2.4. Sugar analysisTotal sugars wer

2.4. Sugar analysis

Total sugars were determined by the phenol–sulfuric acid analysis using rhamnose as standard (Dubious, Gilles, Hamilton, Rebers, & Smith, 1956). Uronic acids were analyzed colorimetrically by the m-hydroxy diphenyl analysis according to procedure outlined by Ahmed and Labavitch (1977) using glucuronic acid as standard. Polysaccharide fraction were hydrolyzed either with 1 M sulfuric acid (3 h at 100 °C) for soluble substances or by treatment with 72% (w/w) H2SO4 for 1 h at room temperature and then with 1 M sulfuric acid for 3 h at 100 °C for water insoluble residues. Myo-inositol was used as internal standard. The released monosaccharide residues were converted into their alditol acetate ( Blakeney, Harris, Henry, & Bruce, 1983) and analyzed by GLC and GLC/MS (Shimadzu QP 5050A) using DB-225 (JW). Uronic acid in the sulfuric acid hydrolysate was identified by TLC as previously described ( Ghosh et al., 2005). Alternatively, the samples were hydrolyzed using trifluoroacetic acid (2 M, 2 h at 110 °C), followed by an 18 h methanolysis at 80 °C with dry 2 M methanolic–HCl. The generated methyl glycosides were converted into their TMS-derivatives and separated by gas chromatography ( York, Darvill, O‘Neill, Stevenson, & Albersheim, 1985). The gas chromatograph was equipped with a flame ionization detector, a WCOT fused silica capillary column (length 25 m, i.d. 0.25 mm) with CP-Sil 5 CP as stationary phase and helium as gas vector. The oven temperature program was: 2 min at 120 °C, 10 °C/min to 160 °C, and 1.5 °C/min to 220 °C, and then 20 °C/min to 280 °C.

2.5. Protein and Amino acid analysis

Proteins were estimated by colorimetry (Lowry, Rosebrough, Lewsfarr, & Randall, 1951). Amino acids were released by hydrolysis with 6 M HCl at 110 °C for 22 h in a sealed tube and were analyzed as described (Mazumder, Morvan, Thakur, & Ray, 2004).

2.6. Infra red spectroscopy

Infrared spectra of polysaccharides were recorded on a JASCO-FTIR 420 infrared spectrophotometer. Samples were dried at 35–44 °C in vacuum over P2O5 for 48 h prior to making pellet.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4 การการวิเคราะห์น้ำตาลน้ำตาลทั้งหมดถูกกำหนด โดยการวิเคราะห์กรดกำมะถัน – วางใช้ rhamnose เป็นมาตรฐาน (Dubious กิล แฮมิลตัน Rebers, & Smith, 1956) มีวิเคราะห์กรด Uronic colorimetrically โดยวิเคราะห์ฟีนิลได m hydroxy ตามขั้นตอนที่ระบุไว้ โดย Ahmed และ Labavitch (1977) โดยใช้กรด glucuronic เป็นมาตรฐาน เศษ polysaccharide ถูก hydrolyzed ด้วย 1 M กรดซัลฟิวริก (h 3 ที่ 100 ° C) ในสารละลาย หรือรักษา 72% (w/w) กำมะถันสำหรับ h 1 ที่อุณหภูมิห้อง แล้ว ด้วยกรดซัลฟิวริก 1 M สำหรับ 3 h ที่ 100 ° C สำหรับตกค้างละลายน้ำ Myo-inositol ถูกใช้เป็นมาตรฐานภายใน ตก monosaccharide ออกได้ถูกแปลงเป็นการ alditol acetate (Blakeney แฮร์ริส เฮนรี่ และ บรูซ 1983) และวิเคราะห์ โดย GLC และ MS GLC (Shimadzu QP 5050A) ใช้ DB-225 (บลิว) ด้วยกรดซัลฟิวริกกรด Uronic ระบุได้อธิบายไว้ก่อนหน้านี้เป็น TLC (ภโฆษ et al., 2005) ตัวอย่างหรือ ถูก hydrolyzed ใช้กรด trifluoroacetic (2 M, h 2 ที่ 110 ° C), ตาม ด้วยการ methanolysis 18 h ที่ 80 ° C ด้วยแห้ง 2 เมตร methanolic – HCl Glycosides methyl สร้างถูกแปลงเป็นของตราสารอนุพันธ์ TMS และคั่น ด้วย chromatography ก๊าซ (นิวยอร์ก Darvill โอนีล สตีเวนสัน & Albersheim, 1985) Chromatograph ก๊าซเพียบพร้อมไป ด้วยเครื่องตรวจจับการ ionization เปลวไฟ ซิลิก้า fused WCOT รูพรุนคอลัมน์ (ความยาว 25 เมตร ประชาชน 0.25 mm) กับ CP 5 CP-ภาษาศาสตร์เป็นระยะเครื่องเขียนและฮีเลียมเป็นก๊าซแบบเวกเตอร์ โปรแกรมอุณหภูมิเตาอบ: 2 นาทีที่ 120 ° C, 10 ° C/นาที 160 ° C และ 1.5 ° C/นาที ถึง 220 ° C แล้ว 20 ° C/นาที ถึง 280 องศาเซลเซียส2.5 วิเคราะห์โปรตีนและกรดอะมิโนโปรตีนถูกประเมิน โดย colorimetry (Lowry, Rosebrough, Lewsfarr และ Randall, 1951) กรดอะมิโนถูกนำออกใช้ โดยไฮโตรไลซ์กับ 6 M HCl ที่ 110 ° C สำหรับ h 22 ในหลอดที่ปิดผนึก และได้วิเคราะห์อธิบาย (Mazumder, Morvan, Thakur และ เรย์ 2004)2.6. อินฟรากสีแดงแรมสเป็คตราอินฟราเรดของ polysaccharides ถูกบันทึกบนตัว 420 JASCO FTIR อินฟราเรดเครื่องทดสอบกรดด่าง ตัวอย่างอบแห้งที่ 35 – 44 ° C ในสุญญากาศผ่าน P2O5 สำหรับ h 48 ก่อนทำเม็ด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 การวิเคราะห์น้ำตาลน้ำตาลทั้งหมดถูกกำหนดโดยการวิเคราะห์กรดซัลฟูริกฟีนอลโดยใช้แรมเป็นมาตรฐาน (พิรุธกิลส์, แฮมิลตัน, Rebers และสมิ ธ , 1956) กรด Uronic ถูกนำมาวิเคราะห์ colorimetrically โดยการวิเคราะห์ diphenyl มไฮดรอกซีตามขั้นตอนที่ระบุไว้โดยอาเหม็ดและ Labavitch (1977) โดยใช้กรด glucuronic เป็นมาตรฐาน ส่วน Polysaccharide ถูกไฮโดรไลซ์ทั้งที่มี 1 M กรดกำมะถัน (3 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 100 ° C) สำหรับสารที่ละลายน้ำได้หรือโดยการรักษาด้วย 72% (w / W) H2SO4 เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้องแล้ว 1 M กรดกำมะถันเวลา 3 ชั่วโมงที่ 100 ° C สำหรับน้ำตกค้างที่ไม่ละลายน้ำ Myo-ทอที่ใช้เป็นมาตรฐานภายใน ปล่อยสารตกค้างโมโนแซ็กคาไรด์ถูกแปลงเป็นอะซิเตท alditol ของพวกเขา (บลา, แฮร์ริส, เฮนรี่และบรูซ, 1983) และวิเคราะห์โดย GLC และ GLC / MS (Shimadzu QP 5050A) โดยใช้ DB-225 (เจดับบลิว) กรด Uronic ในไฮโดรไลกรดกำมะถันที่ถูกระบุโดย TLC อธิบายไว้ก่อนหน้า (กอช et al., 2005) อีกทางเลือกหนึ่งตัวอย่างที่ถูกย่อยสลายโดยใช้กรด Trifluoroacetic (2 M 2 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 110 ° C) ตามด้วย methanolysis 18 ชั่วโมงที่ 80 ° C ที่มีแห้ง 2 M-HCl เมทานอล เมธิลไซด์ที่สร้างถูกแปลงเป็นอนุพันธ์ TMS ของพวกเขาและคั่นด้วยแก๊สโครมา (York, Darvill โอนีลสตีเวนสันและ Albersheim, 1985) gas chromatograph ที่ได้รับการติดตั้งเครื่องตรวจจับไอออนไนซ์เปลวไฟที่ WCOT หลอมคอลัมน์ฝอยซิลิกา (ความยาว 25 เมตร, id 0.25 มม) กับ CP-Sil 5 CP เป็นเฟสและฮีเลียมเป็นก๊าซเวกเตอร์ โปรแกรมอุณหภูมิเตาอบเป็น: 2 นาทีที่ 120 ° C, 10 ° C / นาทีถึง 160 ° C และ 1.5 ° C / นาทีถึง 220 ° C และจากนั้น 20 ° C / นาทีถึง 280 ° C. 2.5 โปรตีนและกรดอะมิโนวิเคราะห์โปรตีนที่ได้รับการประเมินโดย colorimetry (โลว์รีย์ Rosebrough, Lewsfarr และแรนดัล, 1951) กรดอะมิโนได้รับการปล่อยตัวโดยการย่อยสลายด้วย 6 M HCl ที่ 110 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 22 ชั่วโมงในหลอดปิดผนึกและถูกนำมาวิเคราะห์ตามที่อธิบายไว้ (Mazumder, Morvan, Thakur และเรย์, 2004). 2.6 อินฟราเรดสเปกโทรสโกสเปกตรัมอินฟราเรดของ polysaccharides ถูกบันทึกไว้ใน JASCO-FTIR 420 สเปกอินฟราเรด ตัวอย่างแห้งที่ 35-44 ° C ในสุญญากาศกว่า P2O5 เวลา 48 ชั่วโมงก่อนที่จะทำให้เม็ด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . การวิเคราะห์น้ำตาล

น้ำตาลทั้งหมดถูกกำหนดโดยกรดฟีนอลและการวิเคราะห์การใช้ rhamnose เป็นมาตรฐาน ( พิรุธ , จิล แฮมิลตัน rebers &สมิ ธ , 1956 ) uronic กรด วิเคราะห์ colorimetrically โดย m-hydroxy อีเธอร์วิเคราะห์ตามขั้นตอนที่ระบุไว้โดย Ahmed และ labavitch ( 1977 ) โดยใช้กรด glucuronic เป็นมาตรฐานส่วนโพลีแซคคาไรด์ถูกไฮโดรไลซ์ด้วยกรดซัลฟูริค 1 m ( 3 ) ที่ 100 ° C ) เพื่อละลายสาร หรือการรักษาด้วย 72 % ( w / w ) กรดซัลฟิวริก 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้องแล้วกับกรดกำมะถัน 1 M 3 H ที่ 100 องศา C ไม่ละลายน้ำที่ตกค้าง เมียวอลถูกใช้เป็นมาตรฐานภายใน โมโนแซ็กคาไรด์ตกค้างออกเป็นแปลงของพวกเขา alditol เทต ( เบลกนีย์ แฮร์ริสเฮนรี่ &บรูซ , 1983 ) และวิเคราะห์ข้อมูลด้วย และ glc glc / MS ( Shimadzu qp 5050a ) ใช้ db-225 ( 16 ) uronic กรดกำมะถันเป็นกรดในภาคใต้ระบุ ( ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( ghosh et al . , 2005 ) หรือตัวอย่างจากการใช้กรดไตรฟลูออโรอะซิติก ( 2 , 2 ) ที่ 110 ° C ) , ตามด้วย 18 H เมทาโนไลซิสที่ 80 °องศาเซลเซียสด้วยเมทานอลและแห้ง 2 M HCl .สารไกลโคไซด์ที่สร้างขึ้นถูกแปลงเป็นอนุพันธ์ของ TMS และแยกโดยวิธีแก๊สโครมาโตกราฟี ( นิวยอร์ก darvill โอนีล สตีเวนสัน , & albersheim , 1985 ) แก๊สโครมาโตกราฟถูกติดตั้งกับเฟลมไอออไนเซชันตรวจจับ , wcot ซิลิกาคอลัมน์ C ( ความยาว 25 เมตร บัตรประชาชน 0.25 มม. ) กับ CP ซีพี ศีล 5 เป็น stationary phase และฮีเลียมเป็นเวกเตอร์ก๊าซโปรแกรมเตาอบอุณหภูมิ : 2 นาทีที่ 120 ° C 10 ° C / นาที 160 ° C และ 1.5 ° C / นาที 220 องศา C และ 20 ° C / นาทีถึง 280 องศา

2.5 โปรตีนและกรดอะมิโนโปรตีนการวิเคราะห์

ประมาณโดยชีส ( เบส rosebrough lewsfarr , , , & Randall , 1951 ) กรดอะมิโนที่ถูกปล่อยออกมาโดยการย่อยสลายด้วย 6 M HCl ที่ 110 ° C ถึง H ในท่อที่ปิดสนิทและวิเคราะห์ตามที่อธิบายไว้ ( mazumder morvan , ,& Thakur , เรย์ , 2004 ) .

2.6 อินฟราเรดสเปกโทรสโกปีอินฟราเรดสเปกตรัมสีแดง

ของพอลิแซ็กคาไรด์ที่ถูกบันทึกไว้ใน jasco-ftir 420 Infrared Spectrophotometer . ตัวอย่างที่อุณหภูมิ 35 - 44 องศา C ในสุญญากาศมากกว่าฟอสฟอรัส 48 H ก่อนทํา
เม็ด