2.5.3. The determination of molecular weight distribution
Fermented soybeans (10 g) were homogenized with 50 ml of
distilled water and incubated at 4 C for 4 h, centrifuged at
4500 rpm for 10 min at 4 C and then the supernatant was passed
through 0.45 mm Millipore filters (Minisart, Sartorious, Germany).
The filtered supernatant was collected, lyophilized and stored
at 20 C until further used.
1.0 g freeze-dried samples was dissolved in 99 ml mobile
phase (50 mM phosphate buffer containing 0.15 M NaCl,
pH ¼ 7.2). The sample was loaded onto GE Superdex Peptide
10/300 GL column (i.d. 10 300 nm), eluted with mobile phase
at a flow rate of 0.5 ml/min and monitored at 220 nm. A molecular
weight calibration curve was obtained from the following
standards: Cytochrome C (12,500 Da), Trasylol (6512 Da),
Glutathione Disulfide (615 Da), Reduced Glutathione (310 Da)
and Glycine (75 Da).
2.5.3 การกำหนดการกระจายของน้ำหนักโมเลกุลถั่วเหลืองหมัก (10 g) ถูก homogenized เป็นกลุ่ม มี 50 ml ของน้ำกลั่น และ incubated ที่ C 4 สำหรับ 4 h, centrifuged ที่4500 รอบต่อนาทีใน 10 นาทีที่ 4 C แล้ว supernatant ถูกส่งผ่านผ่าน 0.45 มม.กรองมาก (Minisart, Sartorious เยอรมนี)Supernatant กรองรวบรวม lyophilized และเก็บที่ 20 C จนกระทั่งใช้ต่อไปตัวอย่างกรอบ 1.0 g ไม่ละลายในมือถือ 99 mlระยะ (50 มม.ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ที่ประกอบด้วย 0.15 M NaClpH ¼ 7.2) ตัวอย่างถูกโหลดไปยังเพปไทด์ Superdex GE10/300 GL คอลัมน์ (ประชาชน 10 300 nm), eluted กับระยะเคลื่อนที่อัตราการไหล 0.5 ml/นาที และตรวจสอบที่ 220 nm เป็นโมเลกุลน้ำหนักเทียบเส้นโค้งที่ได้จากต่อไปนี้มาตรฐาน: Cytochrome C (12500 ดา), Trasylol (6512 ดา),ไดซัลไฟด์กลูตาไธโอนกลูตาไธโอนลดลง (615 ดา), (310 ดา)และ Glycine (75 ดา)
การแปล กรุณารอสักครู่..
2.5.3 ความมุ่งมั่นของการกระจายน้ำหนักโมเลกุล
หมักถั่วเหลือง (10 กรัม) ได้รับการหดหาย 50 มิลลิลิตรของ
น้ำกลั่นและบ่มที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 4 ชั่วโมง, หมุนเหวี่ยงที่
4500 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาทีที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสและจากนั้นใสก็ผ่านไป
ผ่าน 0.45 มม กรองค (Minisart, Sartorious, เยอรมนี).
สารละลายที่กรองได้รับการเก็บรวบรวมแห้งและเก็บไว้
ที่? 20? C จนใช้ต่อไป.
1.0 กรัมตัวอย่างแห้งก็เลือนหายไปใน 99 มลมือถือ
เฟส (50 มิลลิฟอสเฟตบัฟเฟอร์ที่มีโซเดียมคลอไรด์ 0.15 M ,
ค่า pH ¼ 7.2) ตัวอย่างที่ได้รับการโหลดลง GE Superdex? เปปไทด์
10/300 GL คอลัมน์ (id 10? 300 นาโนเมตร), ชะกับเฟสเคลื่อนที่
ที่อัตราการไหล 0.5 มิลลิลิตร / นาทีและตรวจสอบที่ 220 นาโนเมตร โมเลกุล
เส้นโค้งการสอบเทียบน้ำหนักที่ได้รับจากการตาม
มาตรฐาน: Cytochrome C (12,500 ดา) Trasylol (6512 ดา),
กลูตาไธโอนซัลไฟด์ (615 ดา), กลูตาไธโอนที่ลดลง (310 ดา)
และ Glycine (75 ดา)
การแปล กรุณารอสักครู่..
2.5.3 . การหาการกระจายน้ำหนักโมเลกุล
ถั่วเหลือง ( 10 กรัม ) เป็นโฮโมกับ 50 มล.
น้ำกลั่นและบ่มที่ 4 C 4 H ,
4 , 500 รอบต่อนาที ระดับที่ 10 นาทีที่ 4 C แล้วนำผ่าน
ผ่าน 0.45 มม. กระดาษกรองมิลลิพอร์ ( minisart sartorious , เยอรมนี )
กรองนำเก็บแห้งและเก็บไว้
,ที่ 20 C จนกว่าจะมีใช้ .
1.0 กรัมละลายในน้ำแห้ง จำนวน 99 มือถือ
เฟส ( 50 mM ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ที่มี 0.15 M NaCl
¼ pH 7.2 ) ตัวอย่างบน GE superdex เปปไทด์
10 / 300 GL คอลัมน์โหลด ( บัตร 10 300 nm ) ตัวอย่างกับเฟสเคลื่อนที่
ที่อัตราการ ไหลของ 0.5 มล. / นาทีและตรวจสอบที่ 220 นาโนเมตร เป็นโมเลกุล
น้ำหนักเส้นปรับเทียบได้จาก
มาตรฐานต่อไปนี้ :มั่ม ( 12500 ดา ) , trasylol ( 6512 ดา ) ,
กลูต้าไธโอน ไดซัลไฟด์ ( 615 ดา ) ลดลงกลูตาไธโอน ( คุณดา )
และไกลซีน ( 75 ดา )
การแปล กรุณารอสักครู่..