promoter was set to the 1.9 kb regi

promoter was set to the 1.9 kb region upstream of the
SPL10 coding sequence [up to the closest gene ( At1g27380 )],
and the length of the SPL11 promoter was determined with
reference to the SPL10 promoter. Consistent with the results
of the RT–PCR analysis, GUS activity was detected in various
tissues including roots, rosette leaves, cauline leaves, fl owers
and fruits in both transgenic plants ( Fig. 1B–E ). High
promoter activities were detected in roots and juvenile
rosette leaves, while mRNA accumulation in these organs
was low. This suggests that SPL10 and SPL11 are regulated
post-transcriptionally, although this may due to the
shortage of the regulatory sequence for SPL10 and SPL11
expression.
Function of SPL10 is controlled by microRNA
We examined the transcriptional activation activity of
SPL10 by a transient expression assay. SPL10 has a target
site for miR156/157 ; therefore, we produced an miR156/157 -
resistant version of SPL10 (referred to as mSPL10 ) to abolish
regulation by miR156/157 (Fig. 2A ). The coding regions of
SPL10 and mSPL10 were fused to that of the yeast GAL4
DNA-binding domain (GAL4DB), in-frame. They were then
co-bombarded into rosette leaves with a reporter plasmid
that contained GAL4 binding sites in the upstream region of
the luciferase ( LUC ) reporter gene ( Fig. 2B ). We assayed
luciferase expression in both juvenile and adult leaves
because miR156 levels are high in the juvenile phase and
decrease during shoot maturation ( Wu and Poethig 2006 ).
In juvenile rosette leaves in which miR156 is expressed at
a high level ( Wu and Poethig 2006 ), the LUC activity induced
by GAL4DB-SPL10 was similar to that of the GAL4DB
control, while GAL4DB-mSPL10 showed 3.8-fold higher
activity ( Fig. 2C ). This suggests that SPL10 is down-regulated
by miR156 . Supporting this, GAL4DB-SPL10 showed activation
activity in adult rosette leaves where the level of miR156
is much lower, although the activity was lower than that of
GAL4DB-mSPL10 ( Fig. 2D ). These data indicate that SPL10
acts as a transcriptional activator and that its function is
controlled by miR156. Deletion analysis indicated that the
activation activity of SPL10 is in the N-terminal 51 amino
acids containing the AHA-like motif ( Fig. 2E ). This motif
is conserved in all SPL10-like proteins (Supplementary
Fig. S2), suggesting that they also function as transcriptional
activators. The much higher activity of GAL4DB-SPL10 1–51
than that of GAL4DB-mSPL10 might be due to structural
accessibility to the transcriptional activation machinery.
Expression of an SPL10 chimeric repressor affected
shoot development in the reproductive phase
A phenotypic abnormality of spl10 , spl11 and spl2 has not
been identifi ed so far ( Wang et al. 2008 ). This is probably
because of their functional redundancy. Double or triple
mutants may show morphological defects. However, the
R JL AL CL S F1 F2 Fr
SPL10
SPL11
SPL2
PP2AA3
A
Fig. 1 Spatial expression of SPL10 , SPL11 and SPL2 . (A) RT–PCR analysis
of the expression of SPL10 , SPL11 and SPL2 in various tissues.
Full-length coding sequences were amplifi ed. PP2AA3 was used as
a loading control. R, roots; JL, juvenile leaves (third and fourth leaves);
AL, adult leaves (seventh to ninth leaves); CL, cauline leaves;
S, infl orescence stems; F1, fl owers at stage 1–12; F2, fl owers at stage
13–15; Fr, fruits. Flower stage is according to Smyth et al. (1990) . (B–E)
GUS staining of ProSPL10:GUS plants (B, C) and ProSPL11:GUS (D, E)
plants. Two-week-old (B, D) and 1-month-old (C, E) plants were GUS
stained. Scale bars represent 5 mm.
2

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ผู้ถูกตั้งไว้ 1.9 KB เขตเหนือ
spl10 รหัสลำดับ [ ถึงยีนใกล้ ( at1g27380 ) ] ,
และความยาวของ spl11 การตั้งใจกับ
การอ้างอิงถึง spl10 โปรโมเตอร์ สอดคล้องกับผลลัพธ์ของ RT PCR
–การวิเคราะห์กิจกรรมกัสที่ตรวจพบในเนื้อเยื่อต่างๆ
ได้แก่ ราก ใบ cauline Rosette , ใบ , FL
ทาวเวอร์และผลไม้ทั้งในต้นพืช ( รูปที่ 1A ( E ) กิจกรรมส่งเสริมการขายสูง
ถูกตรวจพบในรากและเยาวชน
Rosette ใบ ขณะที่ mRNA ที่สะสมในอวัยวะ
เหล่านี้ต่ำ นี้แสดงให้เห็นว่า spl10 spl11 และมีระเบียบ
โพสต์ transcriptionally ถึงแม้ว่านี้อาจเนื่องจาก
การขาดแคลนลำดับกฎระเบียบเพื่อ spl10 และการแสดงออก spl11
.
หน้าที่ของ spl10 MIC
ถูกควบคุมโดยเราตรวจสอบลองกระตุ้นกิจกรรมของ
spl10 โดย assay การแสดงออกชั่วคราว spl10 มีเป้าหมาย
เว็บไซต์สำหรับ mir156 / 157 ; ดังนั้น , เราผลิต mir156 / 157 -
ทนรุ่น spl10 ( เรียกว่า mspl10 ) ยกเลิก
ระเบียบโดย mir156 / 157 ( รูปที่ 2A ) รหัสภูมิภาคของ
spl10 mspl10 ) และผสมกับที่ของยีสต์ gal4
ดีเอ็นเอมัดโดเมน ( gal4db ) ในกรอบจากนั้นระดมยิงเข้าไปใน Rosette ใบ
Co กับนักข่าวที่มีพลาสมิด
gal4 เต็มเปี่ยมในพื้นที่ต้นน้ำของ
ลูซิเฟอเรส ( ลุค ) ยีนนักข่าว ( รูปที่ 2B ) การแสดงออกของเอนไซม์ลูซิเฟอเรสในซีรั่ม
เราทั้งเยาวชนและผู้ใหญ่ใบ
เพราะ mir156 ระดับสูงในเฟสและเยาวชน
ลดลงในช่วงยิงวุฒิภาวะ ( วูและ poethig
2006 )ในเยาวชน Rosette ใบที่ mir156 แสดงที่
ระดับสูง ( Wu และ poethig 2006 ) , ลุค กิจกรรมกระตุ้น
โดย gal4db-spl10 เป็นคล้ายกับที่ของการควบคุม gal4db
, ในขณะที่ gal4db-mspl10 พบ 3.8-fold กิจกรรมสูง
( รูปที่ 2 ) นี้แสดงให้เห็นว่า spl10 ลงระเบียบ
โดย mir156 . การสนับสนุนนี้ gal4db-spl10 พบกระตุ้น
กิจกรรมใน Rosette ผู้ใหญ่ใบที่ระดับของ mir156
ลดลงมาก แม้ว่ากิจกรรมที่น้อยกว่า
gal4db-mspl10 ( รูปที่ 2 ) ข้อมูลเหล่านี้บ่งชี้ว่า spl10
ทำหน้าที่เป็น activator particle และหน้าที่คือ ควบคุมโดย mir156
. การวิเคราะห์การเปิดใช้งาน พบว่า กิจกรรมของ spl10
ในกรดอะมิโนกรดอะมิโน
51 ที่มี AHA เป็นแม่ลาย ( ฟิค2 ) นี้เป็นบรรทัดฐานใน spl10
อนุรักษ์เช่นโปรตีน ( อาหารเสริม
รูป S2 ) แนะนำว่า พวกเขายังทำหน้าที่เป็น particle
มีชีวิตชีวา . สูงมาก กิจกรรมของ gal4db-spl10 1 – 51
กว่าของ gal4db-mspl10 อาจเนื่องมาจากการเข้าถึงโครงสร้าง
กับเครื่องจักร การกระตุ้นการแสดงออกของ spl10 particle .

ผู้ควบคุมที่ได้รับผลกระทบยิงในการพัฒนาระยะเจริญพันธุ์
ความผิดปกติของ spl10 ฟีโนไทป์ , และ spl11 spl2 ไม่ได้
ถูก identifi เอ็ดเพื่อให้ห่างไกล ( Wang et al . 2008 ) นี้อาจเป็นเพราะความซ้ำซ้อนของการทำงานของพวกเขา
. สองหรือสาม
กลายพันธุ์อาจแสดงลักษณะข้อบกพร่อง อย่างไรก็ตาม
r s F1 F2 JL อัล CL fr



spl10 spl11 spl2 pp2aa3

รูปที่ 1 มีพื้นที่การแสดงออกของ spl10 spl11 spl2 , และ .( ก ) RT PCR และการวิเคราะห์
ของการแสดงออกของ spl10 spl11 spl2 , และในเนื้อเยื่อต่างๆ มี amplifi ลำดับความยาวเต็มนะครับ

. pp2aa3 ใช้การควบคุม R ราก ; jl , ใบเยาวชน ( ใบที่ 3 และ 4 ) ;
อัล ผู้ใหญ่ใบ ( 7 ใบที่เก้า ) ; C1 , cauline ใบ ;
s infl orescence ลำต้น ; F1 , FL ทาวเวอร์ที่ขั้นที่ 1 – 12 ; F2 , FL ทาวเวอร์ในขั้นตอน
13 – 15 ; FR , ผลไม้เวทีดอกไม้ตามสมิท et al . ( 1990 ) ( B ) e )
กัส staining prospl10 : พืชกัส ( B , C ) และ prospl11 : กัส ( d , e )
พืช สองสัปดาห์เก่า ( B , D ) และ 1-month-old ( C , E ) พืชกัส
เปรอะเปื้อน แสดงแถบมาตราส่วน 5 mm .
2