2.1. Culture conditions and experim

2.1. Culture conditions and experimental design
Lemna minor and Lemna gibba fronds were collected from a
natural water pond located in Eskis ¸ ehir, Turkey (39170 N, 30300 E).

The plants were cultivated for one month in a growth chamber
under the following controlled conditions according to OECD test
protocol (OECD, 2006): 24 ± 2 C, photosynthetic photon flux
density 85 mmol m2 s1, and a photoperiod of continuous light.

Prior to culture period, the plants were gently rinsed with a 0.5%
bleach solution for 5 min to remove algae, gastropod and undesired organisms (Frederic et al., 2006).

In order to maximize plant growth, SIS (Swedish Standard) medium, as a suitable medium for
growth inhibition test, was used for the present experiment
(Megateli et al., 2009). The chemical composition of SIS medium as
follows (in mg L1): NaNO3, 85; KH2PO4, 13.4; MgSO4$7H2O, 75;
CaCl2$H2O, 36; Na2CO3, 20; H3BO3, 1; MnCl2$4H2O, 0.2;
Na2MoO4$2H2O, 0.01; ZnSO4$7H2O, 0.05; CuSO4$5H2O, 0.005;
Co(NO3)2$6H2O, 0.01; FeCl3$6H2O, 0.84; Na2-EDTA$2H2O, 1.4.
Before culture period and toxicity experiment the SIS medium was
autoclaved at 120 C for sterilization. Lemna fronds were grown and
cultured in plastic containers (surface area 0.616 m2) containing
sterilized SIS medium until the beginning of the toxicity experiment.

Sub-samples of Lemna fronds were periodically transferred
to fresh and sterilized SIS medium according to Pietrini et al. (2015)
to prevent contamination by algae and to allow adaptation to SIS
medium as indicated in the OECD guideline.


The experiment was run in plastic Erlenmeyer flasks (test containers) covered with glass plates (flaks volume of 250 mL, flaks
surface area of 7.6 cm2) in a growth chamber (photosynthetic
photon flux density 85 mmol m2 s1, and a photoperiod of
continuous light at 24 ± 2 C) under static conditions. In order to
avoid the potential pitfall such as moss contamination, a 7-day
testing schedule was evaluated for the present experiment as reported by Bocük et al. (2013) € .

Following adaptation period, bright
green and healthy plants were selected from stock culture and 7
Lemna colonies with 3 fronds were transferred carefully to the
Erlenmeyer flasks containing 100 mL SIS medium with different B
concentrations.

In the present toxicity experiment, the investigation was carried out with culture medium contaminated by various
B concentrations obtained by dissolution of H3BO3 (Merck, purity > 99) arranged in a geometric series: 2 (control), 4, 8, 16, 32, 64,
128 mg L1.

For each Lemna species and test concentrations, two
experimental groups were created for the study. Each group consists of 6 flasks with plants in the related B concentrations: one of
2 N. Gür et al. / Chemosphere 157 (2016) 1e9these groups (as referenced G1) was used to assess the growth
assessment of plants and the chlorophyll content in terms of the B
toxicity, and the other group (as referenced G2) was selected to
determine antioxidants enzyme activities and remedial purpose.
All experiments were repeated in triplicate




2.2. Growth parameters and toxicity assessment
The estimation of the growth in plants was based on frond
number in G1. Specifically, all visible fronds were counted and
fronds counting were performed manually every day during the 7-
day test period (OECD, 2006). In order to determine fresh weight of
the plants, fronds were surface-dried between layers of paper
towels for 2 min, and fresh weight was determined. After fresh
weight determination, fronds were dried at 80 C to measure dry as
weight described by Radic et al. (2011).
Relative growth rate (RGR) was calculated the following equation according to OECD guidelines (OECD, 2006) using:
RGR ¼
ln
NJ  lnðNIÞ
Dt (1)
where, RGR is the average specific growth rate for a specific test
period, Ni is the frond number in the test or control group at time i,
Nj is the frond number in the test or control group at time j and Dt is
the experiment period from i to j (7 days).
The percent inhibition of the growth rate (%Ir) for each test
concentration and plant species was determined by the equation
below:
%Ir ¼ MC  MB
MC  100 (2)
where MC is the mean value for RGR in the control and MB is the
mean value for RGR in each test concentration level.
The EC50 values were estimated with regression analyzes of
growth inhibition rate and applied log concentrations, as the dose
response data.
The average doubling time was determined for frond number in
the control test concentrations according to OECD test protocol. The
doubling time (Td) of frond number was calculated using:
Td ¼ lnð2Þ
M70 (3)
where M7-0 is the RGR over the test period in 7 days. The important
note is that Td should be less than 2.5 days for the test to be valid
according to OECD guideless.
Dry weight (DW) to fresh weight (FW) ratio was assessed by
using:
DWðgÞ
FWðgÞ (4)



2.3. Determina

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.1. วัฒนธรรมเงื่อนไขและออกแบบการทดลองรอง Lemna Lemna gibba ต่อยได้รวบรวมข้อมูลและจากการบ่อน้ำธรรมชาติที่อยู่ใน Eskis ¸ ehir ตุรกี (39 170 N, 30 300 E)พืชที่มีปลูกหนึ่งเดือนในการเจริญเติบโตใต้ต่อไปนี้ควบคุมเงื่อนไขตามทดสอบ OECDโพรโทคอล (OECD, 2006): 24 ± 2 C สังเคราะห์แสงโฟตอนฟลักซ์ความหนาแน่น 85 mmol m 2 s 1 และช่วงแสงของแสงต่อเนื่องก่อนระยะเวลาวัฒนธรรม พืชถูกเบา ๆ ล้าง ด้วย 0.5%สารฟอกขาวสำหรับ 5 นาทีการเอาสาหร่าย หอยกาบเดี่ยว และสิ่งมีชีวิต (เฟรเดริก et al. 2006) ที่ไม่พึงประสงค์ เพื่อให้พืชเจริญเติบโต SIS (มาตรฐานสวีเดน) ปานกลาง เป็นสื่อกลางเหมาะสำหรับการทดสอบการยับยั้งการเจริญเติบโต ใช้สำหรับการทดลองอยู่(Megateli et al. 2009) องค์ประกอบทางเคมีของ SIS กลางเป็นดังนี้ (ในมก.ที่ L 1): NaNO3, 85 KH2PO4, 13.4 MgSO4$ 7H2O, 75CaCl2$ H2O, 36 Na2CO3, 20 H3BO3, 1 MnCl2$ 4H2O, 0.2Na2MoO4$ 2H2O, 0.01 ZnSO4$ 7H2O, 0.05 CuSO4$ 5H2O, 0.005Co (NO3) 2$ 6H2O, 0.01 FeCl3$ 6H2O, 0.84 Na2-EDTA$ 2H2O, 1.4ก่อนระยะเวลาของวัฒนธรรมและความเป็นพิษ ปานกลาง SIS ทดลองนึ่งที่ 120 C สำหรับการฆ่าเชื้อ Lemna ต่อยถูกปลูก และล้างในภาชนะพลาสติก (พื้นที่ผิว 0.616 m2) ประกอบด้วยขนาดกลาง SIS ที่ผ่านการฆ่าเชื้อจนถึงจุดเริ่มต้นของการทดสอบความเป็นพิษ ตัวอย่างย่อย Lemna ต่อยถูกโอนเป็นระยะ ๆสด และผ่านการฆ่าเชื้อ SIS ปานกลางตาม Pietrini et al. (2015)เพื่อป้องกันการปนเปื้อน โดยสาหร่าย และอนุญาตให้มีการปรับตัวที่ SISขนาดกลางตามที่ระบุในแนวปฏิบัติ OECDการทดลองรันในพลาสติก Erlenmeyer ขวด (ทดสอบภาชนะ) ปกคลุม ด้วยแผ่นแก้ว (flaks ระดับ 250 mL, flaksพื้นผิวของ 7.6 cm2) ในห้องเจริญเติบโต (การสังเคราะห์แสงs m 2 โมลความหนาแน่นฟลักซ์ 85 โฟตอน 1 และช่วงแสงของแสงต่อเนื่องที่ 24 ± 2 C) ภายใต้สภาวะคงที่ เพื่อเป็นการหลีกเลี่ยงหลุมพรางมีศักยภาพเช่นตะไคร่น้ำปนเปื้อน 7 วันตารางการทดสอบถูกประเมินสำหรับการทดลองที่นำเสนอเป็นรายงาน โดย Bocük et al. (2013) € ปรับเวลา สดใสคัดเลือกจากหุ้นวัฒนธรรมและ 7 พืชสีเขียว และมีสุขภาพดีLemna อาณานิคม ด้วยการต่อย 3 ถ่ายโอนอย่างระมัดระวังเพื่อการErlenmeyer ขวด 100 มล. SIS ปานกลางกับ B แตกต่างกันที่ประกอบด้วยความเข้มข้น ในการทดลองความเป็นพิษที่อยู่ การสอบสวนดำเนินการกับสารเจือปนตามที่ต่าง ๆความเข้มข้นของ B ได้ โดยการละลาย H3BO3 (Merck บริสุทธิ์ > 99) จัดอยู่ในอนุกรมเรขาคณิต: 2 (ควบคุม), 4, 8, 16, 32, 64128 มิลลิกรัม L 1 สำหรับแต่ละ Lemna ชนิดและทดสอบความเข้มข้น สองกลุ่มทดลองถูกสร้างขึ้นสำหรับการศึกษา แต่ละกลุ่มประกอบด้วย 6 ขวดกับพืชในความเข้มข้นของ B ที่เกี่ยวข้อง: หนึ่ง2 N. Gür et al.กลุ่ม 1e9these Chemosphere 157 (2016) (ตามที่อ้างอิง G1) ถูกใช้เพื่อประเมินการเจริญเติบโตการประเมินพืชและคลอโรฟิลล์เนื้อหาในแง่ของตัว Bความเป็นพิษ และกลุ่มอื่น ๆ (ตามที่อ้างอิง G2) ได้รับเลือกให้ตรวจสอบกิจกรรมเอนไซม์ของสารต้านอนุมูลอิสระและแก้ไขวัตถุประสงค์การทดลองทั้งหมดซ้ำกันลข้อ2.2. เติบโตพารามิเตอร์และการประเมินความเป็นพิษการประเมินการเจริญเติบโตในพืชตาม frondหมายเลขในเซลล์ G1 เฉพาะ นับต่อยสามารถมองเห็นได้ทั้งหมด และการต่อยการนับถูกปฏิบัติด้วยตนเองทุกวันในช่วง 7-ระยะเวลาทดสอบวัน (OECD, 2006) เพื่อตรวจสอบน้ำหนักสดของพืช ต่อยมีผิวแห้งระหว่างชั้นของกระดาษผ้าขนหนูสำหรับ 2 นาที และน้ำหนักสดที่ถูกกำหนด หลังจากสดกำหนด น้ำหนักต่อยได้แห้งที่ 80 C วัดแห้งน้ำหนักที่อธิบายโดย Radic et al. (2011)คำนวณอัตราการเติบโตสัมพัทธ์ (RGR) ตามแนวทางของ OECD (OECD, 2006) สมการต่อไปนี้ใช้:RGR ¼ln NJ lnðNIÞDt (1), RGR อัตราการเติบโตเฉลี่ยที่เฉพาะสำหรับการทดสอบเฉพาะระยะเวลา Ni เป็น frond จำนวนในกลุ่มการทดสอบหรือควบคุมเวลาNj คือ จำนวน frond ในการทดสอบ หรือเป็นกลุ่มควบคุมที่เวลา j และ Dtระยะเวลาทดลองจากฉันไปเจ (7 วัน)การยับยั้งเปอร์เซ็นต์ของอัตราการเจริญเติบโต (% Ir) สำหรับแต่ละการทดสอบสายพันธุ์ที่ความเข้มข้นและพืชถูกกำหนด โดยสมการด้านล่าง:% Ir ¼ MC MBMC 100 (2)ที่ MC มีค่าเฉลี่ยสำหรับ RGR ในการควบคุม และ MB คือการหมายถึง มูลค่าสำหรับ RGR ในแต่ละระดับความเข้มข้นของการทดสอบEC50 ถูกประเมินค่า ด้วยการถดถอยวิเคราะห์ความยับยั้งการเจริญเติบโตและความเข้มข้นใช้ล็อก เป็นยาข้อมูลการตอบสนองโดยเฉลี่ยเพิ่มขึ้นเวลากำหนดสำหรับหมายเลข frond ในความเข้มข้นการทดสอบควบคุมตาม OECD ทดสอบโพรโทคอล การเวลา (Td) หมายเลข frond จะถูกคำนวณโดยใช้:Lnð2Þ td ¼M7 0 (3)M7 0 เป็น RGR ที่ระยะทดสอบใน 7 วัน สำคัญหมายเหตุคือ Td ควรมีอย่างน้อย 2.5 วันสำหรับการทดสอบถูกต้องตาม OECD guidelessน้ำหนักแห้ง (DW) เมื่อเทียบกับน้ำหนักสด (FW) ได้รับการประเมินโดยการใช้:DWðgÞFWðgÞ (4)2.3. Determina

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.1 เงื่อนไขวัฒนธรรมและการออกแบบการทดลอง
Lemna เล็กน้อยและ Lemna ใบ gibba ถูกเก็บรวบรวมจาก
บ่อน้ำธรรมชาติที่ตั้งอยู่ใน Eskis ¸ ehir, ตุรกี (39? 170 N, 30? 300 E).

พืชที่ได้รับการปลูกฝังสำหรับหนึ่งเดือนในห้องการเจริญเติบโต
ภายใต้ ในภายหลังตามเงื่อนไขการควบคุมตามการทดสอบ OECD
โปรโตคอล (OECD, 2006): 24 ± 2 C, การสังเคราะห์แสงโฟตอนฟลักซ์
? หนาแน่น 85 มิลลิโมลม. 2 วินาทีที่ 1 และช่วงแสงของแสงอย่างต่อเนื่องหรือไม่?.

ก่อนที่จะมีระยะเวลาการเลี้ยงพืชที่ถูกล้างเบา ๆ กับ 0.5%
น้ำยาฟอกขาวเป็นเวลา 5 นาทีเพื่อขจัดสาหร่ายหอยและสิ่งมีชีวิตที่ไม่พึงประสงค์ (เฟรเดริก et al., 2006).

เพื่อเพิ่มการเจริญเติบโตของพืช, SIS (สวีเดนมาตรฐาน) กลางเป็นสื่อที่เหมาะสมสำหรับการ
ทดสอบการยับยั้งการเจริญเติบโตเป็น ใช้สำหรับการทดลองในปัจจุบัน
(Megateli et al., 2009) องค์ประกอบทางเคมีของกลาง SIS เป็น
ดังต่อไปนี้ (มิลลิกรัม L 1?): NaNO3 85; KH2PO4 13.4; MgSO4 $ 7H2O 75;
CaCl2 $ H2O, 36; Na2CO3, 20; H3BO3, 1; MnCl2 $ 4H2O 0.2;
Na2MoO4 $ 2H2O, 0.01; ZnSO4 $ 7H2O, 0.05; CuSO 4 $ 5H2O, 0.005;
co (NO3) 2 $ 6H2O, 0.01; FeCl3 $ 6H2O, 0.84; Na2-EDTA $ 2H2O 1.4.
ก่อนที่ระยะเวลาวัฒนธรรมและความเป็นพิษการทดสอบกลาง SIS ได้รับการ
นึ่งฆ่าเชื้อที่ 120 องศาเซลเซียสในการฆ่าเชื้อ ใบ Lemna ปลูกและ
เพาะเลี้ยงในภาชนะพลาสติก (พื้นที่ผิว 0.616 m2) ที่มี
ขนาดกลาง SIS ฆ่าเชื้อจนถึงจุดเริ่มต้นของการทดสอบความเป็นพิษได้.

ตตัวอย่างใบ Lemna ถูกโอนเป็นระยะ ๆ
เพื่อให้สดและผ่านการฆ่าเชื้อกลาง SIS ตาม Pietrini et al, (2015)
เพื่อป้องกันการปนเปื้อนจากสาหร่ายและจะอนุญาตให้มีการปรับตัวเพื่อ SIS
กลางตามที่ระบุไว้ในแนวทางของ OECD.


การทดลองทำงานในขวด Erlenmeyer พลาสติก (ภาชนะ Test) ปกคลุมด้วยแผ่นกระจก (flaks ปริมาณ 250 มิลลิลิตร flaks
พื้นที่ผิวของ 7.6 cm2) ในห้องการเจริญเติบโต (สังเคราะห์แสง
โฟตอนฟลักซ์ความหนาแน่น 85 มิลลิโมล M? 2 s? ที่ 1 และช่วงแสงของ
แสงอย่างต่อเนื่อง ณ วันที่ 24 ± 2 องศาเซลเซียส) ภายใต้เงื่อนไขที่คงที่ เพื่อ
หลีกเลี่ยงอันตรายที่อาจเกิดขึ้นเช่นการปนเปื้อนตะไคร่น้ำ 7 วัน
กำหนดการทดสอบได้รับการประเมินผลการทดลองที่นำเสนอเป็นรายงานโดยBocük et al, (2013) €.

ตามระยะเวลาการปรับตัวสดใส
พืชสีเขียวและมีสุขภาพดีได้รับการคัดเลือกจากการเพาะเลี้ยงหุ้นและ 7
อาณานิคม Lemna มี 3 ใบถูกย้ายอย่างระมัดระวังกับ
ขวด Erlenmeyer มี 100 กลางมล SIS กับ B ที่แตกต่างกัน
มีความเข้มข้น.

ในการทดลองความเป็นพิษปัจจุบัน การตรวจสอบได้ดำเนินการกับสื่อวัฒนธรรมการปนเปื้อนต่าง ๆ
ความเข้มข้น B ที่ได้จากการสลายตัวของ H3BO3 (เมอร์คมีความบริสุทธิ์> 99) จัดให้อยู่ในชุดเรขาคณิต: 2 (Control), 4, 8, 16, 32, 64,
? 128 มิลลิกรัมต่อ 1 ลิตร .

สำหรับแต่ละ Lemna สายพันธุ์และการทดสอบความเข้มข้นของสอง
กลุ่มทดลองที่ถูกสร้างขึ้นสำหรับการศึกษา แต่ละกลุ่มประกอบด้วย 6 ขวดกับพืชในระดับความเข้มข้นที่เกี่ยวข้องกับ B: หนึ่งใน
2 N. เกอร์, et al / Chemosphere 157 (2016) กลุ่ม 1e9these (ตาม G1 อ้างอิง) ถูกนำมาใช้ในการประเมินการเจริญเติบโตของ
การประเมินของพืชและเนื้อหาคลอโรฟิลในแง่ของ B
เป็นพิษและกลุ่มอื่น ๆ (ตามที่ G2 อ้างอิง) ได้รับเลือกให้
พิจารณากิจกรรมที่สารต้านอนุมูลอิสระเอนไซม์ วัตถุประสงค์การแก้ไข.
ทุกการทดลองซ้ำในเพิ่มขึ้นสามเท่า




2.2 การเจริญเติบโตและการประเมินความเป็นพิษของ
การประมาณการการเจริญเติบโตในพืชก็ขึ้นอยู่กับเฟิน
จำนวนใน G1 โดยเฉพาะใบที่มองเห็นทั้งหมดถูกนับและ
ใบนับได้ดำเนินการด้วยตนเองทุกวันในช่วง 7-
ระยะเวลาการทดสอบวัน (OECD, 2006) เพื่อตรวจสอบน้ำหนักสดของ
พืชใบถูกผิวแห้งระหว่างชั้นของกระดาษ
ผ้าขนหนูเป็นเวลา 2 นาทีและน้ำหนักสดถูกกำหนด หลังจากสด
การกำหนดน้ำหนักใบแห้งที่ 80 องศาเซลเซียสในการวัดแห้งเป็น
น้ำหนักอธิบายโดย Radic et al, . (2011)
อัตราการเจริญเติบโตสัมพัทธ์ (RGR) คำนวณสมการต่อไปตามแนวทางของ OECD (OECD, 2006) โดยใช้:
RGR ¼
? LN นิวเจอร์ซีย์? ? lnðNIÞ
Dt (1)
ที่ RGR เป็นอัตราการเติบโตเฉลี่ยที่เฉพาะเจาะจงสำหรับการทดสอบเฉพาะ
ระยะเวลา Ni เป็นจำนวนเฟินในการทดสอบหรือการควบคุมกลุ่มในเวลาที่ฉัน,
นิวเจอร์ซีย์จำนวนเฟินในการทดสอบหรือการควบคุมกลุ่มในเวลา J และ dt คือ
ระยะเวลาการทดสอบออกจากฉันกับเจ (7 วัน).
การยับยั้งเปอร์เซ็นต์ของอัตราการขยายตัว (% IR) สำหรับการทดสอบแต่ละ
ความเข้มข้นและพันธุ์พืชที่ถูกกำหนดโดยสมการ
ดังต่อไปนี้:
% Ir ¼ MC? MB
MC? 100 (2)
ที่พิธีกรคือค่าเฉลี่ยสำหรับ RGR ในการควบคุมและ MB เป็น
ค่าเฉลี่ยสำหรับ RGR ในแต่ละระดับความเข้มข้นของการทดสอบ.
ค่า EC50 ประมาณกับการวิเคราะห์การถดถอยของ
อัตราการยับยั้งการเจริญเติบโตและใช้ความเข้มข้นเข้าสู่ระบบในขณะที่ปริมาณ
การตอบสนอง ข้อมูล.
เวลาที่เพิ่มขึ้นเฉลี่ยถูกกำหนดจำนวนเฟินใน
ความเข้มข้นของการทดสอบการควบคุมให้เป็นไปตามโปรโตคอลการทดสอบ OECD
เวลาสองเท่า (TD) จำนวนเฟินที่คำนวณโดยใช้:
Td ¼lnð2Þ
M7 0 (3)?
ที่ M7-0 เป็น RGR ในช่วงการทดสอบใน 7 วัน ที่สำคัญ
ควรทราบก็คือ Td ควรจะน้อยกว่า 2.5 วันสำหรับการทดสอบที่ถูกต้อง
ตาม OECD guideless.
น้ำหนัก (DW) เพื่อให้น้ำหนักสด (FW) อัตราการได้รับการประเมินโดย
ใช้:
DWðgÞ
FWðgÞ (4)



2.3 Determina