2.5. Protein oxidation measurement2

2.5. Protein oxidation measurement
2.5.1. Protein carbonyls
Carbonyl measurement is the most common method for determining
protein oxidation. Protein carbonyls were measured by
estimation of total carbonyl groups according to the method of Levine
et al. (1990) with some modifications as described by Srinivasan
and Hultin (1995). From two fractions of 50 ll protein samples,
one aliquot was treated with 2 ml of 2.0 N HCl (control) and the
other was treated with 2.0 ml of 10 mM 2,4-dinitrophenylhydra-
1026 A. Soyer et al. / Food Chemistry 120 (2010) 1025–1030
zine (DNPH) in 2.0 N HCl for 1 h at room temperature. After incubation,
the two fractions were then precipitated with 2.0 ml of 20%
trichloroacetic acid. The precipitate was washed twice with 4.0 ml
of ethanol:ethylacetate (1:1, v/v) solution to remove unreacted
DNPH and blow-dried. The pellet was then dissolved in 1.5 ml of
6.0 M guanidine hydrochloride with 20 mM potassium phosphate
buffer (pH 2.3). Absorbance was measured at 370 nm. The amount
of protein carbonyl content was expressed as gmol of mg protein
using an absorption coefficient of 2.2 104 M1 cm1 for protein
hydrazones.
2.5.2. Sulphydryls
Sulphydryl groups (thiol content) were determined according to
the method described by Srinivasan and Hultin (1997). Total free
sulphydryl groups were determined by reacting with 5,50
-dithiobis
(2-nitrobenzoic acid) (DTNB). One gram of meat was blended with
50 ml of cold distilled water and homogenised. Protein concentration
of homogenate was diluted to 2 mg/ml with 0.1 M phosphate
buffer (pH 7.4) and protein content was determined using the Biuret
method. A 0.5 ml of homogenate was transferred to a tube and
dissolved in urea buffer (1:1). After incubation with 0.5 ml DTNB
reagent at room temperature for 15 min, absorbance was measured
at 412 nm. Sample blanks with 0.5 ml phosphate buffer
without DTNB and reagent blanks with only water were prepared.
Sulphydryl content was calculated using a molar extinction coeffi-
cient of 11,400 M1 cm1 for 5,50
-dithiobis at this wavelength. Results
were expressed as gmol of total free sulphydryl groups per
milligram of protein.
2.6. Statistical analyses
All values obtained from four measurements were analysed by a
two-factor factorial design for each meat type (leg and breast). The
factors were freezing temperature (7, 12, 18 C) and duration
of storage at 18 C (1–6 months). The data obtained were subjected
to statistical analyses using MINITAB for Windows Release
13.1 (MINITAB, 2000) (Minitab Inc., State College, PA, USA). When
the factors were significant across frozen temperature or storage
duration, means were separated using the Duncan Multiple Range
Test (MstatC, 1986).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5. โปรตีนออกซิเดชันวัด2.5.1. โปรตีน carbonylsวัด carbonyl เป็นวิธีสำหรับการกำหนดโปรตีนเกิดออกซิเดชัน โปรตีน carbonyls ถูกวัดโดยการประเมินของกลุ่ม carbonyl ตามวิธีของเลวีนet al. (1990) มีปรับเปลี่ยนบางอย่างตามที่อธิบายไว้ โดย Srinivasanและ Hultin (1995) จากเศษส่วนสองอย่าง 50 ll โปรตีนส่วนลงตัวหนึ่งได้รับการรักษา ด้วย 2 มล.ของ 2.0 N HCl (ควบคุม) และอื่น ๆ ได้รับการรักษากับ 2.0 ml 10 มม. 2, 4-dinitrophenylhydra -1026 A. Soyer ร้อยเอ็ด / เคมีอาหาร 120 (2010) 1025-1030zine (DNPH) ใน 2.0 N HCl สำหรับ 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง หลังจากบ่มเศษส่วนสองถูกตกตะกอน ด้วย 2.0 ml 20% แล้วtrichloroacetic กรด ตะกอนถูกล้างสองครั้ง ด้วย 4.0 mlของการแก้ปัญหาเอทานอล: ethylacetate (1:1, v/v) การเอา unreactedDNPH และ blow-dried เม็ดแล้วละลายใน 1.5 มิลลิลิตร6.0 ไฮโดรคลอไรด์ guanidine M 20 มม.โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 2.3) โดยวัดค่าที่ 370 nm ยอดเงินโปรตีน carbonyl เนื้อหาถูกแสดงเป็น gmol มิลลิกรัมโปรตีนโดยใช้ค่าสัมประสิทธิ์การดูดซึมของ cm1 2.2 104 M1 สำหรับโปรตีนhydrazones2.5.2. Sulphydrylsกำหนดตามกลุ่ม Sulphydryl (thiol เนื้อหา)วิธีการอธิบาย โดย Srinivasan และ Hultin (1997) รวมฟรีกลุ่ม sulphydryl ถูกกำหนด โดยการทำปฏิกิริยากับ 5,50-dithiobis(กรด 2-nitrobenzoic) (DTNB) หนึ่งกรัมเนื้อถูกผสมด้วย50 ml ของเย็นกลั่นน้ำ และนี้ ความเข้มข้นของโปรตีนของ homogenate ถูกเจือจางไป 2 มิลลิกรัม/มิลลิลิตรฟอสเฟต 0.1 Mบัฟเฟอร์ (pH 7.4) และโปรตีนเนื้อหาถูกกำหนดโดยใช้การสอบไบยูเร็ตวิธีการ ใน 0.5 ml ของ homogenate ถูกถ่ายโอนไปหลอด และละลายในยูเรียบัฟเฟอร์ (1:1) หลังจากบ่มด้วย 0.5 ml DTNBน้ำยาวัดค่าที่อุณหภูมิห้อง 15 นาทีที่ 412 nm ตัวอย่างช่องว่างกับบัฟเฟอร์ฟอสเฟต 0.5 mlไม่ มี DTNB และเอเจนต์ ช่องว่างที่ มีเพียงน้ำจัดทำขึ้นเนื้อหา Sulphydryl คำนวณใช้ coeffi สบสูญพันธุ์-cient ของ 11,400 M1 cm1 สำหรับ 5,50-dithiobis ที่ความยาวคลื่นนี้ ผลลัพธ์ถูกแสดงเป็น gmol sulphydryl ฟรีรวมกลุ่มต่อมิลลิกรัมโปรตีน2.6. สถิติวิเคราะห์ค่าที่ได้จากการวัดสี่ทั้งหมดได้วิเคราะห์โดยการการออกแบบแฟกทอเรียลสองปัจจัยแต่ละชนิดเนื้อสัตว์ (ขาและเต้านม) การปัจจัยที่ถูกแช่แข็งอุณหภูมิ (7, 12, 18 C) และระยะเวลาเก็บที่อุณหภูมิ 18 C (1-6 เดือน) ข้อมูลที่ได้ถูกต้องการวิเคราะห์ทางสถิติโดยใช้เน็ดสำหรับ Windows13.1 (เน็ด 2000) (เน็ด Inc. วิทยาลัยรัฐ PA สหรัฐอเมริกา) เมื่อปัจจัยสำคัญทั้งอุณหภูมิแช่แข็งหรือเก็บระยะเวลา วิธีแยกจากกันใช้ Duncan หลายช่วงการทดสอบ (MstatC, 1986)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5 โปรตีนวัดออกซิเดชัน
2.5.1 โปรตีนคาร์บอนิล
วัดคาร์บอนิลเป็นวิธีที่พบมากที่สุดในการพิจารณา
การเกิดออกซิเดชันของโปรตีน สำเนาโปรตีนถูกวัดโดย
การประมาณค่าในกลุ่มคาร์บอนิลรวมตามวิธีการของ Levine
et al, (1990) มีการปรับเปลี่ยนบางอย่างตามที่อธิบาย Srinivasan
และ Hultin (1995) จากสองเศษส่วนของกลุ่มตัวอย่างที่มีโปรตีน 50 LL,
หนึ่งหารรับการรักษาด้วย 2 มล. 2.0 N HCl (ควบคุม) และ
อื่น ๆ ที่ได้รับการรักษาด้วย 2.0 มล. 10 มิลลิเมตร 2,4-dinitrophenylhydra-
1026 A. Soyer et al, / อาหารเคมี 120 (2010) 1025-1030
แมกกาซีน (DNPH) ใน 2.0 N HCl เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง หลังจากบ่ม
สองเศษส่วนถูกตกตะกอนแล้วด้วย 2.0 มล. 20%
กรดไตรคลอโร ตะกอนถูกล้างครั้งที่สองกับ 4.0 มล.
เอทานอล: เอตทิลอะซิเตต (1: 1, v / v) วิธีการแก้ปัญหาที่จะลบ unreacted
DNPH และเป่าแห้ง เม็ดก็เลือนหายไปแล้วใน 1.5 มิลลิลิตร
6.0 M guanidine ไฮโดรคลอไรกับ 20 มิลลิเมตรโพแทสเซียมฟอสเฟต
บัฟเฟอร์ (pH 2.3) การดูดกลืนแสงวัดที่ 370 นาโนเมตร จำนวนเงิน
ของปริมาณโปรตีนคาร์บอนิลถูกแสดงเป็น gMol มิลลิกรัมของโปรตีน
โดยใช้ค่าสัมประสิทธิ์การดูดซึมของ 2.2 104 M1 CM1 โปรตีน
hydrazones.
2.5.2 Sulphydryls
กลุ่ม Sulphydryl (Content thiol) ได้รับการพิจารณาเป็นไปตาม
วิธีการที่อธิบายโดย Srinivasan และ Hultin (1997) รวมฟรี
กลุ่ม sulphydryl ถูกกำหนดโดยปฏิกิริยากับ 5,50
-dithiobis
(กรด 2 nitrobenzoic) (DTNB) หนึ่งกรัมของเนื้อสัตว์ได้รับการผสมกับ
50 มิลลิลิตรของน้ำกลั่นที่หนาวเย็นและ homogenised โปรตีนเข้มข้น
ของ homogenate ถูกเจือจาง 2 mg / ml 0.1 M ฟอสเฟต
บัฟเฟอร์ (pH 7.4) และปริมาณโปรตีนที่ถูกกำหนดโดยใช้ Biuret
วิธี 0.5 มิลลิลิตร homogenate ถูกย้ายไปยังหลอดและ
ละลายในบัฟเฟอร์ยูเรีย (1: 1) หลังจากการบ่ม 0.5 มล. DTNB
สารที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 15 นาที, การดูดกลืนแสงวัด
ที่ 412 นาโนเมตร ช่องว่างตัวอย่าง 0.5 มิลลิลิตรฟอสเฟตบัฟเฟอร์
โดยไม่ต้อง DTNB และช่องว่างน้ำยากับน้ำเท่านั้นถูกเตรียม.
เนื้อหา Sulphydryl ถูกคำนวณโดยใช้การสูญเสียฟันกราม coeffi-
ประสิทธิภาพ 11,400 M1 CM1 สำหรับ 5,50
-dithiobis ที่ความยาวคลื่นนี้ ผล
ที่ได้รับแสดงเป็น gMol กลุ่ม sulphydryl ฟรีรวมต่อ
มิลลิกรัมโปรตีน.
2.6 สถิติการวิเคราะห์
ค่าทั้งหมดที่ได้จากการวัดสี่ถูกนำมาวิเคราะห์โดย
ใช้รูปแบบปัจจัยสองปัจจัยสำหรับแต่ละประเภทเนื้อสัตว์ (ขาและเต้านม)
ปัจจัยที่ถูกแช่แข็งอุณหภูมิ (7, 12, 18 C) และระยะเวลา
ของการจัดเก็บที่ 18 C (1-6 เดือน) ข้อมูลที่ได้ถูกยัดเยียด
การวิเคราะห์ทางสถิติโดยใช้ MINITAB สำหรับ Windows Release
13.1? (MINITAB, 2000) (Minitab Inc. , วิทยาลัยรัฐ, PA, สหรัฐอเมริกา) เมื่อ
ปัจจัยที่มีนัยสำคัญทั่วอุณหภูมิแช่แข็งหรือการจัดเก็บข้อมูล
ระยะเวลาวิธีการที่ถูกแยกออกโดยใช้ดันแคนช่วงหลาย
ทดสอบ (MstatC, 1986)