1. Introduction
Malonaldehyde (propandial, MA) has been extensively used as a marker of polyunsaturated fatty acids oxidation [1], [2] and [3]. Its determination is still based on spectrophotometric assays and, among these, the one that relies on UV-evaluation of the adduct formed between MA thiobarbituric acid (TBA) is very popular and frequently used for oxidative stress evaluation [4] and [5]. However, TBA test has been considered nonspecific for MA [6] and several procedures have been suggested in order to overcome interference problems [7]. Furthermore, the sample preparation requires harsh experimental conditions that may cause the formation of several artefacts that can severely intefere with MA determination [8]. Therefore, various methods have been introduced to produce MA derivative under mild conditions before its determination by GC or HPLC tecniques [9]. For instance, HPLC analysis of MA with the UV detection 2,4-dinitrophenylhydrazine (DNPH) can be used as an alternative to TBA. In a recent study on the specificity of MA determination in fish, it has been shown that DNPH is preferred to TBA “for a finer understanding of lipid peroxidation in fish” [10]. Compared to the TBA assay, the derivatization procedure with DNPH involves a more favourable treatment at room temperature, but still requires a strongly acidic treatment. Another reagent, 2,3-diaminonaphthalene (DAN), originally introduced for the quantitative determination of β-diketones [11], has been recently applied to MA determination in plasma or serum by HPLC with UV detection [12]. The reaction of DAN with MA affords a naphtodiazepine (MA-DAN) with a high UV response, very interesting in the view of free MA measurements in biological fluids. However, the reported experimental protocol requires a long derivatization time (180 min), low pH (pH 0.8) and no internal standard is described.
We have, therefore, carefully analyzed several aspects of the experimental conditions such as the sample treatment, the derivatization step and the use of the most suitable internal standard. Once these conditions have been optimized, we have compared UV responses of MA-DAN with the corresponding MA derivative with DNPH (MA-DNP). Finally, we have applied our protocol to the estimation of free MA in a fish product available on market, like canned mackerel fillet.
1. บทนำMalonaldehyde (propandial, MA) has been extensively used as a marker of polyunsaturated fatty acids oxidation [1], [2] and [3]. Its determination is still based on spectrophotometric assays and, among these, the one that relies on UV-evaluation of the adduct formed between MA thiobarbituric acid (TBA) is very popular and frequently used for oxidative stress evaluation [4] and [5]. However, TBA test has been considered nonspecific for MA [6] and several procedures have been suggested in order to overcome interference problems [7]. Furthermore, the sample preparation requires harsh experimental conditions that may cause the formation of several artefacts that can severely intefere with MA determination [8]. Therefore, various methods have been introduced to produce MA derivative under mild conditions before its determination by GC or HPLC tecniques [9]. For instance, HPLC analysis of MA with the UV detection 2,4-dinitrophenylhydrazine (DNPH) can be used as an alternative to TBA. In a recent study on the specificity of MA determination in fish, it has been shown that DNPH is preferred to TBA “for a finer understanding of lipid peroxidation in fish” [10]. Compared to the TBA assay, the derivatization procedure with DNPH involves a more favourable treatment at room temperature, but still requires a strongly acidic treatment. Another reagent, 2,3-diaminonaphthalene (DAN), originally introduced for the quantitative determination of β-diketones [11], has been recently applied to MA determination in plasma or serum by HPLC with UV detection [12]. The reaction of DAN with MA affords a naphtodiazepine (MA-DAN) with a high UV response, very interesting in the view of free MA measurements in biological fluids. However, the reported experimental protocol requires a long derivatization time (180 min), low pH (pH 0.8) and no internal standard is described.เรามี ดังนั้น วิเคราะห์อย่างรอบคอบด้านต่าง ๆ เงื่อนไขการทดลองรักษาตัวอย่าง ขั้นตอนการ derivatization และใช้มาตรฐานภายในเหมาะสมที่สุด เมื่อมีการปรับเงื่อนไขเหล่านี้ เราได้เปรียบเทียบตอบ UV ของ MA-ด่านกับอนุพันธ์ MA ที่สอดคล้องกับ DNPH (MA DNP) สุดท้าย เรามีใช้โพรโทคอลของเราในการประเมินของ MA ฟรีในปลาผลิตภัณฑ์มีตลาด เช่นปลากระป๋องเนื้อ
การแปล กรุณารอสักครู่..
1 . บทนำ
มาโลนัลดีไฮด์ ( propandial , MA ) ได้รับอย่างกว้างขวางใช้เป็นเครื่องหมายของกรดไขมันไม่อิ่มตัวออกซิเจน [ 1 ] , [ 2 ] และ [ 3 ] ความมุ่งมั่นยังคงขึ้นอยู่กับ ) ) และในหมู่เหล่านี้ คนที่อาศัย ยูวี การประเมินผลของปุ่มตัวเลือกเกิดขึ้นระหว่างมาเท่ากับ acid ( TBA ) เป็นที่นิยมมากและใช้บ่อยสำหรับการประเมินความเครียดออกซิเดชัน [ 4 ] และ [ 5 ]แต่ TBA การทดสอบได้รับการพิจารณาเจาะจงมา [ 6 ] และได้รับการแนะนำขั้นตอนต่างๆ เพื่อเอาชนะปัญหาสัญญาณรบกวน [ 7 ] นอกจากนี้ การเตรียมตัวต้องแข็งกร้าว สภาวะการทดลองที่อาจก่อให้เกิดการก่อตัวของสิ่งประดิษฐ์ต่าง ๆ ที่รุนแรงสามารถขวางหรอกกับมากำหนด [ 8 ] ดังนั้นวิธีการต่าง ๆ ได้มีการเปิดตัวผลิตมาดัดแปลงภายใต้ภาวะที่ไม่รุนแรงก่อนที่ความมุ่งมั่นโดย GC และ HPLC tecniques [ 9 ] ตัวอย่างเช่นการวิเคราะห์ด้วย HPLC UV มาตรวจหา 2,4-dinitrophenylhydrazine ( dnph ) สามารถใช้เป็นทางเลือกในการรักษา . ในการศึกษาล่าสุดที่เฉพาะเจาะจงมากำหนดในปลามันได้ถูกแสดงว่า dnph ต้องการ TBA " เพื่อความเข้าใจอย่างละเอียดของการเกิด lipid peroxidation ในปลา " [ 10 ] เมื่อเทียบกับ TBA ) , ซัล dnph เกี่ยวข้องกับขั้นตอนการรักษาดีขึ้นในอุณหภูมิห้อง แต่ยังต้องการการรักษาที่เป็นกรดรุนแรง สารเคมีอื่น 2,3-diaminonaphthalene ( แดน )แต่เดิมแนะนำสำหรับการหาปริมาณบีตา - diketones [ 11 ] ได้ถูกใช้เมื่อเร็ว ๆ นี้ เพื่อมากำหนดในพลาสมา หรือเซรั่ม โดยวิธี HPLC ตรวจจับยูวีด้วย [ 12 ] ปฏิกิริยาของแดนกับมา affords naphtodiazepine ( ma-dan ) กับการตอบสนอง UV สูง , ที่น่าสนใจมากในมุมมองของฟรีมาวัดในของเหลวชีวภาพ อย่างไรก็ตามรายงานขั้นตอนการทดลอง ต้องใช้เวลานานกับ ( 180 นาที ) , pH ต่ำ ( pH 0.8 ) และภายในไม่มีมาตรฐานอธิบาย
เราได้ ดังนั้น อย่างวิเคราะห์หลายแง่มุมของเงื่อนไขการทดลองเช่นการรักษาตัวอย่าง , กับขั้นตอนและการใช้มาตรฐานภายในที่เหมาะสมที่สุด เมื่อเงื่อนไขเหล่านี้จะได้รับการปรับให้เหมาะสมเรามีการเปรียบเทียบ UV ma-dan ที่มีมาดัดแปลงที่สอดคล้องกับ dnph ( ma-dnp ) ในที่สุด เราก็ใช้โปรโตคอลของเราประมาณฟรี MA ในผลิตภัณฑ์ปลาที่มีอยู่ในตลาดเช่นกระป๋องปลาทูทอด .
การแปล กรุณารอสักครู่..