ResultsLactobacilli Decelerate the

Results
Lactobacilli Decelerate the Host Cell Cycle
The three different Lactobacillus strains, L. rhamnosus, L. reuteri and
L. crispatus, were allowed to adhere to ME-180 cells separately. The
cell cycle progression was monitored by live cell microscopy; in
particular, images were acquired every 10 minutes for a total of 16
hours. A total of 900 individual cells per assay were followed, and
the time point when each cell had completed cytokinesis was
recorded. After 16 hours, 56% of the uninfected ME-180 cells had
completed cytokinesis. L. rhamnosus and L. reuteri affected the ME-
180 cells by decreasing the cell cycle rate, producing the result that
only 45% and 50%, respectively, of the ME-180 cells completed
cytokinesis during the 16 hours of microscopy (Fig. 1A). By
contrast, 55% of the ME-180 cells that were colonized by L.
crispatus had completed cytokinesis after 16 hours; thus, these cells
did not differ from untreated ME-180 cells with respect to cell
cycle progression. Time points of Lactobacillus colonization that
were longer than 16 hours were not feasible, because the dense
layer of bacteria that covered the epithelial cells at colonization
durations that were longer than 16 hours produced an impaired
ability to visually monitor all of the cytokinesis events (data not
shown). The standard deviations between control cells and cells
colonized with either L. rhamnosus or L. reuteri do not overlap, but
the values at 16 hours time-point have high standard deviations,
due to the ability of the bacterial colonization to influence cell
division frequencies of the host target cells. Standard deviations
were intentionally shown only in the 16 hours time-point in
figure 1A since the true variance of fulfilled cytokinesis over the
complete time period is presented in figure 2.
No increased apoptosis rates were visually observed. This was
confirmed by a MTT cell viability assay and a qPCR assay on the
pro-apoptotic gene BAX (Fig. S1). Then, we extrapolated from
the 11–16 hour time points; based on a linear progression, the
time that would be required for 100% of the cells to complete
cytokinesis. Using this assumption, 100% of ME-180 cells alone
would have completed cytokinesis after 27 hours (Fig. 1B). This
correlated well with 72-hours time-lapse data on ME-180 cells,
where individual cells were followed for timing the cell cycle (data
not shown). Cells that were colonized with L. crispatus would
exhibit an average completion time of 27.5 hours, a difference of
only 30 minutes from the control ME-180 cells. L. rhamnosus and L.
reuteri colonization would delay the average completion time to 37
hours and 32.5 hours, respectively.
The time-lapse experiments began at a low cellular confluence.
Figure 1C presents representative images from the start (0 h),
midpoint (8 h), and end (16 h) of the time-lapse experiments,
illustrating how the different lactobacilli adhere to and colonize
ME-180 cells and how the cells progress through the cell cycle
during the course of the assay. Despite the unique morphological
differences in the lactobacillus strains and the ability of the
bacteria to bind to both the ME-180 cells and the cell culture dish,
space remained available in the cell culture for the cells to divide

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ผลลัพธ์Lactobacilli ชะลอรอบเซลล์โฮสต์สายพันธุ์แลคโตบาซิลลัสต่าง ๆ สาม L. rhamnosus, L. reuteri และL. crispatus ได้รับอนุญาตให้ปฏิบัติตาม ME-180 เซลล์แยกต่างหาก ที่ถูกตรวจสอบความก้าวหน้ารอบเซลล์เซลล์สด microscopy ในเฉพาะ ภาพที่ได้รับมาทุก 10 นาทีจำนวน 16ชั่วโมง ตามผลรวมของแต่ละเซลล์ 900 ต่อวิเคราะห์ และจุดเวลาเมื่อแต่ละเซลล์ได้เสร็จสมบูรณ์ cytokinesis ถูกบันทึก หลังจาก 16 ชั่วโมง 56% ของเซลล์ ME-180 เชื้อได้cytokinesis เสร็จสมบูรณ์ L. rhamnosus และ L. reuteri ผล ME-เซลล์ 180 โดยการลดอัตรารอบเซลล์ ผลผลิตที่เพียง 45% และ 50% ตามลำดับ ของเซลล์ ME-180 เสร็จสมบูรณ์cytokinesis ในระหว่าง 16 ชั่วโมงของ microscopy (Fig. 1A) โดยความคมชัด 55% ของเซลล์ ME-180 ที่ถูกยึดครอง โดย L.crispatus ได้เสร็จ cytokinesis 16 ชั่วโมง ดังนั้น เซลล์เหล่านี้ไม่ได้แตกต่างจากเซลล์ที่ไม่ถูกรักษา ME-180 กับเซลล์รอบก้าวหน้า เวลาจุดของสนามแลคโตบาซิลลัสที่ได้นานกว่า 16 ชั่วโมงไม่เป็นไปได้ เนื่องจากหนาแน่นชั้นของแบคทีเรียที่ครอบคลุมเซลล์ epithelial ที่สนามระยะเวลาที่นานกว่า 16 ชั่วโมงผลิตการพิการความสามารถในการเห็นตรวจสอบเหตุการณ์ cytokinesis ทั้งหมด (ข้อมูลไม่แสดง) ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานระหว่างควบคุมเซลล์และเซลล์ยึดครอง L. rhamnosus หรือ L. reuteri ไม่เหลื่อม แต่ค่าที่จุดเวลา 16 ชั่วโมงมีค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานสูงเนื่องจากความสามารถของสนามจากแบคทีเรียจะมีผลต่อเซลล์ส่วนที่ความถี่ในเซลล์โฮสต์เป้าหมาย ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานได้แสดงเจตนาเฉพาะในเวลาจุด 16 ชั่วโมงในรูปที่ 1A ตั้งแต่ต่างจริงของ cytokinesis ดำเนินผ่านการเวลาทั้งหมดจะแสดงในรูปที่ 2เห็นสุภัค apoptosis เพิ่มราคาไม่ นี้ยืนยัน โดยการ MTT เซลล์ชีวิตวิเคราะห์และทดสอบ qPCR การโปร-apoptotic ยีน BAX (ฟิก S1) จากนั้น เรา extrapolated จากเวลา 11 – 16 ชั่วโมงคะแนน ตามความก้าวหน้าเชิงเส้น การเวลาที่จะจำเป็นสำหรับ 100% ของเซลล์ให้เสร็จสมบูรณ์cytokinesis ใช้นี้อัสสัมชัญ 100% ของ ME-180 เซลล์เพียงอย่างเดียวจะได้เสร็จสมบูรณ์ cytokinesis หลัง 27 ชั่วโมง (Fig. 1B) นี้correlated กับข้อมูลการหน่วงเวลา 72 ชั่วโมงเซลล์ ME-180ที่เซลล์แต่ละเซลล์ก็ตามสำหรับกำหนดเวลารอบเซลล์ (ข้อมูลไม่แสดง) เซลล์ที่ถูกยึดครอง ด้วย L. crispatus จะแสดงความสมบูรณ์เฉลี่ยเวลาชั่วโมง 27.5 ความแตกต่างของเพียง 30 นาทีจากเซลล์ควบคุม ME-180 L. rhamnosus และ L.สนาม reuteri จะหน่วงเวลาความสมบูรณ์เฉลี่ย 37ชั่วโมงและชั่วโมง 32.5 ตามลำดับเริ่มทดลองการหน่วงเวลาในการผสานเซลต่ำรูปที่ 1C แสดงรูปพนักงานตั้งแต่เริ่มต้น (0 h),จุดกึ่งกลาง (8 h), และ (16 h) สิ้นสุดการทดลองการหน่วงเวลาแสดงว่า lactobacilli ต่างยึดมั่น และ colonizeวิธีเซลล์ดำเนินวงจรเซลล์และเซลล์ ME-180ในระหว่างการดำเนินการทดสอบ แม้ มีเอกลักษณ์ของความแตกต่างในสายพันธุ์แลคโตบาซิลลัสและความสามารถของการแบคทีเรียไปผูกกับเซลล์ ME-180 และจานวัฒนธรรมเซลล์พื้นที่ที่ยังคงมีวัฒนธรรมเซลล์สำหรับเซลล์ในการแบ่ง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ผลลัพธ์
Lactobacilli ชะลอวงจรเซลล์โฮสต์
สามสายพันธุ์แลคโตบาซิลลัสที่แตกต่างกัน, L. rhamnosus, L. reuteri และ
L. crispatus ได้รับอนุญาตให้เป็นไปตาม ME-180 เซลล์แยกต่างหาก
ขบวนรอบเซลล์ได้รับการตรวจสอบโดยใช้กล้องจุลทรรศน์เซลล์สด; ใน
โดยเฉพาะอย่างยิ่งภาพที่ได้มาทุก 10 นาทีรวม 16
ชั่วโมง รวมของ 900 แต่ละเซลล์ต่อการทดสอบตามมาและ
จุดเวลาที่แต่ละเซลล์เสร็จ cytokinesis ได้รับการ
บันทึกไว้ 16 ชั่วโมง, 56% ของที่ไม่ติดเชื้อ ME-180 เซลล์ได้
เสร็จ cytokinesis L. rhamnosus และ L. reuteri ได้รับผลกระทบชั่ง
180 เซลล์โดยการลดอัตราวงจรมือถือ, การผลิตผลลัพธ์ที่
เพียง 45% และ 50% ตามลำดับของเซลล์ ME-180 เสร็จ
cytokinesis ในช่วง 16 ชั่วโมงของการใช้กล้องจุลทรรศน์ (รูปที่ 1A) โดย
ทางตรงกันข้าม 55% ของเซลล์ ME-180 ที่ได้รับการอาณานิคมโดยลิตร
crispatus เสร็จ cytokinesis หลังจาก 16 ชั่วโมง; ดังนั้นเซลล์เหล่านี้
ไม่ได้แตกต่างจากการได้รับการรักษาเซลล์ ME-180 ที่เกี่ยวกับเซลล์
ก้าวหน้าวงจร จุดเวลาของการล่าอาณานิคมแลคโตบาซิลลัสที่
อยู่นานกว่า 16 ชั่วโมงเป็นไปไม่ได้เพราะความหนาแน่น
ชั้นของแบคทีเรียที่ครอบคลุมเซลล์เยื่อบุผิวที่ตั้งรกราก
ที่มีระยะเวลานานกว่า 16 ชั่วโมงผลิตบกพร่อง
ความสามารถในการตรวจสอบด้วยสายตาทุกเหตุการณ์ cytokinesis (ข้อมูลไม่ได้
แสดง) ค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานระหว่างเซลล์ควบคุมและเซลล์
อาณานิคมที่มีทั้ง L. rhamnosus หรือ L. reuteri ไม่ทับซ้อน แต่
ค่าที่ใช้เวลา 16 ชั่วโมงเวลาจุดมีค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานสูง
เนื่องจากความสามารถของแบคทีเรียที่มีอิทธิพลต่อเซลล์
ความถี่ส่วนหนึ่งของ เซลล์เป้าหมายโฮสต์ ค่าเบี่ยงเบนมาตรฐาน
ที่มีการแสดงเจตนาเฉพาะใน 16 ชั่วโมงเวลาจุดใน
รูปที่ 1A ตั้งแต่ความแปรปรวนที่แท้จริงของ cytokinesis เติมเต็มในช่วง
ระยะเวลาที่สมบูรณ์จะนำเสนอในรูปที่ 2.
ไม่เพิ่มอัตราการตายถูกตั้งข้อสังเกตสายตา นี้ได้รับการ
ยืนยันโดยการทดสอบความมีชีวิตเซลล์ MTT และทดสอบ qPCR ใน
BAX ยีนโปร apoptotic (รูป. S1) จากนั้นเราจะประเมินจาก
จุดเวลา 11-16 ชั่วโมง; ขึ้นอยู่กับความก้าวหน้าเชิงเส้น
เวลาที่จะต้อง 100% ของเซลล์ที่จะเสร็จสมบูรณ์
cytokinesis โดยใช้สมมติฐานนี้ 100% ของเซลล์ ME-180 เพียงอย่างเดียว
จะได้เสร็จสิ้น cytokinesis หลังจาก 27 ชั่วโมง (รูป. 1B) นี้
มีความสัมพันธ์ดีกับ 72 ชั่วโมงข้อมูลไทม์บน ME-180 เซลล์
แต่ละเซลล์ที่ตามมาสำหรับระยะเวลาวงจรของเซลล์ (ข้อมูล
ไม่แสดง) เซลล์ที่ถูกอาณานิคมกับ crispatus ลิตรจะ
แสดงเวลาแล้วเสร็จเฉลี่ย 27.5 ชั่วโมงของความแตกต่าง
เพียง 30 นาทีจากการควบคุมเซลล์ ME-180 L. rhamnosus และ L.
reuteri ล่าอาณานิคมจะชะลอเวลาแล้วเสร็จโดยเฉลี่ยถึง 37
ชั่วโมงและ 32.5 ชั่วโมงตามลำดับ.
ทดลองไทม์เริ่มต้นที่บรรจบกันของเซลล์ต่ำ.
รูป 1C นำเสนอภาพตัวแทนจากจุดเริ่มต้น (0 ชั่วโมง)
จุดกึ่งกลาง ( 8 ชั่วโมง) และสิ้นสุด (16 ชั่วโมง) การทดลองไทม์,
แสดงวิธี lactobacilli ที่แตกต่างกันเป็นไปตามและตั้งรกราก
เซลล์ ME-180 และวิธีการที่เซลล์ความคืบหน้าผ่านวงจรมือถือ
ในระหว่างการทดสอบ แม้จะมีลักษณะทางสัณฐานวิทยาที่เป็นเอกลักษณ์
แตกต่างในสายพันธุ์แลคโตบาซิลลัสและความสามารถของ
แบคทีเรียที่จะผูกกับทั้ง ME-180 เซลล์และจานเพาะเลี้ยงเซลล์,
พื้นที่ยังคงมีอยู่ในเซลล์เพาะเลี้ยงเซลล์จะแบ่ง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แลคโตบาซิลัสลงรอบเซลล์โฮสต์ผล

ทั้งสามต่างสายพันธุ์ Lactobacillus L rhamnosus รัฐฟลอริดา crispatus
L , และ , ได้รับอนุญาตให้ปฏิบัติตาม me-180 เซลล์แยก
วัฏจักรของเซลล์ก้าวหน้าถูกตรวจสอบโดยอาศัยกล้องจุลทรรศน์เซลล์ ;
โดยเฉพาะภาพได้มาทุก 10 นาทีรวมเป็น 16
ชั่วโมง รวม 900 แต่ละเซลล์ต่อการทดสอบและ
ถูกตามจุดเวลาเมื่อแต่ละเซลล์ได้สมบูรณ์ไซโตพลาสซึมเป็น
บันทึก หลังจาก 16 ชั่วโมง 56 % ของเซลล์ me-180 มาก่อนได้
เสร็จไซโตพลาสซึม . ลิตรและ rhamnosus รัฐฟลอริดา ต่อผม -
180 เซลล์โดยเซลล์วงจรลดอัตราการผลิตผลที่
เพียงร้อยละ 45 และ 50 ตามลำดับ ของ me-180 เซลล์เสร็จ
ไซโตพลาสซึมในช่วง 16 ชั่วโมงของกล้องจุลทรรศน์ ( รูปที่ 1A ) โดย
ความคมชัด55% ของ me-180 เซลล์ที่ถูกปกครองโดย L .
crispatus ได้สมบูรณ์ไซโตพลาสซึมหลังจาก 16 ชั่วโมง ดังนั้น เหล่านี้เซลล์
ไม่แตกต่างจากเซลล์และ me-180 เกี่ยวกับวัฏจักรเซลล์
ที่ก้าวหน้า เวลาจุดของการล่าอาณานิคมแลคโตบาซิลลัสที่
ได้นานกว่า 16 ชั่วโมง ไม่สามารถเป็นไปได้ เพราะหนาแน่น
ชั้นของแบคทีเรียที่ปกคลุมเซลล์บุผิวในการล่าอาณานิคม
ระยะเวลาที่นานกว่า 16 ชั่วโมง ที่ความสามารถในการมองเห็นบกพร่อง
ตรวจสอบทั้งหมดของไซโตพลาสซึมเหตุการณ์ ( ข้อมูลไม่
แสดง ) ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานและระหว่างเซลล์คุมเซลล์
อาณานิคมด้วย . rhamnosus หรือ รัฐฟลอริดา ไม่ทับซ้อนกัน แต่ค่า
ณจุดเวลา 16 ชั่วโมง มีค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานสูง
เนื่องจากความสามารถของกลุ่มแบคทีเรียที่มีอิทธิพลต่อเซลล์
ส่วนความถี่ของโฮสต์ที่เซลล์เป้าหมาย
เบี่ยงเบนมาตรฐานจงใจแสดงเฉพาะใน 16 ชั่วโมงเวลาจุดใน
รูป 1A เนื่องจากความสำเร็จที่แท้จริงของไซโตพลาสซึมผ่าน
ระยะเวลาสมบูรณ์ที่แสดงในรูปที่ 2 ไม่มีการเพิ่มอัตรากำลังสายตา (
) นี้คือ
ยืนยันโดย MTT assay ในเซลล์และ qpcr ในกลุ่มที่มียีน
BAX ( รูปโปรS1 ) แล้ว เราคาดจาก
11 –เวลา 16 ชั่วโมง จุด ยึดเป็นแบบเชิงเส้น ,
เวลาที่จะต้องใช้ 100% ของเซลล์ที่สมบูรณ์
ไซโตพลาสซึม . ใช้สมมติฐานนี้ 100% ของ me-180 เซลล์คนเดียว
จะเสร็จไซโตพลาสซึมหลัง 27 ชั่วโมง ( รูปที่ 1A ) นี้มีความสัมพันธ์กับ 72 ชั่วโมง

me-180 ไทม์ข้อมูลในเซลล์ที่เซลล์แต่ละเซลล์ได้ตามจังหวะเวลารอบเซลล์ ( ข้อมูล
ไม่แสดง ) เซลล์ที่ถูกยึดครองด้วย L .
crispatus จะจัดแสดงการเวลาเฉลี่ย 27.5 ชั่วโมง ความแตกต่างของ
เพียง 30 นาทีจากการควบคุม me-180 เซลล์ ฉัน rhamnosus และ L .
รัฐฟลอริดา การจะเลื่อนเวลาเฉลี่ย 37 ชั่วโมงและชั่วโมง

32.5 ตามลำดับการร่นเวลาการทดลองเริ่มต้นที่บรรจบกันเป็นเซลล์ต่ำ
รูป 1C แสดงภาพตัวแทนจากเริ่มต้น ( 0 H )
จุดกึ่งกลาง ( 8 . ) และสิ้นสุด ( 16 ชั่วโมง ) ของไทม์การทดลอง
แสดงวิธี Lactobacilli ต่างยึดติด และตั้งรกราก
me-180 เซลล์แล้วเซลล์ความคืบหน้าผ่านวัฏจักรเซลล์
ในระหว่างหลักสูตรของการทดสอบ แม้จะมีเอกลักษณ์
โดยความแตกต่างในสายพันธุ์แลคโตบาซิลลัส และความสามารถของ
แบคทีเรียผูกทั้ง me-180 เซลล์และเซลล์จาน
พื้นที่ยังคงมีอยู่ในเซลล์สำหรับเซลล์ที่จะแบ่ง