Materials and methodsPlant material

Materials and methods
Plant material and greenhouse conditions
Based on previous studies (Calatayud et al., 2011), the drought tolerant accessions ‘ECU-973’ of Capsicum chinense Jacq. (code 12) and ‘BOL-58’ of Capsicum baccatum L. var. pendulum (code 14), and the water stress susceptible accessions ‘Piquillo de Lodosa’ ( code 8) and ‘Serrano’ of Capsicum annuum L. (code 5) were chosen as rootstocks in this study. The pepper cultivar ‘Verset’ ( California type; Rijk Zwaan) was grafted onto these four pepper accessions. The pepper seeds were sown on 1 December 2011 in 100- cell polystyrene trays filled with peat-based substrate and kept under a Venlo-type glasshouse. The plants were transplanted to 54- cell trays. The graft was performed on 12 February using the tube grafting method (cutting the growing tip of the rootstock at a 45◦ angle below the cotyledons, attaching the scion, previously cut at a 45◦ angle above the cotyledons, and fixing the rootstock and scion with a clip).
One month after grafting, the plants were placed in 5 L polyethylene pots covered with aluminum sheets (the root system having been previously washed clean of substrate). Pots were filled with a nutrient solution containing (in mmol L−1): 12.3 NO −; 1.02
3
2 + 2+ 2+
H2PO4−; 2.45 SO4 −; 3.24 Cl−; 5.05 K ; 4.23 Ca , 2.55 Mg and
micronutrients(15.8MFe2+,10.3MMn2+,4.2MZn2+,43.5M

B5+, 1.4M Cu2+) that had been artificially aerated. The electrical

conductivity and pH of this nutrient solution was 2.1dSm−1 and

6.5, respectively. Nutrient solution was added daily to compensate for absorption. After 7 days of seedling acclimation to the pots, PEG 8000 (Sigma Co.) was dissolved in a nutrient solution for inducing osmotic stress at 3.5% and 7% PEG. The osmotic potential of the solutions, measured with a vapor osmometer (Digital osmometer, Wescor, Logan, USA), were −0.35 and −0.77 MPa respectively. Nutrient solution (0% PEG) was approximately −0.05 MPa due to the presence of the nutrient salt.
The treatments were defined by three PEG levels (0%, 3.5%, and 7%) and four plant combinations (the cultivar ‘Verset’ grafted onto rootstock accessions 5, 8, 12 and 14). The grafted combinations (rootstock/cultivar) were labeled as: 5/cultivar, 8/cultivar, 12/cultivar and 14/cultivar. The ungrafted cultivar ‘Verset’ was used as control. The layout was completely randomized with three replications for each combination and six plants per replication.
All physiological measurements were performed at 7 (T1) and 14 (T2) days after PEG addition on a fully expanded mature leaf (third or fourth leaf from the shoot apex).
During the culture, plants were grown in a Venlo-type greenhouse under natural light conditions (610–870molm−2 s−1) and

temperature ranges were 21–24 ◦C; and relative humidity was 52 –72%.
Water relations
The osmotic potential of leaf sap (s in MPa) was measured using an osmometer (Digital osmometer, Wescor, Logan, USA). Two

independent determinations were performed on each replicate and plant combination, obtained from 6 plants per treatment and combination.
The leaves were tightly wrapped in aluminum foil, frozen at −80 ◦C, and stored in liquid nitrogen. After thawing, sap was collected from syringes at 25 ◦C and placed in the osmometer (Rodríguez-Gamir et al., 2010). Osmolyte content (mmolkg−1) was
converted to MPa using the Van’t Hoff equation. The osmotic adjustment (OA) was determined as the difference between the osmotic potential of the leaves at full turgor for control plants and the stressed plants (Garcia-Sanchez et al., 2007). Full turgor was achieved by rehydrating the leaves with distilled water in darkness for 24 h.
Six other similar leaves from two independent plants of each plant combination, PEG treatment, and replicate were collected to determine the (RWC) as (FW − DW)/(TW − DW) × 100 where FW is fresh weight, DW is dry weight, and TW is turgid weight.
Proline determination
Proline content was determined as described by Bates et al. (1973). Leaf pepper tissue (0.05 g) was ground in 3% sulfosalicylic acid, the homogenate was filtered, and 0.75 mL glacial acetic acid, and 0.75 mL ninhydrin reagent (1.25 g ninhydrin in 30 mL glacial acetic acid and 20 mL 6 N phosphoric acid) were added to an aliquot of the filtrate. The reaction mixture was boiled for 1 h, and readings were taken at a wavelength of 520 nm in a spectrophotometer. Three independent determinations were performed in three different extracts, obtained from 18 plants per treatment and combination (one leaf per plant or 500 mg (DW) of leaves, and six plants per extract).
Photosynthetic activity and chlorophyll fluorescence CO2 fixation rate (AN, mol CO2 m− s− ), stomatal conduc-
2 1
2 1
tance to water vapor (gs, mol H2O m− s− ), transpiration rate
2 1
(E, mmol H2O m− s− ), and substomatal CO2 concentration (Ci,
molCO mol−1 air) were measured at steady-state while main-
2
taining the plants at 1000molm−2 s−1 during 10–15min and

400 ppm CO2 with a LI-6400 (LI-COR, Nebraska, USA). Light curves were previously performed (data not shown) and AN was saturated at 900 mol m−2 s−1. Current fluorescence yield (F ) and
s
the maximum light adapted fluorescence were determined with the LI-6400 in the presence of an actinic illumination of 1000molphotonsm−2 s−1, and photochemical PSII efficiency

(PSII) was computed as the quotient (Genty et al., 1989).
To evaluate the presence of chronic photoinhibitory processes, the variable fluorescence ratio Fv/Fo = Fm − Fo/Fo (Babani and Lichtenthaler, 1996) was measured on leaves after 15 min in darkness using a portable pulse amplitude modulation fluorometer (PAM-2100, Walz, Effeltrich, Germany). The background fluorescence signal for dark adapted leaves (Fo) was determined with a 0.5molphotonm−2 s−1 measuring light at a frequency of 600Hz.

The application of a saturating flash of 10,000molphotonm−2 s−1
enabled estimations of the maximum fluorescence (Fm).
Gas exchange and fluorescence determinations were performed from 9:00 a.m. to 11:00 a.m. (GMT). One measurement per plant was performed, and ten different plants were used (n = 10) for each PEG treatment and plant combination.
Nitrate reductase activity
Nitrate reductase activity (EC 1.6.6.1) was determined in vivo following the methods described by Hageman and Hucklesby (1971) and Jaworki (1971). Discs of 1 cm diameter in mature fresh leaves, or pieces of 1 cm in roots, were punched out. Samples (200 mg) were suspended in a glass vial containing 10 mL of 100 mM potassium phosphate buffer (pH 7.5), 1% (v/v) npropanol and 100 mM KNO3. The glass vial was subjected to vacuum infiltration three times in order to induce anaerobic conditions in the incubation medium. Plant samples were incubated in a water bath at 30 ◦C for 60 min in the dark and placed in a boiling water bath for 5 min to stop enzymatic reaction. Nitrite released from plant material was determined colorimetrically at 540 nm (spectrophotometer PerkinElmer, Lambda 25) by adding 0.02% (w/v) N-naphthylethylenediamine and 1% sulphanilamide. A standard curve with KNO2 was prepared to calculate the amount of NO2 contained in the samples (Calatayud et al., 2008). Sampling and replicates were used as described for proline determination.

ungrafted pepper plants (cultivar ‘Verset’) and cultivar grafted onto accessions 5 , 8, 12 and 14. Dates are mean values ± SE for n = 6. Within each plant combination different letters indicate significant differences at P < 0.05 (LSD test).
Lipid peroxidation
Lipid peroxidation was estimated through malondialdehyde (MDA) determinations using thiobarbituric acid reaction, according to the protocol reported by Heath and Packer (1968), and modified in Dhindsa et al. (1981). The non-specific background absorbance reading at 600 nm was subtracted from specific absorbance reading at 532 nm. Sampling and replicates used as described for proline determination.
Statistical analyses
The results were subjected to multifactor variance analysis (Statgraphics Centurion for Windows, Statistical Graphics Corp.). The effect of the genotype and stress level was estimated and significant interactions (genotype × stress level) were observed for all the analyzed parameters. The mean comparisons were performed using Fisher’s least significance difference (LSD) test at P < 0.05.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการสภาพเรือนกระจกและวัสดุโรงงานขึ้นอยู่กับการศึกษาก่อนหน้า (Calatayud et al., 2011), ที่แล้งทนกับ accessions 'ECU-973' ของพริกหวาน chinense Jacq (รหัส 12) และ 'BOL-58' พริกหวาน baccatum L. เพียงลูกตุ้ม (รหัส 14), และความเครียดน้ำไวต่อ accessions 'Piquillo de Lodosa' (รหัส 8) และ 'Serrano' ของพริกหวาน annuum L. (รหัส 5) ถูกเลือกเป็น rootstocks ในการศึกษานี้ Cultivar พริก 'Verset' (แคลิฟอร์เนียชนิด Rijk Zwaan) ที่ grafted บน accessions พริกไทยสี่เหล่านี้ เมล็ดพริกไทยถูกหว่าน 1 ธันวาคม 2554 ในถาดโฟม 100 เซลล์ ด้วยพรุตามพื้นผิว และเก็บไว้ภายใต้เรือนกระจกสำหรับปลูกต้นไม้ใน Venlo ชนิด พืชถูก transplanted กับถาด 54-เซลล์ รับสินบนที่ดำเนินการ 12 กุมภาพันธ์ใช้หลอด grafting วิธี (ตัด rootstock ปลายเติบโตที่มุม 45◦ ด้านล่าง cotyledons แนบไซออน ก่อนหน้านี้ ตัดที่มุม 45◦ เหนือ cotyledons และแก้ไข rootstock และไซออน มีคลิป)หนึ่งเดือนหลังจาก grafting พืชถูกวางในกระถางพลาสติก 5 L ที่ปกคลุม ด้วยอลูมิเนียมแผ่น (รากระบบก่อนหน้านี้แล้วล้างไม่สะอาดของพื้นผิว) หม้อเต็มไป ด้วยธาตุอาหารโซลูชันประกอบด้วย (ใน mmol L−1): 12.3 บาท−ไม่ 1.02 3 2 + 2 + 2 +H2PO4− 2.45 SO4 − 3.24 Cl− 5.05 K 4.23 Ca, 2.55 Mg และองค์ประกอบตามโรค (15.8MFe2+, 10.3MMn2+, 4.2MZn2+, 43.5M B5 + 1.4 M Cu2 +) ที่มีการสมยอมอากาศ การไฟฟ้า นำและโซลูชั่นนี้ธาตุอาหาร pH เป็น 2.1dSm−1 และ 6.5 ตามลำดับ มีเพิ่มโซลูชันธาตุอาหารทุกวันเพื่อชดเชยสำหรับการดูดซึม หลังจาก 7 วันของ acclimation แหล่งการหม้อ ตรึง 8000 (ซิก จำกัด) ถูกละลายในทางแก้ไขธาตุอาหาร inducing เครียดการออสโมติกที่ 3.5% และ 7% ตรึง ศักย์ของโซลูชั่น วัดกับ osmometer ไอ (ดิจิตอล osmometer, Wescor โล สหรัฐอเมริกา), มีแรง −0.77 และ −0.35 ตามลำดับ โซลูชั่นธาตุอาหาร (0% ตรึง) ประมาณ −0.05 แรงเนื่องจากเกลือธาตุอาหารรักษาที่กำหนดไว้ โดยสามระดับ PEG (0%, 3.5% และ 7%) และโรงงาน 4 ชุด (cultivar 'Verset' grafted บน accessions rootstock 5, 8, 12 และ 14) ชุด grafted (rootstock cultivar) ถูกติดป้ายว่าเป็น: 5/cultivar, 8/cultivar, 12/cultivar และ 14/cultivar Cultivar ungrafted 'Verset' ถูกใช้เป็นตัวควบคุม โครงร่างที่สมบูรณ์ randomized กับระยะที่ 3 สำหรับแต่ละชุดและพืช 6 ต่อจำลองดำเนินประเมินสรีรวิทยาทั้งหมด 7 (T1) และ 14 (T2) วันหลังจากนี้ตรึงบนใบไม้ผู้ใหญ่ขยายเต็ม (สาม หรือสี่ใบจาก apex ยิง)ระหว่างวัฒนธรรม พืชที่ปลูกในเรือนกระจกใน Venlo ชนิดภายใต้สภาพแสงธรรมชาติ (610 – 870molm−2 s−1) และ ช่วงอุณหภูมิ 21-24 ◦C ความชื้นสัมพัทธ์ 52 –72%ความสัมพันธ์ของน้ำศักย์ของใบ sap (s ในบริษัทเอ็มพีเอ) ถูกวัดโดยใช้การ osmometer (ดิจิตอล osmometer, Wescor โล สหรัฐอเมริกา) สอง determinations อิสระได้ดำเนินการในแต่ละซ้ำและโรงงานชุด ได้รับจากพืช 6 ต่อรักษาและชุดใบไม้ได้แน่นห่อฟอยล์อลูมิเนียม หยุด −80 ◦C และเก็บไว้ในไนโตรเจนเหลว หลัง thawing, sap ถูกรวบรวมจากเข็มฉีดยาที่ 25 ◦C และวางใน osmometer (Rodríguez Gamir et al., 2010) Osmolyte เนื้อหา (mmolkg−1) แปลงเป็นแรงที่ใช้สมการ Van't Hoff กำหนดปรับปรุงการออสโมติก (OA) เป็นผลต่างระหว่างศักย์ของใบไม้ที่ turgor เต็มสำหรับควบคุมพืชและพืชเครียด (การ์เซียซาน et al., 2007) Turgor เต็มสำเร็จ โดย rehydrating ใบ ด้วยน้ำกลั่นในความมืดใน 24 ชมหกใบอื่น ๆ คล้ายกันจากสองพืชที่ขึ้นอยู่กับแต่ละโรงงานผสม PEG รักษา และจำลองถูกรวบรวมเพื่อกำหนด (RWC) เป็น (FW − DW) / (−ผู้ที่ใช้ DW) × 100 ที่ FW มีน้ำหนักสด DW เป็นน้ำหนักแห้ง และผู้ที่ใช้เป็นน้ำหนัก turgidกำหนด prolineProline เนื้อหาที่ถูกกำหนดตามที่อธิบายไว้โดยเบตส์ et al. (1973) ใบพริกไทยเนื้อเยื่อ (0.05 g) คือ พื้นดินใน sulfosalicylic 3% กรด homogenate ที่ถูกกรอง และกรดอะซิติกน้ำแข็ง 0.75 มล. และรีเอเจนต์ ninhydrin 0.75 มล. (ninhydrin 1.25 g 30 mL น้ำแข็งกรดอะซิติกและกรดฟอสฟอริก N 20 mL 6) ถูกเพิ่มเป็นส่วนลงตัวของสารกรอง ปฏิกิริยาส่วนผสมถูกต้มสำหรับ 1 h และอ่านที่ถ่ายที่ความยาวคลื่นของ 520 nm ในการเครื่องทดสอบกรดด่าง Determinations อิสระสามได้ดำเนินการในสามบางส่วน ได้รับจากพืช 18 ต่อการรักษาและชุด (หนึ่งใบต่อพืชหรือ 500 มิลลิกรัม (DW) ใบไม้ และพืช 6 ต่อสารสกัด) Photosynthetic กิจกรรมและคลอโรฟิลล์ fluorescence CO2 เบีอัตรา (,โมล CO2 m− s−), stomatal conduc-2 12 1tance กับไอน้ำ (gs โมล H2O m− s−), อัตรา transpiration2 1(E, mmol H2O m− s−), และความเข้มข้น CO2 substomatal (CimolCO mol−1 อากาศ) ถูกวัดที่ท่อนขณะหลัก - 2 taining พืชที่ s−1 1000molm−2 ในระหว่าง 10 – 15 นาที และ 400 ppm CO2 กับแบบ LI-6400 (LI ประกอบ รัฐเนแบรสกา สหรัฐอเมริกา) โค้งแสงได้ดำเนินการก่อนหน้านี้ (ข้อมูลไม่แสดง) และ AN อิ่มตัวที่ 900 โมล m−2 s−1 ปัจจุบัน fluorescence ผลตอบแทน (F) และ s fluorescence ปรับไฟสูงสุดถูกกำหนดกับ LI-6400 ในต่อหน้าของแสงสว่างการ actinic 1000molphotonsm−2 s−1 และประสิทธิภาพ PSII photochemical (PSII) ถูกคำนวณเป็นผลหาร (Genty et al., 1989)การประเมินสถานะของโรค photoinhibitory ประมวลผล อัตราผันแปร fluorescence Fv/โฟ = Fm −โฟ/โฟ (Babani และ Lichtenthaler, 1996) ได้วัดบนใบไม้หลังจาก 15 นาทีในที่มืดใช้ fluorometer เอ็มชีพจรแบบพกพา (แพม-2100, Walz, Effeltrich เยอรมนี) กำหนดสัญญาณ fluorescence พื้นหลังสำหรับใบปรับมืด (โฟ) แสงวัด s−1 0.5molphotonm−2 ความถี่ 600 Hz ใช้แฟลช saturating 10, 000molphotonm−2 s−1 เปิดประมาณ fluorescence สูงสุด (Fm)Determinations fluorescence และแลกเปลี่ยนก๊าซได้ดำเนินการตั้งแต่ 9:00 น. 11:00 น. (GMT) ทำการประเมินหนึ่งต่อพืช และใช้ต้นไม้ 10 (n = 10) สำหรับตรึงรักษาและพืชชุดกิจกรรม reductase ไนเตรตกิจกรรม reductase ไนเตรต (EC 1.6.6.1) ถูกกำหนดในสัตว์ทดลองตามวิธีอธิบายไว้ โดย Hageman และ Hucklesby (1971) และ Jaworki (1971) เส้นผ่าศูนย์กลาง 1 ซ.ม.ใบสดผู้ใหญ่ หรือชิ้น 1 ซม.ราก ดิสก์ถูกเจาะรูออก ตัวอย่าง (200 มิลลิกรัม) ถูกหยุดชั่วคราวในคอนแทคแก้วที่ประกอบด้วย 10 mL 100 มม.โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.5), 1 npropanol % (v/v) และ 100 มม. KNO3 คอนแทคแก้วถูกยัดเยียดให้แทรกซึมดูดสามครั้งเพื่อก่อให้เกิดเงื่อนไขที่ไม่ใช้ออกซิเจนในการฟักตัว ตัวอย่างพืชถูก incubated ในห้องน้ำที่ 30 ◦C สำหรับ 60 นาทีในมืด และวางลงในน้ำน้ำเดือดสำหรับ 5 นาทีหยุดปฏิกิริยาเอนไซม์ในระบบ ไนไตรต์ที่ออกจากโรงงานวัสดุกำหนด colorimetrically ที่ 540 nm (เครื่องทดสอบกรดด่าง PerkinElmer แลมบ์ดา 25) โดยเพิ่ม 0.02% (w/v) sulphanilamide N naphthylethylenediamine และ 1% เส้นโค้งมาตรฐานกับ KNO2 ถูกเตรียมไว้เพื่อคำนวณยอดเงินของ NO2 ที่มีอยู่ในตัวอย่าง (Calatayud et al., 2008) สุ่มตัวอย่างและเหมือนกับได้ใช้ตามที่อธิบายไว้สำหรับกำหนด proline ungrafted พริกพืช (cultivar 'Verset') และ cultivar grafted บน accessions 5, 8, 12 และ 14 มีค่าเฉลี่ย± SE สำหรับ n = 6 ภายในโรงงานแต่ละ ชุดตัวอักษรต่าง ๆ บ่งชี้ความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญที่ P < 0.05 (การทดสอบ LSD)Peroxidation ของไขมันPeroxidation ของไขมันได้ประมาณผ่าน determinations malondialdehyde (MDA) ใช้ thiobarbituric กรดปฏิกิริยา ตามโพรโทคอลรายงาน โดยฮีธและห่อของ (1968), และแก้ไขใน Dhindsa et al. (1981) Absorbance พื้นหลังไม่ใช่เฉพาะที่อ่านที่ 600 nm ถูกหักออกจากเฉพาะ absorbance อ่านที่ 532 nm สุ่มตัวอย่างและเหมือนกับใช้ตามที่อธิบายไว้สำหรับกำหนด prolineวิเคราะห์ทางสถิติผลลัพธ์ถูกต้องในการวิเคราะห์ผลต่าง multifactor (Statgraphics อาสำหรับ Windows สถิติกราฟิก Corp.) มีประเมินผลของลักษณะทางพันธุกรรมและความเครียดระดับ และโต้ตอบอย่างมีนัยสำคัญ (ระดับความเครียดการซื้อลักษณะทางพันธุกรรม) ได้สังเกตสำหรับพารามิเตอร์ที่วิเคราะห์ทั้งหมด ดำเนินการเปรียบเทียบหมายถึงใช้ทดสอบความแตกต่าง (LSD) สำคัญน้อยที่สุดของ Fisher ที่ P < 0.05

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการวัสดุอาคารและสภาพเรือนกระจกจากการศึกษาก่อนหน้า(กาลาตายุด et al., 2011), ภัยแล้งสายใจกว้าง 'ECU-973 ของพริก chinense Jacq (รหัส 12) และ 'BOL-58 ของพริก baccatum L. var ลูกตุ้ม (รหัส 14) และความเครียดน้ำไวต่อสาย 'Piquillo เด Lodosa (รหัส 8) และ' Serrano ของพริก annuum L. (รหัส 5) ถูกเลือกให้เป็นต้นตอในการศึกษานี้ พริกพันธุ์ 'Verset' (แคลิฟอร์เนียประเภท; Rijk Zwaan) ถูกทาบลงบนทั้งสี่สายพริกไทย เมล็ดพริกไทยถูกหว่านวันที่ 1 ธันวาคมปี 2011 ในถาด 100 สไตรีนที่เต็มไปด้วยเซลล์ตั้งต้นพีทที่ใช้และเก็บไว้ภายใต้เรือนกระจก Venlo ประเภท พืชที่ถูกย้ายไป 54- ถาดเซลล์ การปลูกถ่ายอวัยวะได้ดำเนินการที่ 12 กุมภาพันธ์โดยใช้วิธีการปลูกถ่ายอวัยวะหลอด (ตัดปลายที่เพิ่มขึ้นของต้นตอที่มุมด้านล่าง45◦ใบเลี้ยงแนบปลูกถ่ายอวัยวะที่ตัดก่อนหน้านี้ที่มุม45◦เหนือใบเลี้ยงและแก้ไขต้นตอและการปลูกถ่ายอวัยวะ กับคลิป). หนึ่งเดือนหลังจากการปลูกถ่ายอวัยวะพืชถูกวางไว้ใน 5 กระถางพลาสติกชนิด L ปกคลุมไปด้วยลูมิเนียมแผ่น (ระบบรากที่มีการล้างทำความสะอาดก่อนหน้านี้ของพื้นผิว) หม้อที่เต็มไปด้วยสารอาหารที่มีวิธีการแก้ปัญหา (ในมิลลิโมล L-1): 12.3 NO -; 1.02 3 2 + 2 + 2 + H2PO4-; 2.45 SO4 -; 3.24 Cl-; 5.05 K; Ca 4.23, 2.55 มิลลิกรัมและธาตุอาหารเสริม(15.8MFe2 + 10.3MMn2 + 4.2MZn2 + 43.5M B5 + 1.4M Cu2 +) ที่ได้รับมวลเบาเทียม ไฟฟ้าการนำและค่า pH ของสารละลายธาตุอาหารนี้คือ 2.1dSm-1 และ 6.5 ตามลำดับ สารละลายธาตุอาหารที่ถูกเพิ่มทุกวันเพื่อชดเชยการดูดซึม หลังจากวันที่ 7 ของต้นกล้าที่จะปรับตัวหม้อ PEG 8000 (ซิกม่า จำกัด ) ถูกละลายในสารละลายธาตุอาหารสำหรับการกระตุ้นให้เกิดความเครียดออสโมติกที่ 3.5% และ 7% PEG ออสโมติกที่มีศักยภาพของการแก้ปัญหาที่วัดกับ Osmometer ไอ (Digital Osmometer, Wescor โลแกน, USA) เป็น -0.35 และ -0.77 MPa ตามลำดับ สารละลายธาตุอาหาร (0% PEG) อยู่ที่ประมาณ -0.05 MPa เนื่องจากการปรากฏตัวของสารอาหารเกลือ. การรักษาที่ถูกกำหนดโดยสามระดับ PEG (0%, 3.5% และ 7%) และสี่รวมกันของพืช (พันธุ์ 'Verset' ทาบลงบนต้นตอสาย 5, 8, 12 และ 14) ชุดทาบ (ต้นตอ / พันธุ์) ได้รับการระบุว่าเป็น: 5 / พันธุ์, 8 / พันธุ์, 12/14 และพันธุ์ / พันธุ์ พันธุ์ ungrafted 'Verset' ถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุม รูปแบบที่ได้รับการสุ่มอย่างสมบูรณ์กับสามซ้ำสำหรับการรวมกันในแต่ละครั้งและหกพืชต่อการจำลองแบบ. ทุกวัดทางสรีรวิทยาได้ดำเนินการที่ 7 (T1) และ 14 (T2) วันหลังจากนอกจาก PEG ในใบผู้ใหญ่ขยายตัวได้เต็มที่ (ใบที่สามหรือสี่จากการถ่ายทำ . ปลาย) ในระหว่างวัฒนธรรมพืชที่ปลูกในเรือนกระจก Venlo ชนิดภายใต้สภาพแสงธรรมชาติ (610-870molm-2 s-1) และช่วงอุณหภูมิอยู่ที่21-24 ◦C; และความชื้นสัมพัทธ์ 52 -72%. ความสัมพันธ์ของน้ำที่มีศักยภาพของการออสโมติกคั้นใบ (ใน MPa) วัดโดยใช้ Osmometer (Osmometer ดิจิตอล Wescor โลแกน, สหรัฐอเมริกา) สองหาความอิสระได้ดำเนินการในแต่ละซ้ำและการรวมกันของพืชที่ได้จากพืช 6 ต่อการรักษาและการรวมกัน. ใบถูกห่อไว้อย่างแน่นหนาในกระดาษฟอยล์อลูมิเนียมแช่แข็งที่ -80 ◦Cและเก็บไว้ในไนโตรเจนเหลว หลังจากที่ละลายทรัพย์ที่ถูกเก็บรวบรวมจากเข็มฉีดยาที่ 25 ◦Cและวางไว้ใน Osmometer (Rodríguez-Gamir et al., 2010) เนื้อหา Osmolyte (mmolkg-1) ได้รับการแปลงเป็นMPa ใช้สมการ Van't ฮอฟฟ์ การปรับออสโมติก (OA) ถูกกำหนดเป็นความแตกต่างระหว่างศักยภาพออสโมติกของใบที่ turgor เต็มรูปแบบสำหรับการควบคุมพืชและพืชเน้น (การ์เซียซานเชซ et al., 2007) turgor เต็มได้สำเร็จโดย rehydrating ใบด้วยน้ำกลั่นในความมืดเป็นเวลา 24 ชั่วโมง. หกใบอื่นที่คล้ายคลึงกันจากสองพืชอิสระจากกันรวมกันพืชรักษา PEG และทำซ้ำได้ถูกเก็บรวบรวมเพื่อตรวจสอบ (RWC) เป็น (FW - DW) / (ทีดับบลิว - DW) × 100 FW ที่มีน้ำหนักสด DW มีน้ำหนักแห้งและทีดับบลิวน้ำหนักขี้โอ่. Proline การกำหนดเนื้อหาProline ถูกกำหนดตามที่อธิบายไว้โดยเบตส์และอัล (1973) ใบเนื้อเยื่อพริกไทย (0.05 กรัม) ถูกพื้นดินใน 3% กรด sulfosalicylic, homogenate ถูกกรองและ 0.75 มิลลิลิตรน้ำแข็งกรดอะซิติกและ 0.75 มิลลิลิตร ninhydrin สาร (1.25 กรัม ninhydrin ใน 30 มิลลิลิตรน้ำแข็งกรดอะซิติกและ 20 มล 6 N กรดฟอสฟ) ที่ถูกเพิ่มเข้า aliquot ของกรองที่ ผสมปฏิกิริยาถูกต้มเป็นเวลา 1 ชั่วโมงและการอ่านที่ถูกนำมาที่ความยาวคลื่น 520 นาโนเมตรของในสเปก สามหาความอิสระได้ดำเนินการในสามของสารสกัดที่แตกต่างกันได้ตั้งแต่วันที่ 18 ต้นต่อการรักษาและการรวมกัน (หนึ่งใบต่อต้นหรือ 500 มิลลิกรัม (DW) ของใบและหกพืชต่อสารสกัด). กิจกรรมสังเคราะห์แสงและเรืองแสง CO2 คลอโรฟิลอัตราการตรึง (, mol CO2 m- s-) ปากใบนำไฟฟ้า2 1 2 1 ในระยะที่จะมีไอน้ำ (แม็ก mol H2O m- s-) อัตราการคาย2 1 (E, มิลลิโมล H2O m- s-) และความเข้มข้นของ CO2 substomatal ( Ci, molCO mol-1 อากาศ) วัดที่รัฐอย่างต่อเนื่องในขณะที่รุงรักษาที่2 ในประเด็นพืชที่ 1000molm-2 s-1 ในช่วง 10-15min และCO2 400 ppm กับ LI-6400 (LI-COR, เนบราสก้าสหรัฐอเมริกา) . เส้นโค้งแสงได้ดำเนินการก่อนหน้านี้ (ไม่ได้แสดงข้อมูล) และได้รับการอิ่มตัวที่ 900 ม. ​​mol-2 s-1 อัตราผลตอบแทนจากการเรืองแสงปัจจุบัน (F) และ s เรืองแสงแสงสูงสุดดัดแปลงได้รับการพิจารณาด้วย LI-6400 ในการปรากฏตัวของการส่องสว่าง actinic ของ 1000molphotonsm-2 s-1 และมีประสิทธิภาพแสง PSII (PSII) ได้รับการคำนวณผลหาร (Genty et .. อัล, 1989) เพื่อประเมินการปรากฏตัวของกระบวนการ photoinhibitory เรื้อรังอัตราส่วนเรืองแสงตัวแปร Fv / Fo = Fm - Fo / Fo (Babani และ Lichtenthaler, 1996) วัดบนใบหลังจาก 15 นาทีในความมืดโดยใช้การปรับความกว้างพัลส์แบบพกพา fluorometer (PAM-2100, วอลซ์, Effeltrich, เยอรมนี) สัญญาณเรืองแสงพื้นหลังสำหรับใบดัดแปลงมืด (Fo) ถูกกำหนดด้วย 0.5molphotonm-2 s-1 วัดแสงที่ความถี่ของ 600Hz. การประยุกต์ใช้แฟลชอิ่มตัวของ 10,000molphotonm-2 s-1 ที่เปิดใช้งานประมาณการของการเรืองแสงสูงสุด (Fm). การแลกเปลี่ยนก๊าซและการหาความเรืองแสงได้ดำเนินการ 09:00-11:00 (GMT) หนึ่งในวัดต่อต้นได้รับการดำเนินการและสิบพืชที่แตกต่างกันถูกนำมาใช้ (n = 10) สำหรับแต่ละการรักษา PEG และการรวมกันของพืช. กิจกรรม reductase ไนเตรตกิจกรรมreductase ไนเตรต (EC 1.6.6.1) ถูกกำหนดในร่างกายต่อไปนี้วิธีการที่อธิบายโดย Hageman และ Hucklesby (1971) และ Jaworki (1971) แผ่นขนาดเส้นผ่าศูนย์กลาง 1 เซนติเมตรใบสดผู้ใหญ่หรือชิ้นส่วนของ 1 เซนติเมตรรากถูกเจาะออก ตัวอย่าง (200 มก.) กำลังลอยอยู่ในขวดแก้วที่มี 10 มิลลิลิตร 100 มิลลิโพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.5), 1% (v / v) npropanol และ 100 มิลลิ KNO3 ขวดแก้วก็จะถูกแทรกซึมสูญญากาศสามครั้งเพื่อที่จะทำให้เกิดสภาพไร้ออกซิเจนในสื่อการบ่ม ตัวอย่างพืชที่ถูกบ่มในอ่างน้ำวันที่ 30 ◦C 60 นาทีในที่มืดและวางไว้ในอ่างน้ำเดือด 5 นาทีเพื่อหยุดปฏิกิริยาเอนไซม์ ไนไตรท์ปล่อยออกมาจากวัสดุจากพืชที่ถูกกำหนด colorimetrically ที่ 540 นาโนเมตร (spectrophotometer PerkinElmer แลมบ์ดา 25) โดยการเพิ่ม 0.02% (w / v) N-naphthylethylenediamine และ 1% sulphanilamide เส้นโค้งมาตรฐานที่มี KNO2 ได้เตรียมที่จะคำนวณปริมาณของ NO2 ที่มีอยู่ในตัวอย่าง (กาลาตายุด et al., 2008) การชักตัวอย่างและถูกนำมาใช้ซ้ำตามที่อธิบายไว้สำหรับการกำหนดโพรลีน. พืชพริกไทย ungrafted (พันธุ์ 'Verset) และพันธุ์ทาบลงบนสาย 5, 8, 12 และ 14 วันมีค่าเฉลี่ย± SE = n 6 รวมกันในแต่ละตัวอักษรที่แตกต่างกันของพืช บ่งบอกถึงความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญที่ P <0.05 (LSD ทดสอบ). ไขมัน peroxidation ไขมัน peroxidation เป็นที่คาดกันผ่าน Malondialdehyde (MDA) พิจารณาใช้ thiobarbituric ปฏิกิริยากรดตามโปรโตคอลที่มีการรายงานโดยเฮลธ์และเกย์ (1968) และการปรับเปลี่ยนใน Dhindsa et al, (1981) พื้นหลังที่ไม่เฉพาะเจาะจงในการอ่านการดูดกลืนแสงที่ 600 นาโนเมตรถูกหักออกจากการดูดกลืนแสงที่เฉพาะเจาะจงในการอ่านที่ 532 นาโนเมตร การเก็บตัวอย่างและใช้ซ้ำตามที่อธิบายไว้สำหรับการกำหนดโพรลีน. การวิเคราะห์ทางสถิติผลการถูกยัดเยียดให้การวิเคราะห์ความแปรปรวน Multifactor (นายก Statgraphics สำหรับ Windows, สถิติกราฟิกคอร์ป) ผลของยีนและระดับความเครียดเป็นที่คาดกันและการมีปฏิสัมพันธ์อย่างมีนัยสำคัญ (genotype ×ระดับความเครียด) ถูกตั้งข้อสังเกตสำหรับทุกพารามิเตอร์วิเคราะห์ เปรียบเทียบค่าเฉลี่ยได้ดำเนินการโดยใช้ความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญน้อยฟิชเชอร์ (LSD) การทดสอบที่ P <0.05

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการและสภาวะเรือนกระจก

วัสดุปลูกจากการศึกษาก่อนหน้านี้ ( Calatayud et al . , 2011 ) , แล้งสายพันธุ์ ' ' ของ ecu-973 พริก chinense jacq . ( รหัส 12 ) และ ' ' L . var . bol-58 ของพริก baccatum ลูกตุ้ม ( รหัส 14 ) และน้ำความเครียดต่างๆ piquillo de lodosa ไว ' ' ( รหัส 8 ) และ ' ' ของ Serrano พริก annuum L .( รหัส 5 ) ได้รับเลือกเป็นต้นตอ ในการศึกษานี้ พริกไทยพันธุ์ verset ' ' ( ประเภท แคลิฟอร์เนีย ริคจ์เป็นระยะ ) คือกราฟต์ลงบนทั้ง 4 สายพันธุ์พริก . พริกไทยเมล็ดหว่านบน 1 ธันวาคม 2011 ใน 100 - เซลล์โฟมถาดเต็มไปด้วยพรุตามพื้นผิวและเก็บไว้ภายใต้ Venlo ประเภท ) . พืชที่ถูกย้ายไปยัง 54 - มือถือถาดกราฟแสดงในวันที่ 12 กุมภาพันธ์ โดยใช้หลอดวิธีการทาบกิ่ง ( ตัดปลูกปลายเหง้าที่ 45 ◦มุมด้านล่างการแสดงออก แนบ ไซออน เมื่อก่อนตัดที่ 45 องศาเหนือ◦การแสดงออกและการแก้ไข และไซออนกับต้นตอคลิป ) .
1 เดือนหลังการกราฟต์พืชที่ถูกวางไว้ในกระถางพลาสติก 5 ลิตรปกคลุมด้วยแผ่นอลูมิเนียม ( ระบบรากได้รับก่อนหน้านี้ล้างสะอาดของพื้นผิว ) หม้อที่เต็มด้วยสารละลายธาตุอาหารที่ ( mmol l − 1 ) : 12.3 ไม่มี− 1 ;
3
2 2 2
h2po4 − ( −ปา ; ; 3.24 Cl − ; 5.05 K ; - CA , 95.00 มก. และ
( 15.8mfe2 10.3mmn2 4.2mzn2 micronutrients , , ,

43.5m B5 14M CU2 ) ที่ได้รับเทียม 5 . ไฟฟ้า

ค่า pH ของสารละลายธาตุอาหารและนี้คือ 2.1dsm − 1

และ 6.5 ตามลำดับ สารละลายธาตุอาหารที่ถูกเพิ่มเข้ามาทุกวัน เพื่อชดเชยการดูดซึม หลังจาก 7 วัน ต้นกล้าจะ acclimation หม้อ , PEG 8000 ( Sigma Co . ) ถูกละลายในสารละลายสำหรับโดยเน้นที่ 35% และ 7% ตรึง การศึกษาศักยภาพของโซลูชั่น วัดที่มีไอออสโมมิเตอร์ ( ออสโมมิเตอร์แบบดิจิตอล wescor โลแกน , USA ) , −− 0.35 MPA และ 0.77 ตามลำดับ สารละลายธาตุอาหาร ( 0 % ประมาณ 0.05 MPa PEG ) −เนื่องจากการแสดงตนของเกลือสารอาหาร .
การรักษาที่กำหนดโดยสามระดับ PEG ( 0% , 3.5 %และ 7 % ) และพืชทั้ง 4 ชุด ( verset ต่อกิ่งบนต้นตอพันธุ์ ' ' รวม 5 , 8 , 12 และ 14 ) การต่อกิ่งผสม ( ต้นตอ / พันธุ์ ) ถูกระบุว่าเป็น 5 / 8 พันธุ์ / สายพันธุ์ พันธุ์ 12 / 14 / พันธุ์ . ungrafted verset พันธุ์ ' ' ถูกใช้ควบคุม รูปแบบคือแบบสุ่มสมบูรณ์มี 3 ซ้ำสำหรับแต่ละชุดและ 6
ต้นต่อไร่การวัดผลทางสรีรวิทยามีการปฏิบัติที่ 7 ( T1 ) และ 14 ( T2 ) วัน หลังจากตรึง นอกจากนี้เมื่อใบแก่เต็มที่ ขยาย ( สามหรือสี่ใบ จากส่วนยอด ) .
ระหว่างวัฒนธรรม ปลูกในเรือนกระจก ภายใต้สภาพแสงชนิด Venlo ( 610 ) 870molm − 2 s − 1 ) และ

ช่วงอุณหภูมิ 21 – 24 ◦องศาเซลเซียส และความชื้นสัมพัทธ์อยู่ที่ 52 – 72 %
.
น้ำความสัมพันธ์ศักยภาพในการติดตั้งใบ ( ใน MPa ) การวัดออสโมมิเตอร์ ( ออสโมมิเตอร์แบบดิจิตอล wescor โลแกน , USA ) สอง

อิสระรวมทั้งการเลียนแบบและการรวมกันในแต่ละพืช ซึ่งพืชต่อการรวมกัน 6 .
ใบแน่นห่อด้วยอลูมิเนียมฟอยล์ , แช่แข็งที่อุณหภูมิ− 80 ◦ C และเก็บไว้ในไนโตรเจนเหลว หลังละลาย ,SAP รวบรวมจากเข็มฉีดยาที่ 25 ◦ C และวางไว้ในออสโมมิเตอร์ ( ลุยส์โรดรีเกซ มาร์ติน gamir et al . , 2010 ) osmolyte เนื้อหา ( mmolkg − 1 )
แปลง MPA ใช้ไม่ฮอฟรถตู้สมการ การปรับระบบ ( OA ) ถูกกำหนดโดยความแตกต่างระหว่างศักยภาพการของใบที่เต็มแล้วรู้สึกสำหรับพืชควบคุม และเน้นพืช ( การ์เซีย ซานเชส et al . , 2007 )เต็มแล้วรู้สึกทำโดย rehydrating ใบด้วยน้ำกลั่นในที่มืดเป็นเวลา 24 ชั่วโมง
6 ใบอื่นที่คล้ายคลึงกันจากสองพืชที่เป็นอิสระของแต่ละโรงงาน รวมหมดการรักษาและทำซ้ำในการตรวจสอบ ( สามารถ ) เป็น ( FW − ( − DW DW ) / TW ) × 100 ที่ FW เป็น DW น้ำหนักสด น้ำหนักแห้ง และ TW มีน้ำหนักการกำหนด

บวม .ปริมาณโพรลีนถูกกำหนดตามที่อธิบายไว้โดยเบตส์ et al . ( 1973 ) เนื้อเยื่อใบพริกไทย ( 0.05 กรัม ) คือพื้นดิน 3 % sulfosalicylic กรด อนถูกกรองและ 0.75 มิลลิลิตรกรดแอซีติกและ 0.75 มิลลิลิตร ninhydrin Reagent ( 1.25 กรัม ninhydrin 30 ml กรดแอซีติกและ 20 ml 6 N กรดฟอสฟอริก ) เพิ่มเป็นส่วนลงตัวของกรอง ปฏิกิริยาผสมถูกต้มนาน 1 ชั่วโมงและการอ่านถ่ายที่ความยาวคลื่น 520 nm ในวัสดุ 3 ) มีการใช้อิสระใน 3 สารสกัดต่าง ๆ ที่ได้จากการผสม ( 18 ต้นต่อหนึ่งใบต่อต้น หรือ 500 มิลลิกรัม ( DW ) ของใบและสารสกัดจากพืชต่อ 6 ) .
กิจกรรมการสังเคราะห์แสง และคลอโรฟิลล์ฟลูออเรสเซนซ์อัตราการตรึงคาร์บอนไดออกไซด์ ( CO2 , s −− 3 M -
2 ใบ conduc ) 1
2 1
ไปไอน้ำ ( GS , โมล H2O m − s − )
1
2 อัตราการคายน้ำ ( E , M s −− mmol H2O ) และ substomatal CO2 ความเข้มข้น ( CI ,
molco mol − 1 แอร์ ) เป็นวัดที่คงที่ในขณะที่หลัก -
2
1000molm สีย้อมพืชที่ − 2 s − 1 ระหว่าง 10 – 15 นาทีและ

400 ppm CO2 ด้วย li-6400 ( li-cor เนบราสก้า สหรัฐอเมริกา )เส้นโค้งแสงก่อนหน้านี้แสดง ( ข้อมูลไม่แสดง ) และเป็นอิ่มตัวที่อุณหภูมิ 900 mol m − 2 s − 1 ผลผลิตจากปัจจุบัน ( F )
s
แสงสูงสุดที่ดัดแปลงการตัดสินใจกับ li-6400 ต่อหน้ารัศมี actinic ของ 1000molphotonsm − 2 s − 1 และ 2 ประสิทธิภาพ psii

( psii ) คือคำนวณเป็นเชาวน์ ( เจนตี้ et al . , 1989 ) .
เพื่อประเมินสถานะของกระบวนการ photoinhibitory เรื้อรัง ตัวแปรอัตราส่วนการ FV / Fo = FM − . / . ( babani และ lichtenthaler , 1996 ) เป็นวัดบนใบ หลัง 15 นาทีในที่มืดโดยใช้พัลส์แบบพกพาระบบเอเอ็มฟลู โรมิเตอร์ ( pam-2100 วอลซ์ effeltrich , , , เยอรมัน ) สัญญาณเรืองแสงพื้นหลังมืดปรับใบ ( FO ) ถูกกำหนดเป็น 05molphotonm − 2 s − 1 วัดแสงที่ความถี่ของ 600Hz .

การประยุกต์ใช้แฟลชสูงของ 10000molphotonm − 2 s − 1
ใช้ประมาณการของการสูงสุด ( FM ) .
ใช้แลกเปลี่ยนก๊าซและเรืองแสงได้ตั้งแต่ 9.00 น. ถึง 11.00 น. ( GMT ) หนึ่งวัดต่อพืชได้ดําเนินการสิบ และพืชที่แตกต่างกันถูกนำมาใช้ ( N = 10 ) สำหรับแต่ละตรึงรักษาและการรวมกันของพืช ไนเตรท เอนไซม์ไนเตรตรีดักเทส

กิจกรรม ( EC 1.6.6.1 ) ถูกกำหนดโดยวิธีการที่อธิบายต่อไปนี้และโดยเฮจเมิ่น hucklesby ( 1971 ) และ jaworki ( 1971 ) แผ่น 1 ซม. เป็นใบสดหรือชิ้น 1 ซม. ราก เป็นชกออกไปตัวอย่าง ( 200 มิลลิกรัม ) ถูกระงับในขวดแก้วบรรจุ 10 ml 100 มิลลิโมลาร์โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.5 ) , 1% ( v / v ) และ npropanol kno3 100 มม. แก้วขวดภายใต้สามครั้งเพื่อที่จะทำให้แทรกซึมสุญญากาศไร้เงื่อนไขในบ่มกลางตัวอย่างพืชเลี้ยงในอ่างน้ำที่ 30 ◦ C นาน 60 นาที ในที่มืด และวางอยู่ในอ่างน้ำเดือดนาน 5 นาที เพื่อหยุดปฏิกิริยาเอนไซม์ . ไนไตรท์ออกมาจากวัสดุพืชตั้งใจ colorimetrically 540 nm ( Spectrophotometer Perkinelmer 25 lambda ) โดยการเพิ่ม 0.02 % ( w / v ) n-naphthylethylenediamine และ 1% sulphanilamide .เส้นโค้งมาตรฐานกับ kno2 เตรียมพร้อมจะคำนวณปริมาณของ NO2 ที่อยู่ในตัวอย่าง ( Calatayud et al . , 2008 ) ( ซ้ำ ) มาใช้อธิบายการกำหนด

ungrafted พริกไทยพืช ( verset พันธุ์ ' ' ) และพันธุ์ต่อกิ่งบน รวม 5 , 8 , 12 และ 14 วันที่จะหมายถึงค่า± Se n = 6ภายในแต่ละโรงงานผสมตัวอักษรที่แตกต่างกันแสดงความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญที่ P < 0.05 ( ทดสอบ LSD )

lipid peroxidation lipid peroxidation มาลอนไดอัลดีไฮด์ ( MDA ) ซึ่งผ่านการใช้ปฏิกิริยากรดเท่ากับตามโปรโตคอลที่รายงานโดยสุขภาพอนามัยและบรรจุหีบห่อ ( 1968 ) และการแก้ไขใน dhindsa et al . ( 1981 )โดยเฉพาะพื้นที่ 600 nm ก็อ่านค่าการดูดกลืนแสงที่เฉพาะเจาะจงที่หักออกจากอ่าน 532 nm . ตัวอย่าง และใช้สำหรับการอธิบายซ้ำกำหนด .

ผลวิเคราะห์ทางสถิติการวิเคราะห์ความแปรปรวน ( ถูก multifactor นายร้อย Statgraphics for Windows สถิติกราฟิกคอร์ป )อิทธิพลของพันธุกรรมและความเครียดอยู่ในระดับประมาณและปฏิสัมพันธ์อย่างมีนัยสำคัญ ( 24 ×ระดับความเครียด ) พบทั้งหมดวิเคราะห์พารามิเตอร์ คือ การเปรียบเทียบโดยใช้ปลาน้อยที่สุด ( LSD ) ทดสอบความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติที่ p < 0.05 .