The CReT plasmid pLSGETS101spc, com

The CReT plasmid pLSGETS101spc, comprised of the B.
subtilis conjugational plasmid pLS20 and the pBR322
sequence, was constructed by following 3 steps from (i) to
(iii) as illustrated in Fig. 2a: In step (i), the HindIII fragment of
pLS20cat carrying the cat gene was cloned into the unique
HindIII site of pGETS109 (Tomita et al., 2004b); this yielded
the Cm-resistant plasmid pBEAZ203 cloned in RM125. In step
(ii), pBEAZ208 carries a Spec resistance gene (spc) between
tet-half and amp-half of the pBR322 sequence (see also Fig. 1).
It was linearizedwith PvuII and ligated with the blunt-ended BglII
site of pBEAZ203 to produce pBEAZ211. Finally in step (iii),
pBEAZ211 was linearized with PmaCI and used to transform
BEST21274. As a result of homologous recombination between
linear pBEAZ211 and the residential pLS20cat, BEST21278
carrying pLSGETS101spc was selected by Spec and Cm. The
ability of conjugational transfer of pLSGETS101spc was measured
using our standard assay (Itaya et al., 2006).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

PLSGETS101spc ของ plasmid CReT ประกอบด้วย B.
subtilis pLS20 conjugational plasmid และ pBR322
ลำดับ ถูกสร้างโดย 3 ขั้นตอนจาก (i) ต่อไปนี้ to
(iii) ดังที่แสดงใน Fig. 2a: ในขั้นตอนที่ (i), HindIII แยกส่วนของ
pLS20cat แบกยีนแมวถูกโคลนเป็นเอกลักษณ์
HindIII ไซต์ของ pGETS109 (Tomita et al., 2004b); นี้ผล
pBEAZ203 plasmid ซม.ทนโคลนใน RM125 ใน step
(ii), pBEAZ208 นำยีนต้านทานข้อมูลจำเพาะ (spc) ระหว่าง
tet ครึ่ง และ ครึ่งแอมป์ลำดับ pBR322 (โปรดดู Fig. 1) .
มันคือ linearizedwith PvuII และควบกับ BglII ทู่สิ้นสุด
ของ pBEAZ203 ในการผลิต pBEAZ211 สุดท้าย ในขั้นตอน (iii),
เป็นเส้นตรง ด้วย PmaCI และใช้ในการแปลง pBEAZ211
BEST21274 จาก homologous recombination ระหว่าง
pBEAZ211 เชิงเส้นและ pLS20cat อยู่อาศัย BEST21278
แบก pLSGETS101spc เลือกตามข้อมูลจำเพาะและ Cm
ถูกวัดความสามารถในการถ่ายโอน conjugational pLSGETS101spc
ใช้ทดสอบมาตรฐานของเรา (อิตาย่าและ al., 2006)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

cret plasmid plsgets 101 เว็บแคมรุ่น SPC ที่ประกอบด้วยหมายเลข B .
subtilis conjugational plasmid โปรด 20 และ pbr 322
ที่ได้รับการก่อสร้างขึ้นตาม 3 ขั้นตอนจาก( i )เพื่อ
( iii )ตามที่ได้แสดงไว้ในรูป 2 A ในขั้นตอนที่( i ),ไม่ปะติดปะต่อกัน hindiii ของ
โปรด 20 แมวและกระเป๋าสำหรับพกพายีนแมวก็ถูกโคลนลงในเว็บไซต์
hindiii ที่โดดเด่นของ pgets 109 ( tomita et al . 2004 B )กะเอา
ตามมาตรฐานนี้ซม. - ทน plasmid pbeaz 203 ที่ถูกโคลนใน RM 125 ในขั้นตอนที่
( ii ) pbeaz 208 มียีนต่อต้าน spec ( SPC )ระหว่างรูป
TET - ครึ่งและ - ครึ่ง ของ 322 pbr ลำดับที่(ดูได้ 1 )..
มัน ligated และ pvuii linearizedwith กับไซต์ bglii
ไม่มีคม - สิ้นสุดของ pbeaz 203 ในการผลิต pbeaz 211 สุดท้ายในขั้นตอนที่( iii )
pbeaz 211 เป็น linearized ด้วย pmaci และใช้ในการเปลี่ยน
21274 ที่ดีที่สุดเป็นผลมาจากซึ่งมีตำแหน่งอย่างเดียวกัน recombination ระหว่าง
ตามแนวยาว pbeaz 211 และโปรดที่พักอาศัยที่ดีที่สุด 20 แมว 21278
และกระเป๋าสำหรับพกพา plsgets 101 เว็บแคมรุ่น SPC ถูกเลือกโดย spec และซม.
ความสามารถของการถ่ายโอน conjugational ของ plsgets 101 เว็บแคมรุ่น SPC วัดได้
การใช้สอบมาตรฐานของเรา( itaya et al . 2006 )