Evaluation of WT and mutant enzymes

Evaluation of WT and mutant enzymes

Assays were performed in this section with purified enzyme at a
fixed starting level of 40 U/mL. Therefore, similar protein amounts
of the WT and mutant enzymes were used. The stability of the
mutant was further investigated by measuring the half-life and
transition temperature (Tm). The half-life values for WT and BapulTS were 34.9 min and 387.3 min, respectively (increased 11-fold).
TheTmof Bapul-TS (74.5
◦
C) increased by 9.5
◦
C compared with that
of WT (65
◦
C) (Fig. 4A and B, respectively). These results indicated
that Bapul-TS had concomitant stabilizing effects on both kinetic
and thermodynamic stabilities. The optimum temperature and pH
were also investigated to determine whether the Bapul-TS activity was retained at 60
◦C and pH 5.0. Bapul-TS exhibited optimum
activity at 65
◦
C, which was 5
◦
C higher than the temperature at
which the WT exhibited optimum activity (60◦
C) (Fig. 4D). The
optimum pH of Bapul-TS was 5.0, and the profile of Bapul-TS was
nearly identical to that of WT (Fig. 4C). The specific activity of BapulTS remained relatively constant compared with that of the WT.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ประเมินของ WT และเอนไซม์กลายพันธุ์Assays ได้ดำเนินการในส่วนนี้ด้วยเอนไซม์บริสุทธิ์ที่เป็นคงเริ่มต้นระดับของ 40 U/mL ดังนั้น จำนวนโปรตีนที่คล้ายคลึงกันละเว้นการกลายพันธุ์ของเอนไซม์ถูกใช้ ความมั่นคงของการmutant ถูกตรวจสอบ โดยวัด half-life เพิ่มเติม และเปลี่ยนแปลงอุณหภูมิ (Tm) ค่า half-life WT และ BapulTS คำนาที 34.9 387.3 นาที ตามลำดับ (เพิ่ม 11-fold)TheTmof Bapul-TS (74.5◦ค) เพิ่มขึ้น 9.5◦เมื่อเทียบกับ Cของ WT (65◦ค) (Fig. 4A และ B ตามลำดับ) ผลลัพธ์เหล่านี้ระบุว่า Bapul TS มี stabilizing มั่นใจผลทั้งสองอย่างเดิม ๆและขอบหงิม ๆ อุณหภูมิที่เหมาะสมและ pHนอกจากนี้ยังถูกสอบสวนเพื่อตรวจสอบว่า กิจกรรม Bapul TS ถูกเก็บไว้ที่ 60◦C และ pH 5.0 เหมาะสมจัดแสดง TS Bapulกิจกรรมที่ 65◦C ซึ่งมี 5◦C สูงกว่าอุณหภูมิที่การละเว้นการจัดแสดงกิจกรรมที่เหมาะสม (60◦C) (Fig. โตโยต้า) ที่Bapul TS pH ที่เหมาะสมคือ 5.0 และมีโปรไฟล์ของ Bapul-TSเกือบเหมือนกับของ WT (Fig. 4C) กิจกรรมของ BapulTS ยังคงค่อนข้างคงเมื่อเทียบกับของ WT

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การประเมินผลการ WT และเอนไซม์กลายพันธุ์ตรวจได้ดำเนินการในส่วนที่มีเอนไซม์นี้ที่ระดับเริ่มต้นคงที่ของ40 U / มิลลิลิตร ดังนั้นปริมาณโปรตีนที่คล้ายกันของ WT และเอนไซม์กลายพันธุ์ถูกนำมาใช้ ความมั่นคงของมนุษย์กลายพันธุ์ได้รับการตรวจสอบต่อไปโดยการวัดครึ่งชีวิตและการเปลี่ยนแปลงอุณหภูมิ(TM) ค่าครึ่งชีวิตสำหรับ WT และ BapulTS เป็น 34.9 นาทีและ 387.3 นาทีตามลำดับ (เพิ่มขึ้น 11 เท่า). TheTmof Bapul-TS (74.5 ◦ C) เพิ่มขึ้น 9.5 ◦ C เมื่อเทียบกับของWT (65 ◦ C) (รูปที่ . 4A และ B ตามลำดับ) ผลการศึกษานี้ชี้ให้เห็นว่า Bapul-TS มีผลการรักษาเสถียรภาพด้วยกันทั้งการเคลื่อนไหวเสถียรภาพและความร้อน อุณหภูมิที่เหมาะสมและพีเอชยังถูกตรวจสอบเพื่อตรวจสอบว่ากิจกรรม Bapul-TS ถูกเก็บรักษาไว้ที่ 60 ◦Cและพีเอช 5.0 Bapul-TS แสดงที่ดีที่สุดกิจกรรมที่65 ◦ C ซึ่งเป็น 5 ◦ C สูงกว่าอุณหภูมิที่ซึ่งWT แสดงกิจกรรมที่เหมาะสม (60◦ C) (รูป. 4D) ค่า pH ที่เหมาะสมของ Bapul-TS เป็น 5.0 และรายละเอียดของ Bapul-TS ก็เกือบจะเหมือนกับของWT (รูป. 4C) กิจกรรมที่เฉพาะเจาะจงของ BapulTS คงที่เมื่อเทียบกับที่ของ WT

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การประเมินปริมาณเอนไซม์กลายพันธุ์และ

) มีการปฏิบัติในส่วนนี้กับเอนไซม์ที่
คงที่ระดับเริ่มต้น 40 U / ml จึงคล้ายโปรตีนปริมาณ
ของ WT และกลายพันธุ์แบบ เสถียรภาพของ
กลายพันธุ์คือการศึกษาเพิ่มเติมโดยการวัดและการเปลี่ยนอุณหภูมิ -
( TM ) ค่าครึ่งชีวิต WT และ bapults เป็น 75 นาทีและ 387.3 มินตามลำดับ ( เพิ่มขึ้น 11 เท่า )
thetmof bapul TS ( 74.5 ◦

C ) เพิ่มขึ้น 9.5 ◦

C เทียบกับ WT ( 65

ของ◦
c ) ( รูปที่ 4 และ B ตามลำดับ ) และพบว่ามีผู้ป่วย bapul
TS เสถียรภาพต่อจลนพลศาสตร์และความคงตัวทางทั้ง
. สูงสุดที่อุณหภูมิและ pH
ยังตรวจสอบเพื่อตรวจสอบว่า bapul TS กิจกรรมสะสมที่ 60
◦ C และ pH 5.0 . bapul TS มีกิจกรรมสูงสุดที่ 65

◦
C

C ที่ 5 ◦สูงกว่าอุณหภูมิที่ซึ่งมีกิจกรรมที่เหมาะสม
WT ( 60 ◦
c ) ( รูป 4D )
pH ที่เหมาะสมของ bapul TS คือ 5.0 และโปรไฟล์ของ bapul TS คือ
เกือบเหมือนกับที่ WT ( ภาพที่ 4C ) กิจกรรมเฉพาะของ bapults ยังคงอยู่ค่อนข้างคงที่เมื่อเทียบกับน้ำหนักของ