2.2. Fluorescence in situ hybridisa

2.2. Fluorescence in situ hybridisation (FISH)
Entire soil blocks of lichen material were fixed immediately
after sampling in 4% paraformaldehyde (PFA) for 8 h. Material was
washed three times with 1×
PBS in order to remove paraformaldehyde.
The fixed material was stored in 1×
PBS and 96% EtOH (1:1)
at
−20 ◦C prior to subsequential procession. Small fragments of the
soil block of about 1 cm2 (lichen thallus together with the underneath
soil) were embedded in water or in the O.C.T. Tissue Tek
embedding solution (Sakura, Finetech Europe BV, Zoeterwoude,
Netherlands) and cut with a cryotome (Leica CM 3000, Heidelberg,
Germany) into 30 m thick sections. The frozen sections were
transferred with a sterilized and cooled needle in 1×
PBS/96% EtOH
(1:1) solution. Up to 8 tubes were prepared for each lichen sample
and stored at
−20 ◦C. The amount of stored section is sufficient
to perform up to 10 replicates, corresponding to 10 hybridization
experiments with different sets of FISH probes.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2. fluorescence ในซิ hybridisation (ปลา)บล็อกดินทั้งฝอยวัสดุไม่ถาวรทันทีหลังจากสุ่มตัวอย่างใน 4% paraformaldehyde (รับ) สำหรับ h. 8 วัสดุได้ล้าง 3 ครั้ง ด้วย 1 ×PBS เพื่อเอา paraformaldehydeวัสดุถาวรถูกเก็บไว้ในตารางที่ 1PBS และ 96% EtOH (1:1)ที่−20 ◦C ก่อนขบวน subsequential ชิ้นส่วนเล็ก ๆ ของการบล็อกดินประมาณ 1 cm2 (ฝอย thallus กับด้านล่างดิน) ถูกฝังอยู่ ในน้ำ หรือ ใน Tek เนื้อเยื่อ O.C.T.ฝังโซลูชัน (ซากุระ BV ยุโรปพระ Zoeterwoudeเนเธอร์แลนด์) และตัดกับ cryotome (ไลซม. 3000 ไฮเดลเบิร์กประเทศเยอรมนี) เป็นส่วนที่หนา 30 เมตร ส่วนการแช่แข็งได้โอนย้าย ด้วยเข็ม sterilized และเย็น ๆ ในตาราง 1PBS/96% EtOH(1:1) การแก้ปัญหา ถึง 8 หลอดเตรียมไว้สำหรับแต่ละตัวอย่างไลเคนและเก็บไว้ที่−20 ◦C ยอดเงินส่วนที่เก็บเพียงพอทำ 10 เหมือนกับ สอดคล้องกับ 10 hybridizationการทดลองกับชุดปลา probes

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2 เรืองแสงใน hybridisation แหล่งกำเนิด (ปลา)
บล็อกดินทั้งหมดของวัสดุไลเคนได้รับการแก้ไขในทันทีหลังจากการสุ่มตัวอย่างใน 4% paraformaldehyde (PFA) เป็นเวลา 8 ชั่วโมง
วัสดุที่ถูกล้างสามครั้ง 1 ×พีบีเอสเพื่อที่จะเอาparaformaldehyde. วัสดุที่คงถูกเก็บไว้ใน 1 ×พีบีเอสและเอทานอล96% (1: 1) ที่-20 ◦Cก่อนที่จะ subsequential ขบวน ชิ้นส่วนเล็ก ๆ ของบล็อกดินประมาณ1 cm2 (ตะไคร่ thallus ร่วมกับใต้ของดิน) ที่ถูกฝังอยู่ในน้ำหรือในเนื้อเยื่อตุลาคมเต็กวิธีการแก้ปัญหาการฝัง(ซากุระ Finetech Europe BV, Zoeterwoude, เนเธอร์แลนด์) และตัดกับ cryotome (Leica CM 3000, ไฮเดลเบิร์ก, เยอรมนี) ลงวันที่ 30? m ส่วนหนา ส่วนแช่แข็งได้รับการโอนที่มีการฆ่าเชื้อและการระบายความร้อนด้วยเข็มใน 1 ×พีบีเอส/ 96% EtOH (1: 1) การแก้ปัญหา ถึง 8 หลอดถูกเตรียมไว้สำหรับแต่ละตัวอย่างไลเคนและเก็บไว้ที่-20 ◦C ปริมาณของส่วนที่เก็บไว้ก็เพียงพอที่จะดำเนินการได้ถึง 10 ซ้ำสอดคล้องกับ 10 พันธุ์การทดลองกับชุดที่แตกต่างกันของยานสำรวจปลา

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2 . เรืองแสงใน situ ไฮบริไดเซชัน ( ปลา )
ทั้งดินบล็อกของวัสดุครับ ได้รับการแก้ไขทันที
หลังจากตัวอย่าง 4% พาราฟอร์มาลดิไฮด์ ( พีเอฟเอ ) 8 . วัสดุ
ซักสามครั้งกับ 1 ×
PBS เพื่อที่จะเอาพาราฟอร์มาลดิไฮด์ .
ซ่อมวัสดุที่เก็บไว้ใน 1 ×
PBS และ 96 % แอลกอฮอล์ ( 1 : 1 )

ที่− 20 ◦ C ก่อน subsequential ขบวน . ชิ้นส่วนขนาดเล็กของ
บล็อกดินประมาณ 1 ตร. ซม. ( ไลเคนแทลลัสพร้อมกับใต้
ดิน ) ถูกฝังอยู่ในน้ำหรือในเนื้อเยื่อ o.c.t. เต็ก
การฝังตัวโซลูชั่น ( ซากุระ finetech ยุโรป BV , zoeterwoude
, เนเธอร์แลนด์ ) และตัดกับ cryotome ( Leica CM 3000 , Heidelberg ,
Germany ) เป็น 30  ม. หนาส่วน บางส่วนถูกแช่แข็ง
โอนกับฆ่าเชื้อและเย็นเข็มใน 1 ×
PBS / 96 % แอลกอฮอล์
( 1 : 1 ) โซลูชั่นถึง 8 หลอดที่ถูกเตรียมไว้สำหรับแต่ละตัวอย่าง

ครับ เก็บไว้ที่อุณหภูมิ− 20 ◦ C . จํานวนเก็บไว้ส่วนเพียงพอ
แสดงถึง 10 นาทีที่ 10 องศา
ทดลองด้วยชุดต่าง ๆและปลา