AbstractIncubation of cells and tis

Abstract
Incubation of cells and tissues with saponin makes the lipid bilayer permeable to macromolecules. Ghosts (membrane preparations) of saponin-lysed erythrocytes do not reseal, thus indicating an irreversible damage of the lipid bilayer. We investigated the influence of disturbance of the lipid bilayer on membrane proteins by comparing ghosts of saponin-lysed erythrocytes with ghosts of cells lysed in hypotonic buffer. Transmission electron microscopy revealed destruction of the lipid bilayer and emergence of multilamellar buds in saponin-lysed ghosts. Freeze-fracture electron microscopy showed regions with crystalline lipids and an increase in particle-free areas on fracture faces. The number of protein sulfhydryl groups and the binding of hemoglobin were diminished in saponin-lysed ghosts. A Scatchard plot of hemoglobin binding revealed the decrease of high affinity binding sites. All these results indicate an aggregation of band 3 protein also demonstrated by laser scanning microscopy after incubation of cells labelled with eosin-5-maleimide with sublytic concentration of saponin. Hemolysis with saponin also affected the interaction between transmembrane proteins and the cytoskeleton. Dissociation of peripheral membrane proteins by incubation of ghosts in low salt buffer or by blocking sulfhydryl groups was increased and the association of spectrin with spectrin-depleted vesicles was decreased. The increased incorporation of the fluorescent probe Merocyanine 540 into saponin-lysed ghosts and the increased relative fluorescence quantum yield confirmed the perturbation of the lipid bilayer and the changed interaction between membrane lipids and intrinsic membrane proteins. Our results suggest that permeabilization of the lipid bilayer with saponin to admit the access of antibodies to the cytoplasmic surface of cells can aggregate transmembrane proteins and affect the immunocytochemical localization of associated proteins of the cytoskeleton.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

บทคัดย่อIncubation of cells and tissues with saponin makes the lipid bilayer permeable to macromolecules. Ghosts (membrane preparations) of saponin-lysed erythrocytes do not reseal, thus indicating an irreversible damage of the lipid bilayer. We investigated the influence of disturbance of the lipid bilayer on membrane proteins by comparing ghosts of saponin-lysed erythrocytes with ghosts of cells lysed in hypotonic buffer. Transmission electron microscopy revealed destruction of the lipid bilayer and emergence of multilamellar buds in saponin-lysed ghosts. Freeze-fracture electron microscopy showed regions with crystalline lipids and an increase in particle-free areas on fracture faces. The number of protein sulfhydryl groups and the binding of hemoglobin were diminished in saponin-lysed ghosts. A Scatchard plot of hemoglobin binding revealed the decrease of high affinity binding sites. All these results indicate an aggregation of band 3 protein also demonstrated by laser scanning microscopy after incubation of cells labelled with eosin-5-maleimide with sublytic concentration of saponin. Hemolysis with saponin also affected the interaction between transmembrane proteins and the cytoskeleton. Dissociation of peripheral membrane proteins by incubation of ghosts in low salt buffer or by blocking sulfhydryl groups was increased and the association of spectrin with spectrin-depleted vesicles was decreased. The increased incorporation of the fluorescent probe Merocyanine 540 into saponin-lysed ghosts and the increased relative fluorescence quantum yield confirmed the perturbation of the lipid bilayer and the changed interaction between membrane lipids and intrinsic membrane proteins. Our results suggest that permeabilization of the lipid bilayer with saponin to admit the access of antibodies to the cytoplasmic surface of cells can aggregate transmembrane proteins and affect the immunocytochemical localization of associated proteins of the cytoskeleton.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

บทคัดย่อการฟักตัวของเซลล์และเนื้อเยื่อที่มีซาโปนินที่ทำให้ไขมัน bilayer ดูดซึมโมเลกุล
ผี (เตรียมเมมเบรน) เม็ดเลือดแดงของซาโปนิน-lysed ไม่ reseal จึงชี้เสียหายกลับไม่ได้ของไขมัน bilayer เราตรวจสอบอิทธิพลของความวุ่นวายของไขมัน bilayer ในโปรตีนโดยเปรียบเทียบผีของเม็ดเลือดแดงซาโปนิน-lysed กับผีของเซลล์ lysed ในบัฟเฟอร์ hypotonic ส่งกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนเปิดเผยการทำลายของไขมัน bilayer และการเกิดขึ้นของตา multilamellar ผีซาโปนินใน-lysed กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแช่แข็งแตกหักแสดงให้เห็นว่าพื้นที่ที่มีไขมันผลึกและการเพิ่มขึ้นในพื้นที่อนุภาคฟรีบนใบหน้าแตกหัก จำนวนของกลุ่มโปรตีน sulfhydryl และผูกพันของฮีโมโกลได้รับการลดลงในผีซาโปนิน-lysed พล็อต Scatchard ของเม็ดเลือดแดงลดลงมีผลผูกพันเปิดเผยของเว็บไซต์ที่มีผลผูกพันความสัมพันธ์สูง ผลทั้งหมดเหล่านี้บ่งบอกถึงการรวมตัวของวงดนตรี 3 แสดงให้เห็นถึงโปรตีนโดยใช้กล้องจุลทรรศน์เลเซอร์สแกนหลังจากฟักตัวของเซลล์ที่มีข้อความที่มี Eosin-5-maleimide ที่มีความเข้มข้นของซาโปนิน sublytic แตกของเม็ดเลือดแดงที่มีซาโปนินยังได้รับผลกระทบการปฏิสัมพันธ์ระหว่างโปรตีนและโครงร่างของเซลล์ที่ แยกออกจากกันของโปรตีนต่อพ่วงโดยฟักตัวของผีในบัฟเฟอร์เกลือต่ำหรือโดยการปิดกั้นกลุ่ม sulfhydryl เพิ่มขึ้นและความสัมพันธ์ของ spectrin กับถุง spectrin หมดลดลง รวมตัวกันที่เพิ่มขึ้นของการสอบสวนเรืองแสง Merocyanine 540 เข้าผีซาโปนิน-lysed ควอนตัมและผลผลิตเพิ่มขึ้นเมื่อเทียบเรืองแสงได้รับการยืนยันการก่อกวนของไขมัน bilayer และการทำงานร่วมกันระหว่างการเปลี่ยนแปลงเยื่อไขมันและโปรตีนที่แท้จริง ผลของเราแสดงให้เห็นว่า permeabilization ของไขมัน bilayer กับซาโปนินที่จะยอมรับการเข้าถึงของแอนติบอดีกับพื้นผิวนิวเคลียสของเซลล์สามารถรวมโปรตีนและส่งผลกระทบต่อการแปล immunocytochemical ของโปรตีนที่เกี่ยวข้องของโครงร่างของเซลล์ที่