The present inventors found that pr

The present inventors found that previously attempted
methods for ทรานสฟอร์ม Euglena are problematic in that the
introduced gene cannot be stably retained. To solve this problem,
the inventors conducted extensive research. First, based on a
report of double-stranded RNA being introduced into Euglena to 30 induce RNAi, the inventors investigated whether การทรานสฟอร์ม
can be performed in the same manner. More specifically, they
attempted to introduce genes by electroporation. However, no
Euglena carrying the introduced genes in an expressible manner was obtained.

The inventors then conceived of ทรานสฟอร์ม Euglena by
using the Agrobacterium method as a completely different process, and it has become evident that Euglena carrying the introduced genes in an expressible manner can be actually obtained by the
method.
The inventors further conducted extensive research
based on the above finding and accomplished the present invention. The invention is described below.
[0011]
1. Euglena of the Present Invention
[1-1]
A Euglena carrying a drug resistance gene and a foreign
gene of interest in an expressible manner.
15 [1-2]
The Euglena according to [1-1] , which carries the drug
resistance gene and the foreign gene of interest in an
expressible manner until it is subcultured for at least 10
passages in the absence of the drug.
20 [1-3]
The Euglena according to [1-1] or [1-2] , wherein the
drug is zeocin, hygromycin, or G418.
[1-4]
The Euglena according to any one of [1-1] to [1-3] ,
25 wherein the drug resistance gene and the foreign gene of interest
are under control of at least an endogenous promoter in the
Euglena.
[1-5]
The Euglena according to any one of [1-1] to [1-4] ,
30 wherein the drug resistance gene and the foreign gene of interest
are integrated in the genome.
[1-6]
The Euglena according to any one of [1-1] to [1-5] ,
which is obtainable by a method comprising the step of (1)
35 introducing the drug resistance gene and the foreign gene of







interest into a Euglena by the Agrobacterium method. [1-7]
The Euglena according to [1-6] , which is obtainable by
the method further comprising the step of (2) culturing the
Euglena obtained in step (1) in the presence of the drug.
[1-8]
The Euglena according to [1-7] , wherein the culture is
performed at a pH of 6 to 8.
[0012]
2. Method for Producing Euglena of the Present Invention
[2-1]

A method for producing a Euglena carrying a drug
resistance gene and a foreign gene of interest in an expressible manner, the method comprising the step of:
(1) introducing the drug resistance gene and the foreign gene of
interest into a Euglena by the Agrobacterium method. [2-2]
The method according to [2-1] , further comprising the
step of:
(2) culturing the Euglena obtained in step (1) in the presence of
the drug.
[2-3]

The method according to [2-1] or [2-2] , wherein the
drug is zeocin, hygromycin, or G418.
[2-4]
The method according to [2-3] , wherein the culture is
performed at a pH of 6 to 8.
[2-5]
The method according to any one of [2-1] to [2-4] ,
wherein the drug resistance gene and the foreign gene of interest
are under control of at least a Euglena endogenous promoter.
[2-6]
The method according to any one of [2-1] to [2-5] ,
wherein, in the Euglena produced, the drug resistance gene and
the foreign gene of interest are integrated in the chromosomal








genome by homologous recombination.

Advantageous Effects of Invention [0013]
The present invention makes it possible to provide a
Euglena ที่ถุกทรานสฟอร์ม with a gene of interest. The invention also makes it possible to provide a method for ทรานสฟอร์ม a Euglena with a gene of interest. The invention enables the introduced
trait to be retained for a long period of time and thus, for
example, is more suitable for substance production.


Brief Description of Drawings
[0014]
Fig. 1 is a plasmid map of pCMV/Zeo.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

นักประดิษฐ์ปัจจุบันพบว่ามีความพยายามก่อนหน้านี้วิธีการทรานสฟอร์มยูกลีนาจะมีปัญหาในที่นี้ไม่สามารถสะสมนำยีน stably การแก้ปัญหา นักประดิษฐ์ที่ดำเนินการวิจัยอย่างละเอียด ก่อน ยึดเป็น รายงานของขนคู่อาร์เอ็นเอถูกนำเข้าสู่ยูกลีนาถึง 30 RNAi ที่ก่อให้เกิดนักประดิษฐ์ที่ตรวจสอบว่าการทรานสฟอร์มสามารถทำในลักษณะเดียวกัน อื่น ๆ โดยเฉพาะ พวกเขาพยายามแนะนำยีน โดย electroporation อย่างไรก็ตาม ไม่ยูกลีนาโดยนำยีนในลักษณะ expressible ได้รับนักประดิษฐ์ที่แล้วรู้สึกของทรานสฟอร์มยูกลีนาโดยใช้วิธีอโกรแบคทีเรียมเป็นกระบวนการที่แตกต่างกันโดยสิ้นเชิง และมันได้กลายเป็นชัดว่า ยูกลีนาโดยนำยีนในลักษณะ expressible มีจริงได้โดยการ วิธีการนักประดิษฐ์ที่ดำเนินการวิจัยต่อไปตามค้นหาข้างต้น และทำสิ่งประดิษฐ์นำเสนอ ประดิษฐ์ที่อธิบายไว้ด้านล่าง [0011]1. ยูกลีนาของประดิษฐ์อยู่[1-1]ยูกลีนาที่ถือครองเป็นยีนต้านทานยาเสพติดและต่างประเทศยีนที่น่าสนใจในการ expressible15 [1 - 2]ยูกลีนาตาม [1-1], ซึ่งนำยาเสพติดยีนต้านทานและยีนต่างประเทศน่าสนใจในการลักษณะ expressible จนกว่ามันจะ subcultured น้อย 10ทางเดินในกรณียาเสพติด20 [1-3]ยูกลีนาตาม [1-1] หรือ [1 - 2] นั้นจะdrug is zeocin, hygromycin, or G418.[1-4]The Euglena according to any one of [1-1] to [1-3] ,25 wherein the drug resistance gene and the foreign gene of interestare under control of at least an endogenous promoter in theEuglena.[1-5]The Euglena according to any one of [1-1] to [1-4] ,30 wherein the drug resistance gene and the foreign gene of interestare integrated in the genome.[1-6]The Euglena according to any one of [1-1] to [1-5] ,which is obtainable by a method comprising the step of (1)35 introducing the drug resistance gene and the foreign gene of interest into a Euglena by the Agrobacterium method. [1-7]The Euglena according to [1-6] , which is obtainable bythe method further comprising the step of (2) culturing the Euglena obtained in step (1) in the presence of the drug.[1-8]The Euglena according to [1-7] , wherein the culture isperformed at a pH of 6 to 8.[0012] 2. Method for Producing Euglena of the Present Invention[2-1]A method for producing a Euglena carrying a drugresistance gene and a foreign gene of interest in an expressible manner, the method comprising the step of: (1) introducing the drug resistance gene and the foreign gene ofinterest into a Euglena by the Agrobacterium method. [2-2]The method according to [2-1] , further comprising thestep of: (2) culturing the Euglena obtained in step (1) in the presence ofthe drug.[2-3]The method according to [2-1] or [2-2] , wherein thedrug is zeocin, hygromycin, or G418. [2-4]The method according to [2-3] , wherein the culture isperformed at a pH of 6 to 8.[2-5]The method according to any one of [2-1] to [2-4] , wherein the drug resistance gene and the foreign gene of interestare under control of at least a Euglena endogenous promoter.[2-6]The method according to any one of [2-1] to [2-5] ,wherein, in the Euglena produced, the drug resistance gene and the foreign gene of interest are integrated in the chromosomal genome by homologous recombination.Advantageous Effects of Invention [0013] The present invention makes it possible to provide aEuglena ที่ถุกทรานสฟอร์ม with a gene of interest. The invention also makes it possible to provide a method for ทรานสฟอร์ม a Euglena with a gene of interest. The invention enables the introduced trait to be retained for a long period of time and thus, for example, is more suitable for substance production.Brief Description of Drawings[0014]Fig. 1 is a plasmid map of pCMV/Zeo.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

นักประดิษฐ์ในปัจจุบันพบว่ามีความพยายามก่อนหน้านี้
วิธีการในการทรานสฟอร์มยูกลีนามีปัญหาในการที่
ยีนแนะนำไม่สามารถเก็บไว้เสถียร เพื่อแก้ปัญหานี้
นักประดิษฐ์ดำเนินการวิจัย ครั้งแรกที่ขึ้นอยู่กับการ
รายงานของอาร์เอ็นเอเกลียวคู่ถูกนำเข้าสู่ยูกลีนาถึง 30 ทำให้เกิด RNAi ประดิษฐ์ตรวจสอบว่าการทรานสฟอร์ม
สามารถดำเนินการในลักษณะเดียวกัน โดยเฉพาะอย่างยิ่งพวกเขา
พยายามที่จะแนะนำยีนโดย electroporation อย่างไรก็ตามยังไม่มีการ
ดำเนินการยูกลีนายีนนำมาใช้ในลักษณะที่แสดงออกได้. ประดิษฐ์คิดแล้วของทรานสฟอร์มยูกลีนาโดยใช้วิธี Agrobacterium เป็นกระบวนการที่แตกต่างกันอย่างสมบูรณ์และมันได้กลายเป็นที่เห็นได้ชัดว่ายูกลีนาแบกยีนแนะนำในการแสดงออก ลักษณะที่สามารถรับได้จริงโดยวิธี. ประดิษฐ์ต่อไปดำเนินการวิจัยบนพื้นฐานของการค้นพบดังกล่าวและประสบความสำเร็จประดิษฐ์ในปัจจุบัน สิ่งประดิษฐ์ที่อธิบายไว้ด้านล่าง. [0011] 1 ยูกลีนาของประดิษฐ์ปัจจุบัน[1-1] ยูกลีนาแบกยีนต้านทานยาเสพติดและต่างประเทศของยีนที่น่าสนใจในลักษณะที่แสดงออก. 15 [1-2] ยูกลีนาตาม [1-1] ซึ่งถือยาเสพติดของยีนต้านทาน และยีนที่ต่างประเทศที่น่าสนใจในลักษณะที่แสดงได้จนกว่าจะมีการเลี้ยงอย่างน้อย 10 ทางเดินในกรณีที่ไม่มียาเสพติด. 20 [1-3] ยูกลีนาตาม [1-1] หรือ [1-2] ประเด็นยาเสพติดเป็น zeocin, ไฮโกรไมหรือ G418. [1-4] ยูกลีนาตามที่คนใดคนหนึ่ง [1-1] ไปที่ [1-3] 25 นั้นยีนต้านทานยาเสพติดและการแสดงออกของยีนที่สนใจของต่างประเทศที่อยู่ภายใต้การควบคุมของที่ น้อยก่อการภายนอกในยูกลีนา. [1-5] ยูกลีนาตามที่คนใดคนหนึ่ง [1-1] ไปที่ [1-4] 30 นั้นยีนต้านทานยาเสพติดและการแสดงออกของยีนต่างประเทศที่น่าสนใจมีการบูรณาการในจีโนม[1-6] ยูกลีนาตามที่คนใดคนหนึ่ง [1-1] ไปที่ [1-5] ซึ่งได้มาโดยวิธีการประกอบขั้นตอนของ (1) 35 แนะนำยีนต้านทานยาเสพติดและการแสดงออกของยีนต่างประเทศที่น่าสนใจเข้ามา ยูกลีนาโดยวิธี Agrobacterium [1-7] ยูกลีนาตาม [1-6] ซึ่งได้มาโดยวิธีการต่อไปขั้นตอนของการประกอบ (2) การเพาะเลี้ยงยูกลีนาได้รับในขั้นตอนที่ (1) ในการปรากฏตัวของยาเสพติด. [1-8] ยูกลีนาตาม [1-7] ประเด็นวัฒนธรรมที่มีการดำเนินการที่ pH 6 ถึง 8 [0012] 2 วิธีการผลิตของยูกลีนาประดิษฐ์ปัจจุบัน[2-1] วิธีการในการผลิตยูกลีนาถือยาเสพติดและยีนต้านทานยีนต่างประเทศที่น่าสนใจในลักษณะที่สามารถแสดงวิธีการประกอบขั้นตอนของการ: (1) แนะนำยีนต้านทานยาเสพติด และต่างประเทศของยีนที่สนใจเป็นยูกลีนาโดยวิธี Agrobacterium [2-2] วิธีการที่สอดคล้องกับ [2-1] ต่อไปประกอบไปด้วยขั้นตอนของการ: (2) เพาะยูกลีนาได้รับในขั้นตอนที่ (1) ในการปรากฏตัวของ. ยาเสพติด[2-3] วิธีการที่สอดคล้องกับ [ 2-1] หรือ [2-2] ประเด็นยาเสพติดเป็น zeocin, ไฮโกรไมหรือ G418. [2-4] วิธีการที่สอดคล้องกับ [2-3] ประเด็นวัฒนธรรมที่มีการดำเนินการที่ค่า pH 6-8 [2-5] วิธีการตามที่คนใดคนหนึ่ง [2-1] ไปที่ [2-4] นั้นยีนต้านทานยาเสพติดและการแสดงออกของยีนที่สนใจของต่างประเทศที่อยู่ภายใต้การควบคุมอย่างน้อยก่อการภายนอกยูกลีนา. [2-6 ] วิธีการตามที่คนใดคนหนึ่ง [2-1] ไปที่ [2-5] ขัดแย้งในยูกลีนาผลิตยีนต้านทานยาเสพติดและการแสดงออกของยีนต่างประเทศที่น่าสนใจรวมอยู่ในโครโมโซมจีโนมโดยการรวมตัวกันอีกคล้ายคลึงกัน. ผลของการได้เปรียบ การประดิษฐ์ [0013] ประดิษฐ์ในปัจจุบันทำให้มันเป็นไปได้ที่จะให้ยูกลีนาที่ถุกทรานสฟอร์มที่มียีนที่น่าสนใจ ประดิษฐ์นอกจากนี้ยังทำให้มันเป็นไปได้ที่จะให้วิธีการในการทรานสฟอร์มยูกลีนาที่มียีนที่น่าสนใจ สิ่งประดิษฐ์ที่ช่วยให้การแนะนำให้รู้จักลักษณะที่จะถูกเก็บรักษาไว้เป็นระยะเวลานานของเวลาและดังนั้นสำหรับตัวอย่างเช่นจะเหมาะสำหรับการผลิตสาร. รายละเอียดโดยย่อของภาพวาด[0014] รูป 1 เป็นแผนที่ของพลาสมิด pCMV / เซโอ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ประดิษฐ์ ปัจจุบันพบว่า ก่อนหน้านี้พยายาม
วิธีการทรานสฟอร์มยูกลีนาเป็นปัญหาที่
แนะนำยีนไม่สามารถอย่างถาวร สะสม เพื่อแก้ปัญหานี้
ประดิษฐ์การอย่างละเอียด แรก ตามรายงานของคู่ตีเกลียว RNA ถูกนำเข้าสู่ห้วยทราย 30 ให้เกิด RNAi , นักประดิษฐ์สอบสวนว่าการทรานสฟอร์ม
สามารถดำเนินการในลักษณะเดียวกัน โดยเฉพาะอย่างยิ่งพวกเขา
พยายามแนะนำยีนโดย electroporation . แต่ไม่มี
ยูกลีนาแบกแนะนำยีนในลักษณะ expressible ได้

ประดิษฐ์แล้วรู้สึกทรานสฟอร์มห้วยทรายโดย
ใช้ Agrobacterium วิธีเป็นกระบวนการที่แตกต่างกันอย่างสิ้นเชิงและมันได้กลายเป็นชัดเจนที่ห้วยทรายถือแนะนำยีนในลักษณะ expressible สามารถเป็นจริงได้จาก

นักประดิษฐ์เพิ่มเติมวิธีการ ดำเนินการวิจัยอย่างละเอียดบนพื้นฐานของการค้นหา
ข้างบน และได้ประดิษฐ์ของขวัญ สิ่งประดิษฐ์ที่อธิบายไว้ด้านล่าง . 0011
[ ]
1 ยูกลีนาของปัจจุบันการประดิษฐ์
[ 1-1 ] : ยูกลีนาแบกยีนดื้อยาและต่างประเทศ
ยีนที่น่าสนใจ ในลักษณะที่ expressible .
15 [ 1-2 ]
ห้วยทรายตาม [ 1-1 ] ซึ่งเป็นยาต้านยีนและยีนต่างประเทศ

สนใจในลักษณะ expressible จน subcultured อย่างน้อย 10
หัวข้อในการขาดยา

20 [ 1-3 ] ห้วยทรายตาม [ 1-1 ] หรือ [ 1-2 ] ซึ่ง
ยา zeocin ยีนต้านยา hygromycin หรือ g418
[ ]
* .ที่ห้วยทรายตามหนึ่ง [ 1-1 ] [ 1-3 ] ,
25 ซึ่งการดื้อยาของยีนและยีนต่างชาติสนใจ
ภายใต้การควบคุมของอย่างน้อยหนึ่งในผู้สนับสนุนในห้วยทราย
.
[ 1-5 ]
ห้วยทรายตามหนึ่ง [ 1-1 ]
[ 1-4 ] 30 ซึ่งการดื้อยาของยีนและยีนต่างชาติสนใจ
รวมในจีโนม
[ ]
* .ที่ห้วยทรายตามหนึ่ง [ 1-1 ] [ 1-5 ] ,
ซึ่งได้มาโดยวิธีการประกอบด้วยขั้นตอน ( 1 )
3 แนะนำการดื้อยาของยีนและยีนของต่างประเทศ







สนใจเข้าห้วยทรายโดย Agrobacterium วิธี [ 1-7 ]
ห้วยทรายตาม [ 1-6 ] ซึ่งได้มาโดย
วิธีเพิ่มเติมประกอบด้วยขั้นตอนการเพาะ
( 2 )