reagent was basically used as a rea

reagent was basically used as a reagent, and DEPC-treated water was used as water.
[0078]

About 100 4 of the Euglena cells (volume) was
collected and suspended by adding 1 ml of ISOGEN II. 400 'al of
DEPC water was added thereto, and the mixture was vigorously
stirred for 15 seconds and allowed to stand at room temperature

for 15 minutes. After centrifugation (17,400xg, 4°C, 10 min) was
performed, 1 ml of the supernatant was collected from the
supernatant fraction, taking care not to take out portions near the precipitate. 1 ml of isopropanol was added thereto, and the
mixture was mixed by inversion and then allowed to stand at room

temperature for 10 minutes. After centrifugation (17,400xg, 4°C,
15 min), the supernatant was discarded, and 500 4 of 75% ethanol
was added to the precipitate, followed by centrifugation
(17,400xg, 4°C, 10 min). The precipitate was washed again with 75%
ethanol and subjected to centrifugation (17,400xg, 4°C, 5 min).
The supernatant was completely removed, and the precipitate was dissolved in 20 4 of DEPC water. The concentration of RNA was determined by measuring the A260 value with a spectrophotometer.

[0079]
5. 7. 2 RT-PCR
For a reverse transcription reaction, SuperScript II
Reverse Transcriptase (Invitrogen) was used. RT-PCR was performed

using 5 vg of the total RNA.
[0080]
Reverse transcription reaction solution 1 with the
composition shown in ตาราง 9 was used.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

โดยทั่วไปใช้รีเอเจนต์เป็นรีเอเจนต์การ และใช้ DEPC ถือน้ำเป็นน้ำ[0078]มีประมาณ 100 4 เซลล์ยูกลีนา (ไดรฟ์ข้อมูล)รวบรวม และระงับ โดยการเพิ่ม 1 ml ของ ISOGEN II 400 ' อัลของเพิ่มน้ำ DEPC จุด และส่วนผสมเป็นดั่ง กวน 15 วินาที และอนุญาตให้ยืนที่อุณหภูมิห้อง15 นาที หลังจาก centrifugation (17, 400xg, 4° C, 10 นาที) ได้ดำเนินการ 1 ml ของ supernatant ถูกรวบรวมจากการsupernatant เศษส่วน การดูแลการออกบางส่วนใกล้ precipitate 1 ml ของ isopropanol เพิ่มจุด และ ส่วนผสมผสม โดยกลับ และสามารถยืนอยู่ในห้องอุณหภูมิ 10 นาที หลังจาก centrifugation (17, 400xg, 4° C15 นาที), supernatant ถูกถูกละทิ้ง และ 500 4 ของเอทานอล 75%ถูกเพิ่มไป precipitate ตาม centrifugation(17, 400xg, 4° C, 10 นาที) Precipitate ถูกล้างอีก 75% เอทานอล และการ centrifugation (17, 400xg, 4° C, 5 นาที)Supernatant ถูกเอาออกอย่างสมบูรณ์ และ precipitate ถูกละลายใน 20 4 น้ำ DEPC ความเข้มข้นของอาร์เอ็นเอที่ถูกกำหนด โดยการวัดค่า A260 กับเป็นเครื่องทดสอบกรดด่าง[0079]5. 7 2 RT-PCRสำหรับการ transcription ย้อนปฏิกิริยา ตัวยกสองใช้ Transcriptase ย้อนกลับ (Invitrogen) ทำการ RT-PCR ใช้ vg 5 ของอาร์เอ็นเอทั้งหมด[0080]กลับ transcription ปฏิกิริยาชั่น 1 พร้อมใช้องค์ประกอบที่แสดงในตาราง 9

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สารที่ใช้โดยทั่วไปเป็นน้ำยาและน้ำ DEPC รับการรักษาที่ใช้เป็นน้ำ.
[0078] ประมาณ 100 4 ของเซลล์ยูกลีนา (โดยปริมาตร) ถูกเก็บรวบรวมและระงับโดยการเพิ่ม 1 มิลลิลิตร ISOGEN ครั้งที่สอง 400 'อัลของน้ำ DEPC ถูกบันทึกดังกล่าวและส่วนผสมที่ได้รับแรงกวนเวลา 15 วินาทีและอนุญาตให้ยืนที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 15 นาที หลังจากการหมุนเหวี่ยง (17,400xg 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที) ได้รับการดำเนินการ 1 มิลลิลิตรของสารละลายที่ถูกเก็บมาจากส่วนใสดูแลไม่ที่จะออกจากส่วนที่อยู่ใกล้ตะกอน 1 มิลลิลิตรของ isopropanol ถูกบันทึกดังกล่าวและส่วนผสมที่ถูกผสมโดยผกผันและได้รับอนุญาตแล้วจะยืนอยู่ที่ห้องอุณหภูมิประมาณ 10 นาที หลังจากการหมุนเหวี่ยง (17,400xg 4 องศาเซลเซียส15 นาที) ใสทิ้ง 500 และ 4 ของเอทานอล 75% ถูกบันทึกอยู่ในตะกอนตามด้วยการหมุนเหวี่ยง(17,400xg 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที) ตะกอนถูกล้างอีกครั้งด้วย 75% เอทานอลและเป็นไปหมุนเหวี่ยง (17,400xg 4 องศาเซลเซียส 5 นาที). ใสถูกลบออกอย่างสมบูรณ์และตะกอนที่ถูกกลืนหายไปใน 20 4 น้ำ DEPC ความเข้มข้นของอาร์เอ็นเอที่ได้รับการกำหนดโดยการวัดค่า A260 กับ spectrophotometer. [0079] 5 7. 2 RT-PCR สำหรับปฏิกิริยาถอดความกลับยกครั้งที่สองกลับ Transcriptase (Invitrogen) ถูกนำมาใช้ RT-PCR ได้ดำเนินการโดยใช้ 5 vg ของอาร์เอ็นเอทั้งหมด. [0080] ปฏิกิริยาย้อนกลับถอดความทางออกที่ 1 กับองค์ประกอบที่แสดงในตารางที่ 9 ถูกนำมาใช้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สารเคมีทั่วไปที่ใช้เป็นรีเอเจนต์เป็นและรักษา depc น้ำใช้น้ำ 0078
[ ]

ประมาณ 100 4 ของยูกลีนาเซลล์ ( ปริมาณ ) คือ
รวบรวมและระงับโดยการเพิ่ม 1 มิลลิลิตร isogen II 400 ' al ของ
depc น้ำเพิ่มสูงขึ้น และส่วนผสมเป็นชะมัด
คนเป็นเวลา 15 วินาทีและอนุญาตให้ยืน

ห้องอุณหภูมิประมาณ 15 นาที หลังการปั่นเหวี่ยง ( 17400xg 4 ° C , 10 นาที ) คือ
แสดง 1 มิลลิลิตร และน่านรวบรวมจาก
นำเศษส่วน , การดูแลไม่ให้เอาบางส่วนที่ใกล้ตะกอน 1 มิลลิลิตรของไอโซโพรพานอล ได้เพิ่มสูงขึ้น และผสมผสมโดย
ผกผันและได้รับอนุญาตแล้วให้ยืนที่ห้อง

) 10 นาที หลังการปั่นเหวี่ยง ( 17400xg 4 ° C ,
15 นาที ) , น่านถูกทิ้ง และ 500 4 75 % เอทานอล
เพิ่มเติมที่ตามด้วย 3
( 17400xg 4 ° C , 10 นาที ) ที่ถูกล้างอีกทีด้วยเอทานอล 75%
และต้องปั่น ( 17400xg 4 ° C 5 นาที )
น่านถูกลบออกอย่างสมบูรณ์และตะกอนละลายใน 20 4 depc น้ำ ความเข้มข้นของ RNA ถูกกำหนดโดยการวัดค่า a260 กับวัสดุ 0079

[ ]
5 7 .2 เทคนิค
สำหรับย้อนกลับถอดความปฏิกิริยาตัวยก 2
reverse transcriptase ( Invitrogen ) คือใช้ วิธีทำ

ใช้ 5 VG ของ RNA ทั้งหมด 0080
[ ]
ย้อนกลับถอดความปฏิกิริยาวิธีแก้ปัญหา 1 กับองค์ประกอบที่แสดงในตาราง
9
ใช้ .