Progress in sequencing of rice and

Progress in sequencing of rice and Arabidopsis genomes and expansion of many sequence databanks for numerous other species rapidly stimulates the use of reverse genetic approach for discovery of gene function, and in more general terms, for functional genomics. As sensitive mutation detection methods in DNA have been also established, the screening for DNA damages of particular gene sequence in pooled samples of various size from large mutated populations has become feasible. The first application of this strategy in plants has been called ‘TILLING’ targets induced local lesions in genomes (McCallum et al., 2000a). This is a new reverse genetic approach that combines high frequency of point mutations induced by classical mutation techniques with possibilities of detecting heteroduplexes between wild-type and mutant-DNA fragments using DHPLC (denaturing high performance liquid chromatography). High density of point mutationsis a necessary conditionfor the use of this approach.Ionizingradiation and highly efficientchemicalmutagensareusuallyappliedforthe developmentofmutatedgenerations.Thismethodwas first demonstratedin Arabidopsisbut was easily adopted for other plant species (McCallum et al., 2000b). Contrary to other knockouttechniques, this procedure is not limited by the efficiency of transformation or activityoftransposons.TILLINGcanbeappliedwhen the sequence of the targeted gene is known and the methodologyfor detectionof single nucleotidesubstitutions is available. Besides DHPLC, other possibilities for heteroduplex analysis have been reported such as denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE – Hauser et al., 1998; Temesgen et al., 2001), temperature gradient gel electrophoresis (TGGE – Matousek et al., 2000), or cleavage by the specific endonuclease (Oleykowski et al., 1998). Based on the analysis of the frequency of appearance of AFLP bands the frequencies of 1 mutation per 50,000 bp to 1 per 450,000 bp (5,500–50,000mutations per mutant genome) were found in barley after mutagenic treatment with various mutagens (Caldwell et al., 2003). These investigationmethodsare still beingimprovedand the entire strategyhas beencalled ‘mutationgridfor plant functional genomics’.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ความคืบหน้าในการจัดลำดับของจีโนมข้าวและ Arabidopsis และการขยายตัวของ databanks ลำดับหลายสายพันธุ์อื่น ๆ อีกมากมายอย่างรวดเร็วจะช่วยกระตุ้นการใช้วิธีการทางพันธุกรรมย้อนกลับสำหรับการค้นพบการทำงานของยีนและในแง่ทั่วไปมากขึ้นสำหรับฟังก์ชั่นการทำงาน ในฐานะที่เป็นวิธีการตรวจหาการกลายพันธุ์ที่มีความสำคัญในดีเอ็นเอยังได้รับการจัดตั้งขึ้นการตรวจคัดกรองความเสียหายดีเอ็นเอของยีนโดยเฉพาะอย่างยิ่งในตัวอย่าง pooled ขนาดต่างๆจากประชากรกลายพันธุ์ที่มีขนาดใหญ่ได้กลายเป็นไปได้ การประยุกต์ใช้สายแรกของกลยุทธ์ในโรงงานนี้ได้รับการเรียกว่าเป้าหมาย 'กระทั่ง' เหนี่ยวนำให้เกิดแผลท้องถิ่นในจีโนม (แม็กคอล et al., 2000a) นี้เป็นวิธีการทางพันธุกรรมใหม่กลับที่รวมความถี่สูงของการกลายพันธุ์ที่เกิดจากจุดเทคนิคการกลายพันธุ์คลาสสิกกับความเป็นไปได้ของการตรวจสอบ heteroduplexes ระหว่างป่าชนิดและเศษกลายพันธุ์ดีเอ็นเอโดยใช้ DHPLC (denaturing ประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography) ความหนาแน่นสูงของจุด mutationsis จำเป็น conditionfor ใช้ approach.Ionizingradiation นี้และสูง EF ไฟ cientchemicalmutagensareusuallyappliedforthe developmentofmutatedgenerations.Thismethodwas สายแรก demonstratedin Arabidopsisbut ถูกนำมาใช้อย่างง่ายดายสำหรับพืชชนิดอื่น ๆ (แม็กคอล et al., 2000b) ขัดกับ knockouttechniques อื่น ๆ ขั้นตอนนี้ไม่ได้ จำกัด อยู่โดยขาดเพียงสาย EF ของการเปลี่ยนแปลงหรือ activityoftransposons.TILLINGcanbeappliedwhen ลำดับของยีนเป้าหมายเป็นที่รู้จักและ methodologyfor detectionof nucleotidesubstitutions เดียวที่มีอยู่ นอกจาก DHPLC เป็นไปได้อื่น ๆ สำหรับการวิเคราะห์ heteroduplex ได้รับรายงานเช่น denaturing ข่าวคราวการไล่ระดับสี (DGGE - Hauser, et al, 1998;.. Temesgen, et al, 2001) (. TGGE - Matousek, et al, 2000), อุณหภูมิลาดอิเลคเจล หรือความแตกแยกโดยระบุไว้ค endonuclease (Oleykowski et al., 1998) ขึ้นอยู่กับการวิเคราะห์ความถี่ของการปรากฏตัวของวงดนตรีที่ AFLP ความถี่ของการกลายพันธุ์ 1 ต่อ 50,000 bp เป็น 1 ต่อ 450,000 bp (5,500-50,000mutations ต่อจีโนมมนุษย์กลายพันธุ์) ที่พบในข้าวบาร์เลย์หลังการรักษาต่อการกลายพันธุ์ที่มีสารก่อกลายพันธุ์ต่างๆ (Caldwell et al., 2003) investigationmethodsare เหล่านี้ยังคง beingimprovedand strategyhas ทั้ง beencalled 'mutationgridfor ฟังก์ชั่นการทำงานที่โรงงาน'

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ความคืบหน้าในการจัดลำดับของข้าวและ Arabidopsis จีโนมและการขยายตัวของ databanks ลำดับหลายสปีชีส์อื่นมากมายอย่างรวดเร็ว กระตุ้นใช้วิธีการทางพันธุกรรมสำหรับการค้นพบย้อนกลับการทำงานของยีน และในแง่ทั่วไปมากกว่า ในการทํางาน ความไวของวิธีการในการตรวจหาดีเอ็นเอได้ถูกก่อตั้งขึ้นด้วยการทดสอบดีเอ็นเอของยีนในด้านความเสียหายโดยลำดับตัวอย่างขนาดต่างๆ ที่มีประชากรกลายพันธุ์ได้กลายเป็นไปได้ จึงใช้กลยุทธ์นี้ในพืชทีได้รับการเรียกว่า ' เตรียม ' เป้าหมายให้เกิดรอยโรคท้องถิ่นในจีโนม ( McCallum et al . , ประกอบ )นี้เป็นวิธีการใหม่ กลับทางพันธุกรรมที่รวมความถี่สูงของการกลายพันธุ์ที่เกิดจากจุดเทคนิคการกลายพันธุ์คลาสสิกกับความเป็นไปได้ของการ heteroduplexes ระหว่างผลิตชิ้นส่วนดีเอ็นเอและ dhplc ( ี่กลายพันธุ์โดยใช้วิธีโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง ) ความหนาแน่นสูงของจุด mutationsis จำเป็นสำหรับการใช้วิธีการนี้ionizingradiation สูงจึง cientchemicalmutagensareusuallyappliedforthe EF developmentofmutatedgenerations . thismethodwas จึงตัดสินใจเดินทาง demonstratedin arabidopsisbut สามารถใช้สำหรับพืชชนิดอื่น ( McCallum et al . , 2000b ) ต่อ knockouttechniques อื่น ๆ ขั้นตอนนี้จะไม่ จำกัด ด้วยประสิทธิภาพของการเปลี่ยนแปลงหรือ EF จึง activityoftransposons .tillingcanbeappliedwhen ลำดับของยีนเป้าหมายที่เป็นที่รู้จักและ methodologyfor ผู้เดียว nucleotidesubstitutions พร้อม นอกจากนี้ dhplc ความเป็นไปได้อื่น ๆสำหรับการวิเคราะห์ heteroduplex ได้รับรายงานเช่นี่ลาด gel electrophoresis ( การทดลอง ) เฮาเซอร์ et al . , 1998 ; temesgen et al . , 2001 ) อุณหภูมิลาด gel electrophoresis ( tgge –การ et al . ,2000 ) หรือความแตกแยกโดยกาจึง C เอนโดนิวคลีเอส ( oleykowski et al . , 1998 ) โดยการวิเคราะห์ความถี่ของลักษณะของแถบความถี่ของเอเอฟ 1 ต่อ 50 , 000 BP 1 ต่อ 450 , 000 BP ( 5 , 500 ) 50000mutations ต่อมนุษย์กลายพันธุ์จีโนม ) พบในข้าวบาร์เลย์ หลังจากรักษาด้วยวิธีต่าง ๆ ( Caldwell et al . , 2003 )เหล่านี้ investigationmethodsare ยัง beingimprovedand ทั้ง strategyhas beencalled ' พืช mutationgridfor ทํางานไร '