According to the method described in a previous study (Yang
and others 2013), 2,7-dichlorodihydrofluorescein diacetate (27-
DCFH-DA) was carried out to measure the capacity of nicotine
to generate ROS in a HepG2 cell. In brief, about 5 × 104 cells
were seeded into 96 wells of a black microplate. When cells were
confluent, cell media were eliminated and washed by PBS. For
the treatment, RES (50, 100, and 250 μM), OXY (50, 100, and
250 μM), a mixture of RES and OXY (50 and 100 μM), and
EESC (1.8 mg/mL) were treated into cells for 2 h. Then, cell
media containing IC50 value of nicotine were suspended into the
cells and maintained for 24 h in an incubator. After treatment, cell
media were sucked and cells were dislocated by trypsin EDTA,
and then it was treated with 27-DCFH-DA. After 30 min of
reaction, the cell fluorescence was measured using a microplate reader (Varioskan Flash) at 488 nm for excitation and at 525 nm
for emission.
ตามวิธีการอธิบายไว้ในการศึกษาก่อนหน้า (ยางและอื่น ๆ 2013), 2, 7 - dichlorodihydrofluorescein diacetate (2 7 -DCFH-DA) เพื่อวัดความจุของนิโคตินสร้าง ROS ในเซลล์ HepG2 สรุป เกี่ยวกับ 5 × 104 เซลล์ถูกเตรียมเป็นหลุม 96 ของ microplate ดำ เมื่อเซลล์ถูกconfluent สื่อเซลล์ถูกตัดออก และล้าง ด้วย PBS สำหรับการรักษา RES (50, 100 และ 250 ไมครอน), OXY (50, 100 และΜ m 250), มีส่วนผสมของ RES และ OXY (μ m 50 และ 100), และEESC (1.8 มิลลิกรัม/มิลลิลิตร) ได้รับการรักษาในเซลล์ 2 ชม แล้ว เซลล์สื่อประกอบด้วยค่า IC50 ของนิโคตินถูกหยุดชั่วคราวเป็นการเซลล์ และรักษาสำหรับ 24 ชั่วโมงในตู้อบที่ หลังการรักษา เซลล์สื่อถูกดูด และเซลล์ถูกหิน โดย EDTA ทริปซินแล้ว ก็ถือว่า 7 2 - DCFH-DA. หลังจาก 30 นาทีปฏิกิริยา การเรืองแสงของเซลล์ที่มีวัดโดยใช้เครื่องอ่าน microplate (Varioskan แฟลช) ที่ 488 nm สำหรับกระตุ้น และ 525 nmสำหรับการปล่อย
การแปล กรุณารอสักครู่..
ตามวิธีการที่อธิบายไว้ในการศึกษาก่อนหน้า (Yang
และคนอื่น ๆ 2013), 2, 7 diacetate -dichlorodihydrofluorescein? (2 7 -?
DCFH-DA) ได้ดำเนินการในการวัดความจุของนิโคติน
ในการสร้างอนุมูลอิสระในเซลล์ HepG2 . ในช่วงสั้น ๆ ประมาณ 5 × 104 เซลล์
เมล็ดลงในหลุม 96 ของไมโครสีดำ เมื่อเซลล์ถูก
ไหลมารวมกันสื่อมือถือถูกตัดออกและล้างด้วยพีบีเอส สำหรับ
การรักษา RES (50, 100 และ 250 ไมครอน), OXY (50, 100 และ
250 ไมครอน) มีส่วนผสมของ RES และ OXY (50 และ 100 ไมครอน) และ
EESC (1.8 mg / ml) ได้รับการรักษาออกเป็น เซลล์เป็นเวลา 2 ชั่วโมง จากนั้นมือถือของ
สื่อที่มีค่า IC50 ของนิโคตินถูกระงับลงใน
เซลล์และการบำรุงรักษาเป็นเวลา 24 ชั่วโมงในศูนย์บ่มเพาะ หลังจากการรักษาเซลล์
สื่อถูกดูดและเซลล์ถูกเคล็ดโดย trypsin EDTA,
และจากนั้นจะได้รับการรักษาด้วย 2? 7? -DCFH-DA หลังจาก 30 นาทีของ
การเกิดปฏิกิริยาการเรืองแสงของเซลล์ที่ถูกวัดโดยใช้เครื่องอ่าน microplate (Varioskan Flash) ที่ 488 นาโนเมตรสำหรับการกระตุ้นและ 525 นาโนเมตร
สำหรับการปล่อยก๊าซเรือนกระจก
การแปล กรุณารอสักครู่..