3. Results and discussionHPLC-co-IR

3. Results and discussion
HPLC-co-IRMS system was applied to lemon juice authentication as HPLC allows compounds separation and IRMS, carbon 13 isotope ratio measurement (d13C), with a Liquiface interface that insures eluted organic matter chemical oxidation (co). The main limitation of such a system results from the elution that needs to be performed with water: organic solvents cannot be used as they will be oxidised in the interface, hiding the requested information. Considering this, chromatographic column choice is restricted: a carbohydrate column, with water elution at 80 C, offers a good carbohydrate separation but a relatively poor resolution for organic acid compounds. As a result, the peaks of the two main organic acids, malic and citric, are merged and dissymmetrical. In the following, the term ‘‘organic acids’’ corresponds to citric and malic acids even if for most of the samples the signal corresponds essentially to citric acid as its concentration can be up to 105 times higher (Table S-1); these values determined by capillary electrophoresis (experimental conditions in Chauvet, Poulit, & Medina, 2001; Chabreyrie et al., 2008) are consistent with previously
described ratio citric/malic acids range (Souci et al., 2000; AFNOR, 1986). Previous experiments, conducted with water slightly acidified permanently modified column characteristic, therefore, for new column, a conditioning step (1 h elution with acidic solution [H2SO4] = 3 mmol) is a prerequisite to reproduce this study results. This conditioning modify the column properties as instant polyose hydrolysis in monosaccharide’s is observed; as a result, sucrose signal is not observed on the chromatogram as it is hydrolyzed in glucose and fructose (Fig. 1). This is not a limitation as the analysis of commercial lemon juices with NH2 column (Alltima 5 l, 250  4.6 mm, elution acetonitrile-water, v/v 75/25) using a refractometer as a detector does not detect any sucrose as well: it reveals a complete sucrose hydrolysis in glucose and fructose during juice process conditioning. In Fig. 1, glucose and fructose signal is the superposition of glucose and fructose naturally synthesised and coming from hydrolyzed natural sucrose. d13C values repeatability and reproducibility, performed on organic acids peak, were found to be 0.27‰and 0.41‰, respectively. Moreover, the method accuracy and linearity has been verified with the study of the impact of concentration variation on d13C ratios with a synthetic solution containing citric acid, glucose and fructose mixture (Fig. S-1). In the range 0.5–2.5 g/L, the d13C ratio of the three compounds corresponds (within experimental error) to the target value individually determined by EA-IRMS.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3. ผลลัพธ์ และสนทนาระบบ HPLC-co-IRMS ใช้รับรองน้ำมะนาวเป็น HPLC ให้ IRMS คาร์บอน 13 ไอโซโทปอัตราวัด (d13C), และการแยกสาร ด้วยอินเทอร์เฟซแบบ Liquiface ที่ภัย eluted อินทรีย์เคมีออกซิเดชัน (co) ข้อจำกัดหลักของระบบเช่นผลจาก elution ที่ต้องทำน้ำ: ไม่สามารถใช้อินทรีย์เป็นพวกเขาจะถูก oxidised ในอินเตอร์เฟซ การซ่อนข้อมูลที่ร้องขอได้ พิจารณานี้ เลือกคอลัมน์ chromatographic ถูกจำกัด: คอลัมน์คาร์โบไฮเดรต ที่ มีน้ำ elution ที่ 80 C มีแยกคาร์โบไฮเดรตที่ดีแต่ความละเอียดที่ค่อนข้างยากจนสำหรับสารอินทรีย์กรด ดัง แห่งสองหลักอินทรีย์กรด malic และแอซิด ซิ ทริก ถูกผสาน และ dissymmetrical ในต่อไปนี้ คำว่า "กรดอินทรีย์" ตรงกับกรด malic และแอซิด ซิทริกแม้สำหรับส่วนมากของตัวอย่าง สัญญาณตรงหลักกับกรดซิตริกความเข้มข้นของมี ถึง 105 เวลาสูง (ตาราง S-1); ค่าเหล่านี้ถูกกำหนด โดยเส้นเลือดฝอย electrophoresis (ทดลองสภาพ Chauvet, Poulit, & เมดิ น่า 2001 Chabreyrie et al., 2008) สอดคล้องกับก่อนหน้านี้อธิบายอัตราส่วนกรดแอซิด ซิ ทริก/malic ช่วง (ซูซิโฟร์และ al., 2000 AFNOR, 1986) การทดลองก่อนหน้านี้ ดำเนินการกับน้ำเล็กน้อย acidified คอลัมน์แก้ไขอย่างถาวรลักษณะ ดังนั้น สำหรับคอลัมน์ใหม่ ขั้นตอนปรับ (elution 1 h กับโซลูชันเปรี้ยว [กำมะถัน] = 3 mmol) เป็นข้อกำหนดเบื้องต้นเพื่อสร้างผลการศึกษานี้ ปรับนี้ปรับเปลี่ยนคุณสมบัติของคอลัมน์ที่เป็นไฮโตรไลซ์ polyose ทันทีในของ monosaccharide เป็นสังเกต ดัง สัญญาณซูโครสไม่ย่อยบน chromatogram เป็นมันเป็น hydrolyzed กลูโคสและฟรักโทส (Fig. 1) นี่ไม่ใช่ข้อจำกัดเป็นการวิเคราะห์ของน้ำมะนาวเชิงพาณิชย์กับคอลัมน์ NH2 (l Alltima 5, 250 4.6 มม. elution acetonitrile-น้ำ 75/25 v/v) ใช้ refractometer เป็นเครื่องตรวจจับการป้องกันใด ๆ เช่นซูโครส: มันเผยไฮโตรไลซ์สมบูรณ์ซูโครสกลูโคสและฟรักโทสในน้ำกระบวนการปรับ ใน Fig. 1 สัญญาณกลูโคสและฟรักโทสเป็น superposition ของกลูโคสและฟรักโทส synthesised ธรรมชาติ และมาจากซูโครสธรรมชาติ hydrolyzed ทำซ้ำในค่า d13C และ reproducibility ทำกับกรดอินทรีย์สูง พบเป็น 0.27‰and 0.41‰ ตามลำดับ นอกจากนี้ วิธีการความถูกต้องและแบบดอกไม้ถูกตรวจสอบ มีการศึกษาผลกระทบของการเปลี่ยนแปลงความเข้มข้นอัตราส่วน d13C กับโซลูชันสังเคราะห์ประกอบด้วยแอซิด ซิทริกกรด กลูโคส และฟรักโทสผสม (ฟิก S-1) ในการช่วง 0.5 – 2.5 g/L, d13C อัตราส่วนของสารสามสอดคล้อง (ภายในผิดพลาดทดลอง) กับค่าเป้าหมายทีกำหนด โดย EA IRMS

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3. ผลและการอภิปราย
ระบบ HPLC-ร่วม IRMS ถูกนำไปใช้กับการตรวจสอบน้ำมะนาวเป็นสาร HPLC ช่วยให้การแยกและการ IRMS คาร์บอนวัดอัตราส่วน 13 ไอโซโทป (D13C) กับ Liquiface? อินเตอร์เฟซที่มั่นใจชะอินทรีย์ออกซิเดชันเรื่องสารเคมี (ร่วม) ข้อ จำกัด ที่สำคัญของการดังกล่าวเป็นผลมาจากระบบชะที่จะต้องมีการดำเนินการกับน้ำตัวทำละลายอินทรีย์ที่ไม่สามารถนำมาใช้เป็นพวกเขาจะถูกออกซิไดซ์ในอินเตอร์เฟซ, ซ่อนข้อมูลที่ร้องขอ พิจารณานี้เลือกคอลัมน์โครมาถูก จำกัด : คอลัมน์คาร์โบไฮเดรตที่มีน้ำชะที่ 80 C, บริการแยกคาร์โบไฮเดรตที่ดี แต่ความละเอียดที่ค่อนข้างดีสำหรับสารประกอบกรดอินทรีย์ เป็นผลให้ยอดของทั้งสองกรดอินทรีย์หลักมาลิกและกรดซิตริกมีการควบรวมกิจการและ dissymmetrical ในต่อไปนี้คำว่า '' กรดอินทรีย์ '' สอดคล้องกับมะนาวและกรดมาลิแม้ว่าส่วนใหญ่ของกลุ่มตัวอย่างสัญญาณสอดคล้องกับหลักกรดซิตริกเป็นความเข้มข้นที่สามารถมีได้ถึง 105 ครั้งสูง (ตารางที่ S-1); ค่าเหล่านี้กำหนดโดยฝอย electrophoresis (เงื่อนไขการทดลองใน Chauvet, Poulit และเมดินา, 2001. Chabreyrie et al, 2008) สอดคล้องกับก่อนหน้านี้
ที่อธิบายอัตราส่วนซิตริก / กรด malic ช่วง (. ซูซี่ et al, 2000; AFNOR, 1986) ทดลองก่อนหน้านี้ดำเนินการด้วยน้ำกรดเล็กน้อยลักษณะคอลัมน์แก้ไขอย่างถาวรดังนั้นสำหรับคอลัมน์ใหม่ขั้นตอนที่เครื่อง (1 ชั่วโมงชะด้วยสารละลายกรด [H2SO4] = 3 มิลลิโมล) เป็นสิ่งที่จำเป็นในการทำซ้ำนี้ผลการศึกษา เครื่องนี้ปรับเปลี่ยนคุณสมบัติคอลัมน์ได้อย่างทันทีทันใด polyose จองจำในโมโนแซ็กคาไรด์ของเป็นที่สังเกต; เป็นผลให้สัญญาณซูโครสจะไม่พบใน chromatogram ที่มันถูกไฮโดรไลซ์ในกลูโคสและฟรุกโตส (รูปที่ 1). นี้ไม่ได้ จำกัด เพียงการวิเคราะห์ของน้ำมะนาวในเชิงพาณิชย์ที่มีคอลัมน์ NH2 (Alltima 5 ลิตร, 250? 4.6 มมชะ acetonitrile น้ำ v / v 75/25) โดยใช้ Refractometer เป็นเครื่องตรวจจับไม่พบซูโครสใด ๆ เช่นกัน มันแสดงให้เห็นว่าการย่อยสลายน้ำตาลซูโครสที่สมบูรณ์ในกลูโคสและฟรุกโตสในน้ำผลไม้เครื่องกระบวนการ ในรูป 1, กลูโคสและฟรุกโตสเป็นสัญญาณการทับซ้อนของน้ำตาลกลูโคสฟรุกโตสสังเคราะห์ตามธรรมชาติและมาจากน้ำตาลธรรมชาติไฮโดรไลซ์ ค่า D13C การทำซ้ำและทำซ้ำได้ดำเนินการบนยอดกรดอินทรีย์พบว่ามี 0.27 และ 0.41 ‰‰ตามลำดับ นอกจากนี้ความถูกต้องและวิธีการเชิงเส้นได้รับการยืนยันด้วยการศึกษาผลกระทบของการเปลี่ยนแปลงความเข้มข้นในอัตราส่วน D13C ด้วยสารละลายสังเคราะห์ที่มีกรดซิตริก, กลูโคสและฟรุกโตสส่วนผสม (รูป. S-1) ในช่วง 0.5-2.5 กรัม / ลิตรอัตราส่วน D13C ในสามสอดคล้องสารประกอบ (ภายในข้อผิดพลาดจากการทดลอง) กับค่าเป้าหมายที่กำหนดไว้โดย EA-IRMS

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3 . ผลลัพธ์และระบบ Co HPLC สนทนา
irms ถูกนำมาใช้เพื่อการตรวจสอบและช่วยให้มะนาวเป็นสารแยก irms คาร์บอน 13 วัดอัตราส่วนไอโซโทป ( d13c ) กับอินเตอร์เฟซที่ liquiface  insures ตัวอย่างการออกซิเดชันทางเคมีอินทรีย์ ( CO ) ข้อจำกัดหลักของระบบดังกล่าวเป็นผลจากชนิดที่ต้องใช้น้ำตัวทำละลายอินทรีย์ที่ไม่สามารถใช้เป็นพวกเขาจะหมดในอินเตอร์เฟซ , ซ่อนข้อมูลที่ร้องขอได้ พิจารณานี้ ตัวเลือกคอลัมน์ : คอลัมน์โครมจำกัดคาร์โบไฮเดรต กับน้ำ ( 80  C มีคาร์โบไฮเดรตที่ดีการแยก แต่ความละเอียดที่ค่อนข้างยากจน กรดอินทรีย์ สารประกอบ ผลคือ ยอดเขาหลักสองกรดอินทรีย์ malic และซิตริก ,จะผสาน และ dissymmetrical . ในต่อไปนี้คำ ' 'organic กรด ' ' สอดคล้องและ malic กรดซิตริก แม้ว่าส่วนใหญ่ของตัวอย่างสัญญาณสอดคล้องหลักกับกรดซิตริกเป็นสมาธิได้ถึง 105 ครั้งสูงกว่า ( ตารางที่สุด ) ; ค่าเหล่านี้กำหนดโดยผู้ชม ( เงื่อนไขการทดลองในโชเว poulit & Medina , 2001 , , ; chabreyrie et al . ,2008 ) สอดคล้องกับก่อนหน้านี้อธิบายอัตราส่วนกรด malic กรด
/ ช่วง ( Souci et al . , 2000 ; afnor , 1986 ) การทดลองก่อนหน้านี้ได้ดำเนินการปรับแก้ไขลักษณะอย่างถาวรกับน้ำเล็กน้อย คอลัมน์ ดังนั้น สำหรับคอลัมน์ใหม่ , ปรับขั้น 1 H ( [ 3 ] = กรดซัลฟิวริกเป็นกรดโซลูชั่นมิลลิโมล ) เป็นสิ่งจำเป็นเพื่อทบทวนผลการศึกษา .ปรับอากาศนี้ปรับเปลี่ยนคอลัมน์คุณสมบัติเป็น polyose ทันทีในการสื่อ คือ สังเกต การใช้สัญญาณไม่พบบนโครมาเป็นไฮโดรไลซ์ในกลูโคสและฟรักโทส ( รูปที่ 1 ) นี้ไม่ได้เป็นข้อจำกัด เช่น การวิเคราะห์เชิงพาณิชย์ผลไม้มะนาวกับคอลัมน์ nh2 ( alltima 5 ลิตร 250  4.6 มม. ( ไนน้ำปริมาตร 75 / 25 ) การใช้ refractometer เป็นเครื่องตรวจไม่พบสารใด ๆรวมทั้ง : พบซูโครสกลูโคสและฟรักโทสการย่อยที่สมบูรณ์ ในระหว่างการปรับกระบวนการผลิตน้ำผลไม้ ในรูปที่ 1 , กลูโคสและฟรักโทสเป็นสัญญาณ superposition ของกลูโคสและฟรักโทสธรรมชาติและสังเคราะห์ไฮโดรไลซ์ซูโครส ที่มาจากธรรมชาติ การตรวจสอบค่าและ d13c ,แสดงบนยอดเขากรดอินทรีย์ พบว่ามี‰ 0.41 ‰และ 0.27 ตามลำดับ นอกจากนี้ วิธีเส้นตรง ความถูกต้อง และได้รับการยืนยันจากการศึกษาผลกระทบของการเปลี่ยนแปลงอัตราส่วนความเข้มข้น d13c กับสังเคราะห์สารละลายที่มีกรดซิตริก , กลูโคสและฟรักโทสผสม ( ไม่ที่สุด ) ในช่วง 0.5 - 2.5 กรัม / ลิตรการ d13c อัตราส่วนของสารประกอบ 3 ( ภายในข้อผิดพลาดทดลอง ) ให้สอดคล้องกับเป้าหมายกำหนดมูลค่าทีละ ea-irms .