Milk extraction and estradiol radio

Milk extraction and estradiol radioimmunoassay
Prior to estradiol radioimmunoassay (RIA), milk samples were defatted and
extracted using C-18 Sep-Pak® cartridges (Waters, Ireland). Following
centrifugation (250 g for 10 min) the resultant fat supernatant was removed
and the aqueous samples were re-spun at 250 g for a further 10 min. C-18 Sep-
Pak® cartridges were primed with 2 ml methanol (VWR International, UK)
followed by 4 ml H2O. Defatted milk samples (2 ml) were loaded onto the C-18
Sep-Pak® cartridges followed by 4 ml H2O and 500 μl acetone (VWR
International, UK). C-18 Sep-Pak® cartridges were placed over 12×75mmglass
collection tubes and eluted with 2 ml acetone. Samples were then evaporated to
dryness using a Savant Instrument Speedvac© Concentrator (Holbrook, NY,
USA) and stored at −20 °C until assayed. The efficiency of steroid extraction was
evaluated by adding 3H-estradiol (16,000 dpm) prior to extraction. The mean
recovery ±SD of 3H -estradiol was 67.4±3.2% (n=26 samples). Estrogen
concentrations in the extracts were analyzed in duplicate by a previously
described RIA (Mann et al., 1995). Briefly, the modified estrogen RIAwas based
on the estradiol MAIA Kit (Adaltis Italis S.p.A, Italy) using a rabbit anti-estradiol
antibody [50 μl/tube, diluted 1:3 in assay buffer (0.1 M phosphate-buffer saline
with 0.1% w/v gelatine, 0.2% w/v NaN3 and 0.3% w/v EDTA, pH 9.6)], (125I)-
estradiol tracer (50 μl/tube; diluted 12,000 dpm in assay buffer), goat anti-rabbit
gammaglobulin coupled to magnetic particles (100 μl/tube), estradiol standards
(estradiol-17β; Sigma-Aldrich, UK; range 0.0625–16 pg/tube made up to 250 μl)
and samples reconstituted in 250 μl assay buffer. The assay cross-reacts with
estradiol-17β 100% and ≤2% with all other metabolites tested. The intra- and
inter-assay coefficients of variations were 10.3 and 14.8%, respectively.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

น้ำนมสกัดและ estradiol radioimmunoassayก่อน estradiol radioimmunoassay (เรีย), ตัวอย่างนมที่สกัดไขมันทาง และสกัดโดยใช้ตลับ® C-18 Sep-ปาก (น้ำ ไอร์แลนด์) ต่อไปนี้centrifugation (สำหรับ 10 นาที 250 กรัม) ไขมันผลแก่ supernatant ถูกเอาออกและตัวอย่างอควี spun ใหม่ที่ 250 g สำหรับ 10 นาทีเพิ่มเติม C 18 กันยายน -ตลับ®ปากถูกงเยียกับเมทานอล 2 ml (VWR International, UK)ตาม ด้วย 4 ml H2O ตัวอย่างน้ำนมสกัดไขมันทาง (2 ml) ถูกโหลดลงใน C-18ตาม ด้วย 4 ml H2O และอะซีโตน μl 500 (VWR ตลับ® Sep-ปากนานาชาติ UK) ตลับ® C-18 Sep-ปากถูกวางกว่า 12 × 75mmglassชุดท่อ และ eluted ด้วยอะซีโตน 2 ml ตัวอย่างหายไปไปแล้วความแห้งกร้านโดยใช้การ Speedvac เครื่องมือ Savant © อาทิตย์หัว (Holbrook, NYสหรัฐอเมริกา) และเก็บไว้ที่ −20 ° C จนกว่า assayed มีประสิทธิภาพการแยกสเตอรอยด์ประเมิน โดยเพิ่ม 3H-estradiol (16000 dpm) ก่อนที่จะแยก ค่าเฉลี่ย±SD การกู้คืนของ 3H-estradiol เป็น 67.4±3.2% (n = 26 ตัวอย่าง) ฮอร์โมนหญิงความเข้มข้นในสารสกัดได้วิเคราะห์ในซ้ำโดยที่ก่อนหน้านี้อธิบายเรีย (มานน์และ al., 1995) สั้น ๆ การปรับเปลี่ยนฮอร์โมนหญิง RIAwas ตามบน estradiol Kit ไมอา (Adaltis Italis S.p.A อิตาลี) ใช้เป็น estradiol ป้องกันกระต่ายแอนติบอดี [50 ท่อ/μl, 1:3 ที่แตกออกในวิเคราะห์บัฟเฟอร์ (0.1 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ0.1% w/v gelatine, 0.2% w/v NaN3 และ 0.3% w/v EDTA, pH 9.6)], (125I) -ติดตาม estradiol (หลอดละ 50 μl; dpm แตกออก 12000 ที่วิเคราะห์บัฟเฟอร์) แพะกระต่ายป้องกันgammaglobulin ควบคู่กับอนุภาคแม่เหล็ก (100 μl/หลอด), มาตรฐาน estradiol(estradiol-17β ซิกมา-Aldrich, UK ช่วง 16-0.0625 pg/หลอด ทำ 250 μl)และตัวอย่าง reconstituted ในบัฟเฟอร์การทดสอบ μl 250 Cross-reacts การวิเคราะห์ด้วยestradiol 17β 100% และ ≤2% กับ metabolites อื่น ๆ ทดสอบ อินทรา - และทดสอบระหว่างสัมประสิทธิ์ของรูป 10.3 และ 14.8% ตามลำดับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สกัดนมและ estradiol radioimmunoassay
ก่อนที่จะ estradiol radioimmunoassay (RIA) ตัวอย่างนมโปรตีนและถูก
สกัดโดยใช้ C-18 ก.ย. ปาก? ตลับ (น้ำ, ไอร์แลนด์) ต่อไปนี้
การหมุนเหวี่ยง (250 กรัมเป็นเวลา 10 นาที) สารละลายไขมันผลลัพธ์จะถูกลบออก
และตัวอย่างน้ำกำลังหมุนอีกครั้งที่ 250 กรัมไปอีก 10 นาที C-18 ก.ย.
ตลับปาก? ถูกครอบงำด้วย 2 มิลลิลิตรเมทานอล (VWR ระหว่างประเทศสหราชอาณาจักร)
ตามด้วย 4 มล H2O ตัวอย่างนมพร่องไขมัน (2 ml) ถูกโหลดไปยัง C-18
ตลับ ก.ย. ปาก? ตามด้วย 4 มล H2O และอะซีโตน 500 ไมโครลิตร (VWR
ระหว่างประเทศสหราชอาณาจักร) C-18 ตลับ ก.ย. ปาก? ถูกวางไว้กว่า 12 × 75mmglass
หลอดเก็บและชะมี 2 มลอะซิโตน กลุ่มตัวอย่างเป็นแล้วระเหยจน
แห้งใช้เมธีเครื่องดนตรี Speedvac © Concentrator (ฮอลบรู, นิวยอร์ก,
สหรัฐอเมริกา) และเก็บไว้ที่ -20 ° C จน assayed ประสิทธิภาพในการสกัดเตียรอยด์ได้รับการ
ประเมินโดยการเพิ่ม 3H-estradiol (16,000 DPM) ก่อนที่จะมีการสกัด หมายถึง
การกู้คืน± SD ของ 3H -estradiol เป็น 67.4 ± 3.2% (n = 26 ตัวอย่าง) สโตรเจน
ในความเข้มข้นของสารสกัดที่ได้มาวิเคราะห์ในที่ซ้ำกันโดยก่อนหน้านี้
อธิบาย RIA (แมนน์ et al., 1995) สั้น ๆ , สโตรเจนแก้ไข RIAwas ตาม
ที่ estradiol MAIA Kit (ADALTIS Italis SpA, อิตาลี) โดยใช้กระต่ายต่อต้าน estradiol
แอนติบอดี [50 ไมโครลิตร / หลอดเจือจาง 1: 3 ในบัฟเฟอร์ทดสอบ (0.1 M สารละลายฟอสเฟตบัฟเฟอร์
0.1% น้ำหนัก v / เจลาติน, 0.2% w / v NaN3 และ 0.3% w / v EDTA, ค่า pH 9.6)] (125I) -
ตามรอย estradiol (50 ไมโครลิตร / หลอด; เจือจาง 12,000 DPM ในบัฟเฟอร์ทดสอบ) แพะต่อต้านกระต่าย
gammaglobulin คู่กับ อนุภาคแม่เหล็ก (100 ไมโครลิตร / หลอด) มาตรฐาน estradiol
(estradiol-17β; Sigma-Aldrich, สหราชอาณาจักรช่วง 0.0625-16 PG / หลอดขึ้นถึง 250 ไมโครลิตร)
และตัวอย่างสร้างขึ้นใน 250 ไมโครลิตรบัฟเฟอร์ทดสอบ ทดสอบข้ามทำปฏิกิริยากับ
estradiol-17β 100% และ≤2% และมีสารอื่น ๆ ที่ผ่านการทดสอบ ทั้งในและ
ค่าสัมประสิทธิ์ระหว่างการทดสอบของการเปลี่ยนแปลงเป็น 10.3 และ 14.8% ตามลำดับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

น้ำนมสกัดและยัง radioimmunoassay
ก่อนก่อน radioimmunoassay ( RIA ) , ตัวอย่างนมถูกสกัดและ
- ปาก®เพื่อสกัดโดยใช้ตลับหมึก ( น้ำ , ไอร์แลนด์ ) ต่อไปนี้
3 ( 250 กรัมต่อ 10 นาที ) ซึ่งนำไขมันออกไปและตัวอย่างน้ำถูก
กำลังปั่นอยู่ที่ 250 กรัมต่อ 10 นาที - ก.ย. -
ปาก®ตลับเป็น primed กับเมธานอล 2 ml ( UK บริษัท Imcopa International )
ตามด้วย 4 ml H2O . สกัดตัวอย่างนม ( 2 มล. ) ถูกโหลดลง -
ก.ย. ปาก®ตลับตามด้วย 4 ml H2O และ 500 μ L อะซิโตน ( UK บริษัท Imcopa
ระหว่างประเทศ ) - ก.ย. ปาก®ตลับหมึกถูกวางไว้กว่า 12 × 75mmglass
ชุดหลอดและตัวอย่าง 2 ml สารอะซิโตน ตัวอย่าง

แล้วหายไปเครื่องมือที่ทำให้แห้งโดยใช้เมธีสงวนลิขสิทธิ์หัว ( Holbrook , NY ,
สหรัฐอเมริกา ) และเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 20 ° C ถึง− ml . ประสิทธิภาพของการสกัดสตีรอยด์คือ
ประเมินโดยการเพิ่ม 3 เท่า ( 16 , 000 DPM ) ก่อนการสกัด ค่าเฉลี่ย
การกู้คืน± SD ของ 3 - ก่อนถูกสร้าง± 3.2% ( n = 26 คน ) เอสโตรเจน
ความเข้มข้นสารสกัดวิเคราะห์ซ้ำ โดยก่อนหน้านี้
อธิบายเรีย ( Mann et al . , 1995 ) สั้น ๆ , การใช้ฮอร์โมนเอสโตรเจน riawas
บนออลมาย Kit ( adaltis italis เอส พี เอ อิตาลี ) โดยใช้กระต่าย anti ก่อน
) [ 50 μ L / หลอด , เจือจาง 1 : 3 ในบัฟเฟอร์ ( 0.1 M phosphate buffer ในดินเค็ม
0.1 % W / V วุ้น 0.2 % W / V nan3 และ 0.3 เปอร์เซ็นต์โดยน้ำหนัก / V EDTA pH 9.6 ) ] ( 125I ) -
ออล Tracer ( 50 μ L / ท่อ ; เจือจาง 12000 DPM ใน ( บัฟเฟอร์ )ป้องกันกระต่ายแพะ
แกมมาโกลบูลินคู่กับอนุภาคแม่เหล็ก ( 100 μ L / หลอด )
มาตรฐานก่อน ( estradiol-17 บีตา ; ซิกม่า Aldrich , อังกฤษ ช่วงที่ผล– 16 พิโคกรัม / หลอดได้ถึง 250 μ L )
และตัวอย่างสร้าง 250 μ L ในบัฟเฟอร์ ( ข้ามาปฏิกิริยากับ
estradiol-17 บีตา 100% และ≤ 2% ด้วยทั้งหมดอื่น ๆสารทดสอบ อินทรา -
อินเตอร์ ( ค่าสัมประสิทธิ์ของรูปแบบคือ 10.3 และ 14.8 %
)