To confirm the expression of human

To confirm the expression of human Lf in alfalfa
plants, RT-PCR, ELISA, and Western blot analyses were
performed. Accumulation of human Lf mRNAs was
detected only in the clone 53 using gene-specific primers,
amplifying a fragment corresponding to the expected
356 bp PCR product when positive control was used as a
template (Fig. 3B). Although presence of human Lf
transcripts was not detected in the other clones, they were
included in further experiments




RT-PCR analysis confirming presence of human Lf
mRNA in plant cells



high quality recombinant protein as well as for quality
improvement of this important forage crop. As the
production of recombinant protein with high authenticity
is of significant importance for its application as
therapeutic agent as well as for achieving crop quality
improvement, we aimed obtaining full length Lf in alfalfa
plants. Our results have shown that transformation of
alfalfa with human Lf cDNA under control of the
35S CaMV promoter using Agrobacterium tumefciensmediated
gene transfer leads to production of recombinant
human Lf with molecular mass of approximately 80
kDa in leaf alfalfa extracts which corresponds to the size
of the native protein. Maximum expression level of the






recombinant human Lf, determined by ELISA assay, was
0.0047 % of TSP (clone 53). It is comparable to
previously reported expression levels in transgenic alfalfa
plants bearing a gene encoding the avian reovirus σC
protein under control of the 35S CaMV promoter (Huang
et al. 2006) and could be explained with the relative low
efficiency of this constitutive promoter in alfalfa
compared to other dicotyledoneus species (D’Aoust et al.
2004). Different expression of recombinant human Lf in
leaf tissue are reported in other systems – tobacco (0.1 -
0.8 % of TSP) (Zhang et al. 1998, Salmon et al. 1998)
and potato (0.01 - 0.1 % of TSP) (Chong and Langridge

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ยืนยันค่าของ Lf มนุษย์ใน alfalfaพืช RT-PCR, ELISA และวิเคราะห์ได้คืนในตาตะวันตกดำเนินการ สะสมของ mRNAs Lf มนุษย์ได้พบเฉพาะในโคลน 53 ใช้ไพรเมอร์ของยีนเฉพาะมือส่วนที่สอดคล้องกับที่คาดไว้bp 356 PCR ผลิตภัณฑ์ควบคุมบวกถูกใช้เป็นแม่แบบ (Fig. 3B) แม้ว่าสถานะของมนุษย์ Lfใบแสดงผลตรวจไม่พบในโคลนอื่น ๆ พวกเขาในการทดลองต่อไปRT-PCR วิเคราะห์ยืนยันสถานะของมนุษย์ LfmRNA ในเซลล์พืชrecombinant โปรตีนสูงเช่นสำหรับคุณภาพการปรับปรุงนี้พืชอาหารสัตว์ที่สำคัญ เป็นการการผลิต recombinant โปรตีนมีความถูกต้องสูงเป็นของสำคัญของโปรแกรมประยุกต์รักษาตัวแทนเช่นสำหรับบรรลุคุณภาพพืชปรับปรุง เรามุ่งเน้นรับเต็มความยาว Lf ใน alfalfaรดน้ำต้นไม้ ผลของเราได้แสดงให้เห็นว่าการเปลี่ยนแปลงของalfalfa กับ cDNA Lf มนุษย์ภายใต้การควบคุมของการโปรโมเตอร์ CaMV 35S ใช้อโกรแบคทีเรียม tumefciensmediatedโอนย้ายยีนเป้าหมายการผลิตของวททชLf มนุษย์ มีมวลโมเลกุลประมาณ 80kDa ในสารสกัดจากใบ alfalfa ซึ่งสอดคล้องกับขนาดโปรตีนดั้งเดิม ระดับสูงสุดของนิพจน์Lf มนุษย์ recombinant ตามที่ทดสอบ ELISA ถูก0.0047% ของช้อนชา (โคลน 53) จึงเทียบได้กับก่อนหน้านี้ รายงานระดับนิพจน์ใน alfalfa ถั่วเหลืองพืชยีนที่เข้า σC reovirus นกแบริ่งโปรตีนภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ที่ CaMV 35S (หวงร้อยเอ็ด al. 2006) และสามารถอธิบายกับต่ำสุดสัมพัทธ์ประสิทธิภาพของโปรโมเตอร์นี้ขึ้นใน alfalfaเปรียบเทียบกับพันธุ์อื่น ๆ dicotyledoneus (D'Aoust et al2004) ค่าแตกต่างกันของ Lf recombinant มนุษย์ในรายงานในระบบอื่น ๆ เนื้อเยื่อใบยาสูบ (0.1 -0.8% ของช้อนชา) (Zhang et al. 1998 ปลาแซลมอนและ al. ปี 1998)และมันฝรั่ง (0.01 - 0.1% ของช้อนชา) (ช่องและ Langridge

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เพื่อยืนยันการแสดงออกของมนุษย์ในการ Lf
หญ้าชนิตพืชRT-PCR, ELISA
และวิเคราะห์ดวงตะวันถูกดำเนินการ การสะสมของมนุษย์ Lf mRNAs
ถูกตรวจพบได้เฉพาะในโคลน53
โดยใช้ไพรเมอร์ยีนเฉพาะขยายส่วนที่สอดคล้องกับที่คาดว่าจะ
356 bp ผลิตภัณฑ์ PCR
เมื่อควบคุมบวกถูกใช้เป็นแม่แบบ(รูป. 3B) แม้ว่าการปรากฏตัวของมนุษย์ Lf
ใบรับรองผลการตรวจไม่พบในโคลนอื่น ๆ
พวกเขาจะถูกรวมอยู่ในการทดลองต่อไปวิเคราะห์RT-PCR ยืนยันการปรากฏตัวของมนุษย์ Lf mRNA ในเซลล์พืชที่มีคุณภาพสูงโปรตีนเช่นเดียวกับคุณภาพการปรับปรุงของพืชอาหารสัตว์ที่สำคัญนี้ ในฐานะที่เป็นการผลิตของโปรตีนที่มีความถูกต้องสูงมีความสำคัญอย่างมีนัยสำคัญสำหรับการประยุกต์ใช้ในฐานะที่เป็นตัวแทนในการรักษาเช่นเดียวกับการประสบความสำเร็จในการเพาะปลูกที่มีคุณภาพการปรับปรุงเรามุ่งรับLf ยาวเต็มรูปแบบในหญ้าชนิตพืช ผลของเราได้แสดงให้เห็นการเปลี่ยนแปลงของว่านเดอร์ที่มียีนของมนุษย์ Lf ใต้การควบคุมของ 35S โปรโมเตอร์ CaMV ใช้ Agrobacterium tumefciensmediated การถ่ายโอนยีนจะนำไปสู่การผลิต recombinant Lf มนุษย์ที่มีมวลโมเลกุลประมาณ 80 กิโลดาลตันในใบสารสกัดจากหญ้าชนิตซึ่งสอดคล้องกับขนาดของพื้นเมืองโปรตีน. ระดับการแสดงออกสูงสุดของมนุษย์ recombinant Lf กำหนดโดยการทดสอบ ELISA เป็น 0.0047% ของ TSP (โคลน 53) มันก็เปรียบได้กับรายงานก่อนหน้านี้ระดับการแสดงออกในหญ้าชนิตพันธุ์พืชแบกยีนเข้ารหัสนกreovirus σCโปรตีนภายใต้การควบคุมของผู้ก่อการ35S CaMV (Huang et al. 2006) และสามารถอธิบายได้ด้วยในระดับต่ำเมื่อเทียบประสิทธิภาพของการก่อการส่วนประกอบในหญ้าชนิตเมื่อเทียบกับสายพันธุ์อื่น ๆ dicotyledoneus (D'Aoust et al. 2004) การแสดงออกที่แตกต่างกันของ Lf recombinant มนุษย์ในใบเนื้อเยื่อมีการรายงานในระบบอื่นๆ - ยาสูบ (0.1 - 0.8% ของ TSP) (Zhang et al, 1998, ปลาแซลมอน et al, 1998..) และมันฝรั่ง (0.01-0.1% ของ TSP) (ปากช่องและ Langridge

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพื่อยืนยันการแสดงออกของมนุษย์ ถ้าใน Alfalfa
พืช , RT-PCR , ELISA และ Western blot การวิเคราะห์ถูก
แสดง การสะสมของรหัสถ้ามนุษย์
ตรวจพบเฉพาะในโคลน 53 โดยใช้ไพร์เมอร์จำเพาะของยีน
ขยายส่วนที่คาดว่า
356 BP PCR เมื่อสินค้าควบคุมบวกถูกใช้เป็นแม่แบบ
( รูปที่ 3B ) แม้ว่าการแสดงตนของ
ถ้ามนุษย์รายงานไม่พบในพันธุ์อื่น ๆ พวกเขา
รวมอยู่ในการทดลองนี้ต่อไป




การวิเคราะห์ยืนยันการแสดงตนของมนุษย์ ถ้ายีนในเซลล์พืช




รีคอมบิแนนท์โปรตีนคุณภาพสูง รวมทั้งการพัฒนาคุณภาพของพืชอาหารสัตว์ที่สำคัญนี้ . การผลิตรีคอมบิแนนท์โปรตีนเป็น

แท้สูงด้วยเป็นสำคัญที่สำคัญสำหรับการประยุกต์ใช้เป็นตัว
การรักษา เจ้าหน้าที่ ตลอดจนเพื่อการปรับปรุงคุณภาพ
พืช เรามุ่งได้รับเต็มความยาวถ้าใน Alfalfa
พืช ผลของเราแสดงให้เห็นว่าการเปลี่ยนแปลงของยีนมนุษย์ ถ้าหญ้าด้วย

35s ภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์โดยใช้ Agrobacterium CAMV tumefciensmediated
ถ่ายยีนนำไปสู่การผลิตถ้ามนุษย์ recombinant
มีมวลโมเลกุลประมาณ 80
( ในใบหญ้า สารสกัดซึ่งสอดคล้องกับขนาด
ของโปรตีนพื้นเมือง ระดับการแสดงออกสูงสุดของ






recombinant มนุษย์ถ้าพิจารณาโดยวิธี ELISA ,
0.0047 1 ช้อนชา ( โคลน ( 53 ) มันเทียบได้กับระดับการแสดงออกยีน
รายงานก่อนหน้านี้ใน Alfalfa
พืชนำยีนรีโอไวรัสนกσ C
โปรตีนภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ 35s CAMV ( Huang
et al .2549 ) และสามารถอธิบายได้ด้วยต่ำประสิทธิภาพของการก่อตั้งนี้

เมื่อเทียบกับหญ้าชนิดอื่น ๆ dicotyledoneus (
d'aoust et al . 2004 ) การแสดงออกที่แตกต่างกันของโปรตีนในเนื้อเยื่อใบถ้ามนุษย์
รายงานในระบบอื่น ๆและใบยาสูบ ( 0.1 -
0.8% ของ TSP ) ( Zhang et al . 1998 ปลาแซลมอน et al . 1998 )
และมันฝรั่ง ( 0.01 - 0.1% ของช้อนชา ) ( ชง และ langridge