The sorting protocol of microalgae

The sorting protocol of microalgae cells was based upon the differential and relative distribution of red fluorescence (representing CAF of microalgae) against forward-light scatter (FSC), representing cell size and green fluorescence vs. red fluorescence simultaneously. When a cell population exhibited weak CAF, the GAF was utilized for supplementary confirmation. With excitation at 488 nm using an argon laser, the CAF of microalgae was measured through a 635 ` 20 nm long- pass filter and GAF via a 530 ` 30 nm band-pass filter. Two- dimensional profiles of FSC against red fluorescence and green fluorescence vs. red fluorescence were electronically plotted, where the sorting windows were positioned at optimal areas within the distribution of an algal cell cluster. Using a twodimensional cytogram of GAF against CAF for the selection and isolation of microalgae represents an efficient sorting technique. For example, as can be seen in Fig. 2a and b, the microalgae group labelled ‘R4’ had a weak CAF, but a high GAF. To establish axenic cultures during the sorting process, cells were selected on the basis of the highest relative fluorescence according to the procedure described by Sensen et al. [7]. Fig. 2a and b shows typical examples of flow cytometric dot plots for an enriched microalgae culture, where regions displayed in rectangle show the sort gates associated with each algal cluster. Individual sorted single cells were placed into separate culture wells of a 48-well incubation plate (Iwaki, 3830-048), where each well contained 0.5 mL of f/2 and Walne medium.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

โพรโทคอลเรียงของ microalgae เซลล์ถูกตามแดง fluorescence (แทนคาฟของ microalgae) กับกระจายแสงไปข้างหน้า (FSC), แทนขนาดเซลล์และ fluorescence สีเขียวกับสีแดง fluorescence พร้อมกระจายแตกต่าง และสัมพันธ์กัน เมื่อประชากรเซลล์จัดแสดงคาฟอ่อนแอ GAF จะถูกใช้สำหรับยืนยันการส่งเสริมการขาย มีในการกระตุ้นที่ 488 nm ใช้ เป็นอาร์กอนเลเซอร์ คาฟของ microalgae ถูกจัดวัด 635 ' 20 nm ยาวผ่านตัวกรองและ GAF ผ่านตัวรอบวง 530 ' 30 nm มีสองมิติโพรไฟล์ของ FSC fluorescence สีแดงและ fluorescence สีเขียวกับสีแดง fluorescence อิเล็กทรอนิกส์ พล็อตที่หน้าต่างเรียงลำดับถูกวางในพื้นที่เหมาะสมที่สุดในการกระจายของคลัสเตอร์เซลล์ algal ใช้ cytogram twodimensional ของ GAF กับคาฟสำหรับการเลือกและแยกของ microalgae แสดงเทคนิคการเรียงลำดับที่มีประสิทธิภาพ ตัวอย่าง สามารถดูได้ใน Fig. 2a และ b กลุ่ม microalgae มัน 'R4' ได้เป็นคาฟอ่อนแอ แต่ GAF สูง สร้างวัฒนธรรม axenic ระหว่างการเรียงลำดับ มีเลือกเซลล์โดยใช้ fluorescence สัมพัทธ์สูงสุดตามขั้นตอนที่อธิบายไว้โดย Sensen et al. [7] Fig. 2a และ b แสดงตัวอย่างทั่วไปของที่ดินจุด cytometric ขั้นตอนสำหรับการอุดม microalgae วัฒนธรรม ที่ซึ่งขอบเขตที่แสดงในกรอบสี่เหลี่ยมแสดงการเรียงลำดับประตูที่เชื่อมโยงกับแต่ละคลัสเตอร์ algal เซลล์เดียวเรียงลำดับแต่ละถูกวางลงในบ่อวัฒนธรรมแยกจานดี 48 คณะทันตแพทยศาสตร์ (อิวากิ 3830-048), ที่ mL ละ 0.5 ดีมี f/2 และกลาง Walne

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

โปรโตคอลการเรียงลำดับของเซลล์สาหร่ายขึ้นอยู่กับความแตกต่างและญาติการกระจายตัวของการเรืองแสงสีแดง (เป็นตัวแทนของสาหร่าย CAF) กับการแพร่กระจายคลื่นแสง (FSC) คิดเป็นขนาดของเซลล์และการเรืองแสงสีเขียวกับการเรืองแสงสีแดงพร้อมกัน เมื่อประชากรเซลล์แสดง CAF อ่อนแอ GAF ถูกนำมาใช้สำหรับการยืนยันเสริม ด้วยการกระตุ้นที่ 488 นาโนเมตรโดยใช้เลเซอร์อาร์กอน CAF ของสาหร่ายวัดผ่าน 635 `20 นาโนเมตรกรองผ่านระยะยาวและ GAF ผ่าน 530` 30 นาโนเมตรวงผ่านการกรอง สองรูปแบบมิติของ FSC กับการเรืองแสงสีแดงและสีเขียวเรืองแสงเรืองแสงสีแดงกับพล็อตได้รับการทางอิเล็กทรอนิกส์ที่หน้าต่างเรียงลำดับอยู่ในตำแหน่งที่ดีที่สุดภายในพื้นที่การกระจายของคลัสเตอร์เซลล์สาหร่าย ใช้ cytogram twodimensional ของ GAF กับ CAF สำหรับการเลือกและการแยกของสาหร่ายแสดงให้เห็นถึงเทคนิคการเรียงลำดับที่มีประสิทธิภาพ ยกตัวอย่างเช่นที่สามารถมองเห็นในรูป 2a และ b กลุ่มสาหร่ายข้อความ 'R4' มีอ่อนแอ CAF แต่ GAF สูง เพื่อสร้างวัฒนธรรมที่ปลอดเชื้อในระหว่างขั้นตอนการคัดแยกเซลล์ที่ถูกเลือกบนพื้นฐานของการเรืองแสงสูงสุดญาติให้เป็นไปตามขั้นตอนที่อธิบายโดย Sensen และคณะ [7] มะเดื่อ 2a และ B แสดงให้เห็นตัวอย่างทั่วไปของการไหลของ cytometric แปลงจุดสำหรับการเพาะเลี้ยงสาหร่ายที่อุดมไปที่ภูมิภาคปรากฏในรูปสี่เหลี่ยมผืนผ้าแสดงประตูการจัดเรียงที่เกี่ยวข้องกับคลัสเตอร์สาหร่ายแต่ละ บุคคลเรียงลำดับเซลล์เดียวที่ถูกวางลงในหลุมวัฒนธรรมที่แยกต่างหากจากแผ่นบ่ม 48 ดี (Iwaki, 3830-048) ซึ่งแต่ละที่มีดี 0.5 มิลลิลิตร f / 2 และขนาดกลาง Walne

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การเรียงลำดับพิธีการเลี้ยงสาหร่ายเซลล์ตามความแตกต่างและการกระจายสัมพัทธ์ของการเรืองแสงสีแดง ( แทนคาเฟ่ของสาหร่ายขนาดเล็ก ) กับกระจายไปข้างหน้าแสง ( FSC ) ของขนาดเซลล์และการเรืองแสงฟลูออเรสเซนซ์สีเขียวกับแดงพร้อมกัน เมื่อเซลล์ประชากรมีคาเฟ่ที่อ่อนแอ , gaf ใช้สำหรับการยืนยันเพิ่มเติมกับความตื่นเต้นที่ nm แล้วใช้อาร์กอนเลเซอร์ คาเฟ่ของสาหร่ายขนาดเล็กวัดผ่าน 635 ` 20 nm นาน - ผ่านเครื่องกรองและกัฟผ่าน 530 ` 30 nm band-pass กรอง สองมิติ - โปรไฟล์ของ FSC กับเรืองแสงเรืองแสงเรืองแสงสีแดงและเขียวกับแดงก่อการทางอิเล็กทรอนิกส์ ,ที่แยกหน้าต่างวางในพื้นที่ที่เหมาะสมในการกระจายของกลุ่มเซลล์ของสาหร่าย . ใช้ cytogram twodimensional ของกัฟกับคาเฟ่สำหรับการแยกของสาหร่ายขนาดเล็กแสดงประสิทธิภาพการใช้เทคนิค ตัวอย่างเช่น , ที่สามารถเห็นได้ในรูปที่ 2A และ B กลุ่มสาหร่ายขนาดเล็กที่มี ' r4 ' มีคาเฟ่ อ่อนแอ แต่สูงกัฟ .เพื่อสร้างวัฒนธรรม axenic ในระหว่างกระบวนการคัดแยกเซลล์ถูกเลือกบนพื้นฐานของการสัมพัทธ์สูงสุดตามขั้นตอนที่อธิบายโดย sensen et al . [ 7 ] รูปที่ 2A และ B แสดงให้เห็นตัวอย่างของลักษณะการไหลผ่านจุดแปลงเป็นสาหร่ายอุดมด้วยวัฒนธรรมที่ปรากฏในพื้นที่สี่เหลี่ยมผืนผ้าแสดงการจัดเรียงประตูที่เกี่ยวข้องกับแต่ละของสาหร่ายกลุ่มแต่ละคนเรียงเซลล์เดียวถูกวางลงในบ่อแยก วัฒนธรรมของ 48 ดี 1 จาน ( อิวากิ 3830-048 ) ซึ่งแต่ละดีอยู่ 0.5 ml ของ F / 2 และ walne
)