The fungal strain T. versicolor DSM

The fungal strain T. versicolor DSM 11269 was purchased from
the German Collection of Microorganisms and Cell Cultures (DSMZ,
Germany) and grown for RNA extraction as reported by Theerachat
et al. (2012). One Shot Escherichia coli TOP10 (Invitrogen) were
used for transformation and amplification of recombinant plasmid
DNA and grown at 37 C on LB containing 50 lg/ml kanamycin
when appropriate. Y. lipolytica strains JMY1212 and JMY1165 (Bordes
et al., 2007) were used respectively for single-copy or multicopy
transformation of lcc1 expression cassette, and the transformants
were subsequently used for laccase production. Transformation
of expression cassettes into Y. lipolytica strains was performed
using the lithium acetate method (Le Dall et al., 1994). Ura-positive
transformants were selected after incubation at 28 C on solid minimal
YNB medium (YNB 0.17% (w/v) of yeast nitrogen base (without
ammonium and without amino acids), 0.5% (w/v) of
ammonium chloride, 1% (w/v) glucose, 0.2% (w/v) casamino acids,
1.5% (w/v) agar, 50 mM phosphate buffer pH 6.8) and after 36 h for
monocopy transformants and 1–2 weeks for multicopy transformants.
For protein production, Y. lipolytica strains were grown in
liquid YTD medium (1% (w/v) yeast extract, 2% (w/v) tryptone,
10% (w/v) glucose and 100 mM phosphate buffer pH 6.8). YPD
medium (1% (w/v) yeast extract, 1% (w/v) Bacto Peptone, 1% (w/
v) glucose) and YPD agar were used
as growth and storage media.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ต้องใช้เชื้อราต. versicolor DSM 11269 ถูกซื้อจากชุดภาษาเยอรมันของจุลินทรีย์และวัฒนธรรมเซลล์ (DSMZประเทศเยอรมนี) และโตสกัดอาร์เอ็นเอตามที่รายงาน โดย Theerachatal. ร้อยเอ็ด (2012) หนึ่งยิง Escherichia coli TOP10 (Invitrogen) ได้ใช้สำหรับการแปลงและการขยายของ recombinant plasmidดีเอ็นเอ และเติบโตที่ 37 C บนปอนด์ประกอบด้วย 50 lg/ml กานามัยซินเมื่อเหมาะสม Y. lipolytica สายพันธุ์ JMY1212 และ JMY1165 (Bordesร้อยเอ็ด al., 2007) ใช้ตามลำดับสำหรับสำเนาเดียวหรือ multicopyการแปลงเทปนิพจน์ lcc1 และ transformantsต่อมาใช้สำหรับผลิต laccase การเปลี่ยนแปลงของนิพจน์แบบเป็นสายพันธุ์ lipolytica Y. ทำใช้วิธี acetate ลิเทียม (เลอ Dall et al., 1994) Ura บวกเลือก transformants หลังจากบ่มที่ 28 C บนทึบน้อยที่สุดYNB กลาง (YNB 0.17% (w/v) ของไนโตรเจนยีสต์ฐาน (โดยไม่ต้องแอมโมเนียและไม่ มีกรดอะมิโน), 0.5% (w/v)แอมโมเนียคลอไรด์ กลูโคส 1% (w/v) กรด casamino 0.2% (w/v)1.5% (w/v) agar, 50 มม.ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 6.8) และ หลัง 36 h สำหรับ1-2 สัปดาห์สำหรับ multicopy transformants และ monocopy transformantsสำหรับการผลิตโปรตีน Y. lipolytica สายพันธุ์ที่ปลูกในสื่อ YTD สภาพคล่อง (สารสกัดจากยีสต์ 1% (w/v) tryptone 2% (w/v)10% (w/v) น้ำตาลกลูโคสและ 100 มม.ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 6.8) YPD(1% (w/v) ยีสต์สกัด 1% (w/v) Bacto Peptone, 1% (พร้อมของกลางv) กลูโคส) และใช้ YPD agarเป็นการเจริญเติบโตและเก็บสื่อ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สายพันธุ์ของเชื้อรา T. versicolor DSM 11269
ซื้อมาจากคอลเลกชันของเยอรมันจุลินทรีย์และวัฒนธรรมของเซลล์(DSMZ,
เยอรมนี) และการเจริญเติบโตในการสกัดอาร์เอ็นเอรายงานโดย Theerachat
et al, (2012) One Shot อีโค TOP10 (Invitrogen)
ถูกนำมาใช้สำหรับการเปลี่ยนแปลงและการขยายของพลาสมิดrecombinant
DNA และเติบโตขึ้นที่ 37 องศาเซลเซียสเมื่อวันที่ 50 LB ที่มีแอลจี / ml
กานามัยซินในเวลาที่เหมาะสม วาย lipolytica สายพันธุ์ JMY1212 และ JMY1165 (Bordes
et al., 2007) ถูกนำมาใช้ตามลำดับสำหรับการคัดลอกเดียวหรือ multicopy
การเปลี่ยนแปลงของเทปการแสดงออก lcc1 และ transformants
ถูกนำมาใช้ต่อมาในการผลิตแลคเคส การเปลี่ยนแปลงของการแสดงออกเทปเข้าไปในสายพันธุ์วาย lipolytica ได้ดำเนินการโดยใช้วิธีอะซิเตตลิเธียม(Le ดอลล์ et al., 1994) Ura บวกtransformants ถูกเลือกหลังจากการบ่มที่ 28 องศาเซลเซียสในของแข็งน้อยกลางYNB (YNB 0.17% (w / v) ฐานไนโตรเจนยีสต์ (ไม่มีแอมโมเนียมและไม่มีกรดอะมิโน), 0.5% (w / v) ของแอมโมเนียมคลอไร, 1% (w / v) กลูโคส 0.2% (w / v) กรดซามิ, 1.5% (w / v) วุ้น 50 มิลลิค่า pH ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ 6.8) และหลังจากนั้น 36 ชั่วโมงสำหรับtransformants monocopy 1-2 สัปดาห์สำหรับ transformants multicopy . สำหรับการผลิตโปรตีนวายสายพันธุ์ lipolytica ปลูกในของเหลวกลางYTD (1% (w / v) สารสกัดจากยีสต์, 2% (w / v) tryptone, 10% (w / v) กลูโคสและ 100 มิลลิพีเอช 6.8 ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ) YPD กลาง (1% (w / v) สารสกัดจากยีสต์, 1% (w / v) Bacto เปปโตน, 1% (w / v) มีกลูโคส) และ YPD วุ้นถูกนำมาใช้กับการเจริญเติบโตและสื่อเก็บข้อมูล

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สายพันธุ์เชื้อรา T . โรคที่มี 11269 ซื้อมาจาก
คอลเลกชันเยอรมันของจุลินทรีย์และเซลล์วัฒนธรรม ( dsmz
, เยอรมนี ) และเติบโตสำหรับการสกัดอาร์เอ็นเอรายงานโดย theerachat
et al . ( 2012 ) เดียว Escherichia coli TOP10 ( Invitrogen )
ใช้เพื่อการเปลี่ยนแปลง และเพิ่มปริมาณ recombinant plasmid DNA และโตที่ 37 
C ปอนด์ที่มี 50 LG / ml น
เมื่อเหมาะสม Ylipolytica สายพันธุ์และ jmy1212 jmy1165 ( บอเดส
et al . , 2007 ) ใช้ตามลำดับสำหรับคัดลอกเดียวหรือการแปลง multicopy
lcc1 การแสดงออกของเทปและพลาสมิด
ถูกและใช้ในการผลิต - . การเปลี่ยนแปลงการแสดงออกของเทปเป็น Y
lipolytica สายพันธุ์มีการใช้ลิเธียมเตต
วิธี ( Le ดอล et al . , 1994 ) วก
อุราพลาสมิดที่ถูกเลือกหลังจากการบ่มที่ 28  C แข็งน้อยที่สุด
ynb ขนาดกลาง ( ynb 0.17 % ( w / v ) ไนโตรเจนเบสยีสต์ ( โดยไม่
แอมโมเนียมและไม่มีกรดอะมิโน ) 0.5% ( w / v )
แอมโมเนียมคลอไรด์ 1% ( w / v ) ที่ระดับ 0.2% ( w / 5 ) casamino กรด
1.5 % ( w / v ) ขนาด 50 มม. ฟอสเฟตบัฟเฟอร์พีเอช 6.8 ) และหลังจาก 36 ชั่วโมง
monocopy พลาสมิดและ 1 – 2 สัปดาห์
multicopy transformants .การผลิตโปรตีน Y lipolytica สายพันธุ์ที่ปลูกในประเทศ
ขนาดกลาง ของเหลว ( 1% ( w / v ) สารสกัดจากยีสต์ , 2% ( w / v ) ทริพโทน
, 10% ( w / v ) กลูโคสและ 100 mM ฟอสเฟตบัฟเฟอร์พีเอช 6.8 ) ypd
ขนาดกลาง ( 1% ( w / v ) สารสกัดจากยีสต์ , 1% ( w / v ) Bacto extract , 1% ( w /
V ) กลูโคส ) และ ypd วุ้นใช้
การเจริญเติบโตและการเก็บรักษาสื่อ