the plates were blocked with
100 mL per well of PBS containing 10 g L1 bovine serum albumin
(BSA) and 1 g L1 Tween 20 (PBS-BSA-T) at 37 C for 1 h andwashed
four times. One hundred microlitres of these mixtures (sample and
pool of sera) were added to the wells previously coated with four
kinds of milk protein antigens and blocked. Plateswere incubated at
37 C for 1 h and washed. To the wells was added 100 mL of second
antibody (Anti-human IgE, Epsilon chain specific, peroxidase conjugate
developed in goat, Sigma A 9667, 1:500) in PBS-BSA-T. After
incubation at 37 C for 1 h, micro plateswerewashed and then 100 mL
per well was added of 3, 30, 5, 50-tetramethylenbenzidine (TMB,
Amresco, OH, USA) substrate solutions, and the plates were incubatedat
37 C for 15 min. Finally, 50 mL 2 molL1H2SO4were added to
wells to stop the reaction. Uninhibited sera sample (no milk) was
used as a control for the maximal absorbance of each antigen.
แผ่นที่ถูกบล็อกด้วย
100 มิลลิลิตรต่อดีพีบีเอสที่มี 10 กรัม L? อัลบูมิ 1 วัวซีรั่ม
(BSA) และ 1 กรัม L? 1 Tween 20 (PBS-BSA-T) ที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมง andwashed
สี่ครั้ง หนึ่งร้อย microlitres ผสมเหล่านี้ (ตัวอย่างและ
สระว่ายน้ำของซีรั่ม) ถูกเพิ่มเข้าไปในหลุมเคลือบก่อนหน้านี้ที่มีสี่
ชนิดของแอนติเจนโปรตีนนมและบล็อก Plateswere บ่มที่อุณหภูมิ
37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมงและล้าง เวลส์ถูกเพิ่ม 100 มลสอง
แอนติบอดี (Anti-Human IgE โซ่ Epsilon เฉพาะผัน peroxidase
พัฒนาในแพะซิก 9667, 1: 500) ในพีบีเอส-BSA-T หลังจาก
บ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมงไมโคร plateswerewashed แล้ว 100 มล
ต่อกันถูกเพิ่มเข้ามา 3, 30, 5, 50 tetramethylenbenzidine (TMB,
AMRESCO, OH, USA) การแก้ปัญหาสารตั้งต้นและแผ่นมี incubatedat
37 องศาเซลเซียส นาน 15 นาที สุดท้าย 50 มล 2 Moll? 1H2SO4were เพิ่มลงใน
หลุมที่จะหยุดการเกิดปฏิกิริยา ตัวอย่างซีรั่มยับยั้งชั่งใจ (ไม่มีนม) ถูก
ใช้เป็นตัวควบคุมสำหรับการดูดกลืนแสงสูงสุดของแต่ละแอนติเจน
การแปล กรุณารอสักครู่..

จานที่ถูกบล็อกด้วย100 มิลลิลิตรต่อของ PBS บรรจุ 10 g l1 อัลบูมิน( BSA ) และ 1 g l1 Tween 20 ( pbs-bsa-t ) ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 1 ชั่วโมง andwashedสี่ครั้ง หนึ่งร้อย microlitres ของส่วนผสมเหล่านี้ ( ตัวอย่างสระว่ายน้ำของเซร่า ) ที่ถูกเคลือบด้วยสี่หลุม ก่อนหน้านี้ชนิดของโปรตีนในนม และในบล็อก plateswere บ่มที่37 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 1 ชั่วโมง และล้าง ไปบ่อเพิ่ม 100 มิลลิลิตรของที่สองแอนติบอดี IgE ( ต่อต้านมนุษย์เอปไซลอนโซ่ , เฉพาะ , peroxidase คือการพัฒนาในแพะ ซิกม่า เป็น 9667 1 : 500 ) ใน pbs-bsa-t. หลัง ,บ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมง plateswerewashed ไมโครและ 100 มล.ต่อด้วย ได้เพิ่มเป็น 3 , 30 , 5 , 50 tetramethylenbenzidine ( ธนาคารamresco , โอ้ , สหรัฐอเมริกา ) พบ โซลูชั่น และ incubatedat แผ่นคือ37 องศาเซลเซียส นาน 15 นาที และ 50 ml 2 moll1h2so4were เพิ่มบ่อ เพื่อหยุดปฏิกิริยา ซึ่งไม่สามารถยับยั้งเซราตัวอย่าง ( ไม่ใส่นม )ใช้เป็นตัวควบคุมสำหรับการดูดกลืนแสงสูงสุดของแต่ละแอนติเจน
การแปล กรุณารอสักครู่..
