมริกาใต้ เม็กซิโก และอินเดียตะวันตก ) และตอนนี้ปลูก
ทั่วโลกเป็นแหล่งการค้าหลักของยาสูบซึ่ง
คือสูบบุหรี่ หรือเคี้ยวเป็นยาเพื่อกระตุ้นผลของมันอ่อน [ 1 - 2 ]
N ทาบาคัมเป็นชนิดของพืชที่มีความซับซ้อนมากที่สุดรอง
หลายชนิดในธรรมชาติมีรายงานว่ามากกว่า 2549 ประเภท
องค์ประกอบทางเคมีที่ได้รับการระบุ และทาบาคัม ในขณะที่ขึ้น

8 ชนิดขององค์ประกอบทางเคมีที่พบในยาสูบและทดแทนยาสูบ
และบุหรี่ รวมถึงผลิตภัณฑ์การเผาไหม้ ) [ 3 ] .
การสืบสวนของเราก่อนหน้านี้ของสายพันธุ์นี้นำไปสู่การค้นพบของ
จำนวน ใหม่สารประกอบที่แสดงฤทธิ์ทางชีวภาพต่างๆ เช่น
ทำนาย , ป้องกัน tmv และความเป็นพิษต่อเซลล์โดยกลุ่มของเรา 4 ) [ 9 ] ในความพยายามที่จะใช้ต่อไป
. ทาบาคัมและระบุผลิตภัณฑ์ธรรมชาติที่มีฤทธิ์ทางชีวภาพ
, พฤกษเคมีตรวจสอบใบ yunyan 201 ( ความหลากหลาย
( ทาบาคัม ) นำไปสู่การแยกสามใหม่ ( 1 - 3 ) และสามรู้จัก
( 4 – 6 ) เซสควิทเทอร์ปีน ซึ่งครอบครองโครงกระดูก
2 อย่างที่ไม่เคยมีมาก่อน( หนึ่งโครงสำหรับสารประกอบ 1 และ 2 ในขณะที่อื่น ๆสารประกอบ 3 ) .
บทความนี้เกี่ยวข้องกับการแยก หาสูตรโครงสร้าง และต่อต้านกิจกรรมของสารประกอบเหล่านี้ tmv
.

2 ทดลอง
2.1 . ทั่วไปวิธีการ
ทดลองได้รับการใช้แสง UV Shimadzu uv-2401a เตอร์ : อายุ 27 เครื่องใช้สแกนอินฟราเรดสเปกโทรสโกปีกับ
าเม็ด1D - และ 2d-nmr สเปกตรัมได้ถูกบันทึกไว้ใน drx-500
ากับ TMS เป็นมาตรฐานภายใน นอกจาก
07 เคมีกะ ( δ ) มีการแสดงออกใน ppm ร่วมกับ
อ้างอิงสัญญาณตัวทำละลาย hresims คือใช้ API
qstar ครั้ง - ของ - เครื่องสเปกโตรมิเตอร์ หรือ VG autospec-3000 สเปกโตรมิเตอร์
ตามลำดับ โดยเป็นค่าแสดงบน Shimadzu
lc-8a ดของเหลวโครมาโตกราฟกับ zorbax prepht GF
( 21.2 มิลลิเมตร× 25 ซม. , 7 μ M ) คอลัมน์หรือ venusil MP c18 ( 20 มิลลิเมตร×
25 ซม. 5 μ M ) คอลัมน์ คอลัมน์โครมาโทกราฟีแสดงกับ
ศรี เจล ( 200 – 300 ตาข่าย ชิงดาวทะเลเคมี , อิงค์ , ชิงเต่า ,
จีน ) เศษส่วนถูกตรวจสอบโดย TLC และจุดที่เป็นปรากฏการณ์
โดยความร้อนศรีเจลแผ่นพ่นด้วยกรดซัลฟิวริก 10% ในแอลกอฮอล์
2.2 .
วัสดุพืชใบยาสูบ ( yunyan 201 , ความหลากหลายของเอ็นทาบาคัมผมกันอย่างแพร่หลาย
ปลูกในยูนนาน ) ถูกเก็บจาก Yuxi เขตมณฑลยูนนาน ,
PR จีนในเดือนกันยายนปี 2014
2.3 การสกัดและการแยกอากาศแห้งและผงใบ
( ทาบาคัม ( 6.0 กิโลกรัม )
4 เท่า สกัด 70% สารละลายอะซิโตน ( 3 × 12 ลิตร ) ที่อุณหภูมิห้อง
และกรอง . ตัวทำละลายที่ระเหยอยู่ใน vacuo และ
สารสกัดละลายใน h2o และกั้นด้วย etoac .
etoac พาร์ทิชัน ( 220 กรัม ) ใช้ซิลิกาเจล ( 200 – 300 ตาข่าย ) คอลัมน์โครมาโทกราฟี
, hexane ด้วย chcl3 – ( CH3 ) ระบบลาด 2CO
( 10:0 09 : 01 , , 8 : 2 , 7 : 3 , 6 : 4 , 5 : 5 , 0 : 10 ) เพื่อให้ 6 เศษส่วนเป็น–เพิ่มเติมแยกเศษส่วน B
F ( 9 : 1 25.4 กรัม ) โดยซิลิกาเจลคอลัมน์ chromatography ,
ตัวอย่างกับ chcl3 – ( CH3 ) 2CO ( 14 : 1 ( 1 : 1 )หาของผสม B1 และ B2 B6
เศษส่วน ( 11 : 1 , 4.1 กรัม ) ภายใต้
คอลัมน์โครมาโตกราฟฟีโดยใช้ซิลิกาเจลปิโตรเลียมอีเทอร์และอะซิโตนและ HPLC กึ่งเบื้องต้น ( 40 %
acetonitrile-h2o อัตราการไหล 6 มิลลิลิตรต่อนาที ) เพื่อให้ 1 ( 600 มก. ) , 2 ( 8.5 มิลลิกรัม )
3 ( 9.7 มิลลิกรัม ) ส่วนที่ 2 ( 09 : 01 , 5.1 กรัม ) ภายใต้ซิลิกาเจลคอลัมน์โครมาโทกราฟีโดยใช้ปิโตรเลียมอีเทอร์

) อะซิโตนและ semipreparativeHPLC ( 37% acetonitrile-h2o อัตราการไหล 6 มิลลิลิตรต่อนาที ) เพื่อให้
4 ( 10.8 มก. ) , 5 ( 12.4 ) และ 6 ( 14.4 )
tabasesquiterpene ( 1 ) : ได้เป็นฝรั่งสีเหลืองอ่อน ; UV ( เมทิลแอลกอฮอล์ )
λแม็กซ์ ( log ε ) 210 ( 4.17 ) 252 ( 3.56 ) nm ; และ ( KBR ) νแม็กซ์ได้ 3006 , ค.ศ. 1370 ๆ
, , , 786 , 1057 191 ซม. , − 1
1
; H NMR และข้อมูล ( 13C NMR 500 MHz และ c5d5n
, 125 ตามลำดับ ) ตารางที่ 1 ; esims ( โหมดไอออนลบ )
/ M 233 [ H ] Z m −− ;hresims ( โหมดไอออนลบ ) M / Z 233.1549
h [ M ] − ( − Calcd 233.1542 สำหรับ c15h21o2 )
tabasesquiterpene B ( 2 ) : ได้เป็นฝรั่งสีเหลืองอ่อน ; UV ( เมทิลแอลกอฮอล์ )
λแม็กซ์ ( log ε ) 210 ( 4.22 ) 257 ( 3.63 ) nm ; และ ( KBR ) ได้ของνแม็กซ์ , เตือน ,
1 , 694 , 1600 , 1229 , 936 , 1064 cm − 1
1
H NMR และ 13C NMR ข้อมูล
( c5d5n , 500 และ 125 MHz ตามลำดับ ) ตารางที่ 1 ; esims ( โหมดไอออนลบ
) m / z 247 [ m − H ] − ;hresims ( โหมดไอออนลบ ) m / z
247.1327 [ M ] − ( − H Calcd 247.1334 สำหรับ c15h20o3 )
tabasesquiterpene ( 3 ) : ได้เป็นฝรั่งสีเหลืองอ่อน ; UV ( เมทิลแอลกอฮอล์ )
λแม็กซ์ ( log ε ) 210 ( 2 ) , 250 ( 3.50 ) nm ; และ ( KBR ) νแม็กซ์ได้ 2926130
1602 , , 2 , 3 นอน , , เที่ยว , 865 ซม. , − 1
1
H NMR และ 13C NMR ข้อมูล
( c5d5n , 500 และ 125 MHz ตามลำดับ ) ตารางที่ 1 ; esims ( โหมดไอออนลบ
) m / z 233 [ M ] −− H ;hresims ( โหมดไอออนลบ ) m / z
233.1546 [ M ] − ( − H Calcd 233.1542 สำหรับ c15h21o2 ) .
2.4 . tmv ต่อต้านเอ็มทีวี (
( U1 ความเครียดที่ได้รับจากห้องปฏิบัติการวิทยาศาสตร์คีย์ยาสูบ
เคมีของจังหวัดยูนนาน Yunnan Academy of Science , ยาสูบ
PR จีน ไวรัสเป็นทวีคูณ และทาบาคัมพันธุ์ และบริสุทธิ์ตามที่อธิบายไว้ k326
[ 10 ] ความเข้มข้นของ tmv ตั้งใจ
เป็น 20 มก. / มล. กับ UV Spectrophotometer [ ไวรัสเข้มข้น =
( a260 × 2 อัตรา ) / E1 M
0.1% 260nm ] ทำให้ไวรัสถูกเก็บไว้ที่
− 20 ° C และเจือจาง 32 μ g / ml กับ 0.01 M PBS ก่อนใช้
ขนะ glutinosa พืชปลูกในแมลงฟรีเรือนกระจก .
. glutinosa ถูกใช้เป็นโฮสต์ของท้องถิ่น การทดลอง
จำนวนเมื่อพืชเติบโต 5 – 6-leaf เวทีโดย
สารถูกละลายใน DMSO และเจือจางด้วยน้ำกลั่น H2O
เพื่อความเข้มข้นที่ต้องการ โซลูชั่นของความเข้มข้นเท่ากัน
DMSO ที่ใช้เป็นควบคุมลบ โฆษณาไวรัสตัวแทน
ningnanmycin ถูกใช้เป็นตัวควบคุมบวก .
สำหรับครึ่งใบวิธี [ 11 ] , ไวรัสที่ถูกยับยั้งโดยผสมกับ
สารละลายของสารประกอบ หลังจาก 30 นาที ผสมเป็นหัวเชื้อ
บนด้านซ้ายของใบ ( glutinosa ส่วนด้านขวาของ
ใบเป็นเชื้อที่มีส่วนผสมของ DMSO สารละลาย
ไวรัสควบคุม ตัวเลขของประเทศที่ถูกบันทึกไว้ 3 หรือ 4 วัน
หลังจากปลูกเชื้อ สาม repetitions ทดสอบสำหรับสารแต่ละ .
การยับยั้งอัตราคำนวณตามสูตร และอัตราðÞ¼
% C −½ðÞ T = C 100 %
เมื่อ C คือ ค่าเฉลี่ยของจำนวนรอยโรคท้องถิ่นของการควบคุมและ t
จำนวนรอยโรคท้องถิ่นของการรักษา .
3 ผลและการอภิปราย
70% AQ . แบบแยกได้จากใบ ที่ทาบาคัม
ถูกแบ่งระหว่าง etoac และ H2O . etoac ชั้นภายใต้
ซ้ำๆ ให้คอลัมน์โครมาโทกราฟีบนเจลซี =
ซื้อ HPLC และสารประกอบ 1 – 6สารประกอบ 1 – 3 ถูกระบุว่าเป็นสารใหม่
และถูกตั้งชื่อเป็น tabasesquiterpenes เป็น C ( 1 ) ( 3 ) โครงสร้างของพวกเขา
แสดงในรูปที่ 1 และ 1
H และ 13C NMR ข้อมูล
สารประกอบ 1 – 3 มีการระบุไว้ในตารางที่ 1 รู้จักสารประกอบเปรียบเทียบ
กับตีพิมพ์วรรณกรรม ที่ถูกระบุว่าเป็น balsamiferine
b ( 4 ) [ 12 ] samboginone ( 5 ) [ 13 ] และ ent-4 ( 15 ) - eudesmen-1 α 11 ไดออล
( 6 ) [ 14 ] .
สาร 1ได้เป็นฝรั่งสีเหลืองซีด มีสูตรโมเลกุลเป็น
c15h22o2 จัดตั้งขึ้นโดยยอดไอออน quasimolecular สังเกตการวัดค่า
hresims M / Z 233.1549 [ M ] − ( − H Calcd สำหรับ 233.1542 )
5 ºแนะนำความไม่อิ่มตัว . สเปกตรัมการดูดกลืน UV พบ Maxima
ที่ 210 และ 252 นาโนเมตรและ IR สเปกตรัมการดูดกลืน
มีวงดนตรีที่ได้มากกว่า , และๆ cm − 1

บ่งชี้สถานะของไฮดรอกซีกลุ่ม ( s ) , และหอมแหวน ได้ข้อมูลที่ 1 แสดง
pentasubstituted หอมแหวน [ δ C ( S , 152.6 C-4 ) 124.8 ( s ได้ ) , 134.4
( S , c-6 ) 144.2 ( S , c-8 ) 132.7 ( S , c-9 ) และδ C 122.3 ( D เป็น C-7 ) , δ H 6.80
( S , h-7 ) ] , [ 3 methyls 1.17 δ H ( S , และ h3-13 h3-14 ) 2.20 ( S , h3-15 ) ] ,
5 4 กลุ่ม ( รวมทั้งออกซิเจน ) [ δ H 2.90
( S , h2-1 ) 2.82 ( S , h2-3 ) 2.64 ( T , h2-10 ) 1 .83 ( M , h2-11 ) , 3.54 ( T , h2-12 ) ]
( ตารางที่ 1 ) 1
1 h )
H COSY ความสัมพันธ์ของ h2-10 / h2-11 / h2-12 ซึ่ง
แสดงการเชื่อมต่อแบบ c-10 – c-11 –ซี 12 ร่วมกับ
ฤทธิ์ความสัมพันธ์ของ h-10 ซีโฟร์ได้ด้วย , และ c-6 ; h-11 กับ C -
, กำหนดสถานะของกลุ่มจะอยู่ที่ C -
3-hydroxypropyl ( รูปที่ 2 ) ส่วนความสัมพันธ์กับฤทธิ์ของ h-15 C-5 ( δ C 131.9 ) c-6
( δ C 113.2 )และ เป็น C-7 ( δ C 122.2 ) ; h-7 ได้ c-6 ด้วยและพบว่า
c-15 เชื่อมกับวงแหวนอะโรมาติกที่ c-6 . กลุ่มไฮดรอกซิล
ฟีโนลิก ( δ H 10.3 , s ) ตั้งอยู่ที่ C-4 บนพื้นฐานของความสัมพันธ์กับ
ซีโฟว์ แรงฤทธิ์ความสัมพันธ์จาก h-13 h-14 เพื่อ c-1 C-2 , , ,
c-3 พบว่า c-13 C-14 ) และเชื่อมต่อกับคาร์บอน quaternary
C-2 ( δ c โ s ) ; นอกจากนี้ความสัมพันธ์ที่อ่อนแอจาก h-13
h-14 , และเพื่อ c-8 c-9 เช่นเดียวกับความสัมพันธ์จาก h-3 เพื่อ C-4 , และ c-8
c-9 ; จากส่วนที่จะ c-8 c-9 เป็น C-7 , และพบว่า C-2 เชื่อม
กับแหวนหอม โดยเชื่อมโยง c-3 C-2 –––– c-9
C-2 และ c-1 c-8 . ดังนั้น โครงสร้างของ 1 ก่อตั้งและตั้งชื่อ
.
สารประกอบ 2 เป็น tabasesquiterpene ให้ [ M ] −− H สูงสุดที่ m / z 247.1327 ใน
hresims ( โหมดไอออนลบ ) ให้สอดคล้องกับสูตรโมเลกุลของ
c15h20o3 . โค้ด 1D NMR ข้อมูล 1 มีความสัมพันธ์ใกล้ชิดกับพวก
2 ซึ่งระบุว่า พวกเขาควรมี
โครงกระดูกเดียวกัน ( ตารางที่ 1 ) พบว่ามีความแตกต่างที่สำคัญของพวกเขา คุณมีข้อมูล
การหายตัวไปของกลุ่มเมทธิลีนและนอกจากนี้ของ
กลุ่มคาร์บอนิล . เหตุผลที่ฉ