Multiplex PCR amplificationPrimer-p

Multiplex PCR amplification
Primer-pair sequences (bla-SHV.SE/AS; TEM-
164.SE and TEM-165.AS; universal CTX-M-U1/U2)
used in the multiplex PCR assay, origin and expected
PCR amplicon sizes are given in Table 2. Initially, a
PCR annealing temperature gradient was performed
and all subsequent multiplex PCR reactions were carried
out using 1 ml DNA solution, Qiagen HotStarTaq
Master Mix (Qiagen Nr. 203445) and 10 pmol of each
gene-specific primer in a final volume of 25 ml. PCR
amplification conditions were as follows: initial denaturation
step at 95 æC for 15 min; 30 cycles of denaturation
at 94 æC for 30 s, annealing at 60 æC for 30 s, extension
at 72 æC for 2 min, followed by a final extension
step at 72 æC for 10 min.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

มัลติเพล็กซ์กระบือไพรเมอร์คู่ลำดับ (bla-SHV.SE/AS TEM-ยาว SE และ TEM-165.AS สากล CTX-M-U1/U2)ใช้ในการ multiplex PCR assay จุดเริ่มต้น และคาดว่าขนาด amplicon PCR ถูกกำหนดในตารางที่ 2 เริ่มแรก การทำ PCR หลอมอุณหภูมิไล่ระดับสีและดำเนินการทั้งหมดต่อมาปฏิกิริยา PCR มัลติเพล็กซ์โดยการใช้แก้ปัญหามล 1 ดีเอ็นเอ Qiagen HotStarTaqส่วนผสมหลัก (Qiagen Nr. 203445) และ 10 pmol ของแต่ละรองพื้นเฉพาะยีนในปริมาตรสุดท้ายของ 25 ml. PCRขยายเงื่อนไขมีดังนี้: ต้นแปรสภาพขั้นตอนที่ 95 æC 15 นาที 30 รอบของการแปรสภาพที่ æC 94 30 s หลอมที่ æC 60 30 s นามสกุลที่ 72 æC สำหรับ 2 นาที ตาม ด้วยนามสกุลเป็นขั้นสุดท้ายขั้นตอนที่ 72 æC 10 นาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

multiplex PCR ขยาย
ลำดับรองพื้นคู่ (bla-SHV.SE/AS; TEM-
164.SE และ TEM-165.AS สากล CTX-M-U1 / U2)
ใช้ใน multiplex PCR ทดสอบกำเนิดและคาดว่า
PCR ขนาด amplicon จะได้รับในตารางที่ 2 ขั้นต้น
PCR อุณหภูมิลาดหลอมได้ดำเนินการ
และทุกที่ตามมา multiplex PCR ปฏิกิริยาได้ดำเนิน
การโดยใช้วิธีการแก้ปัญหา 1 มิลลิลิตรดีเอ็นเอ Qiagen HotStarTaq
โท Mix (Qiagen Nr. 203445) และ 10 pmol ของแต่ละ
ไพรเมอร์ยีนเฉพาะ ปริมาณสุดท้ายของ 25 มล. PCR
เงื่อนไขขยายมีดังนี้ denaturation เริ่มต้น
ขั้นตอนที่ 95 AEC นาน 15 นาที; 30 รอบของการสูญเสียสภาพธรรมชาติ
ที่ 94 AEC เป็นเวลา 30 วินาที, การอบที่ 60 AEC เป็นเวลา 30 วินาทีส่วนขยาย
ที่ 72 AEC เป็นเวลา 2 นาทีตามด้วยนามสกุลสุดท้าย
ขั้นตอนที่ 72 AEC เป็นเวลา 10 นาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

multiplex PCR เพิ่มจำนวนไพรเมอร์คู่ดังนี้ ( bla-shv.se/as tem - ;และ 164.se tem-165.as ; สากล ctx-m-u1 / U2 )ใช้ในการทดสอบเทคนิค multoplex PCR , กำเนิดและคาดหวังขนาดและ PCR จะได้รับในตารางที่ 2 ตอนแรก ,เทคนิคการหลอมการกระจายอุณหภูมิได้และทั้งหมดภายหลัง multiplex PCR ปฏิกิริยาอะมิโนโดยใช้สารละลายดีเอ็นเอเพิ่ม hotstartaq 1 มิลลิลิตรต้นแบบผสม ( QIAGEN Nr 203445 ) และ 10 pmol ของแต่ละยีนเฉพาะรองพื้นในปริมาณ 25 มล. ) สุดท้ายเงื่อนไขเริ่มต้น ( แบบมีดังนี้ขั้นตอนที่ 1 æเป็นเวลา 15 นาที ( ; 30 รอบที่ 94 æเป็นเวลา 30 วินาที annealing ที่ 60 æ C 30 S , ส่งเสริม72 æ C เป็นเวลา 2 นาที ตามด้วยนามสกุลสุดท้ายขั้นตอนที่ 72 æ C นาน 10 นาที