2. Methods2.1. Isolation of yeast s

2. Methods
2.1. Isolation of yeast strain and growth conditions
The S. cerevisiae strain used in this study was isolated from fermentation
vats in the state Minas Gerais, Brazil using the modified
method of Oliveira et al. (2008). Samples were collected from fermentation
vats in sterile 150-mL flasks. Samples were diluted
1:100,000 in sterile water in triplicate and were inoculated on
YNB medium supplemented with ampicillin at 30 C for 3 days.
The isolates were first classified on the basis of morphological
characteristics and then tested for their ability to grow at different
temperatures (37 and 42 C) in the presence of 10% (w/v) ethanol.
Selected colonies were grown on YP medium containing 2% (w/v)
glucose supplemented with 10% (w/v) ethanol at 37 C.
The selected isolates underwent molecular identification of the
D1/D2 region of large subunit rRNA gene (Rosa and Lachance,
1998). PCR was performed from total DNA samples using the primers
NL1 and NL4 as previously described (Rosa and Lachance, 1998).
The amplifiedDNAwas concentrated, cleaned using the PEG method
(Sambrook and Russell, 2001) and sequenced in a Mega-BACE™
1000 automated sequencing system (Amersham Biosciences) in
the Institute of Biological Sciences of the Federal University of Minas
Gerais, Brazil. DNA sequences were analyzed using the program
blastn (Basic Local Alignment Search Tool 2.2.24-BLAST version
2.0) available at National Center for Biotechnology Information
(NCBI) website (Altschul et al., 1997). The sequences were compared
with sequences already deposited in GenBank. Sequence alignment
was performed using the program CLC Main Workbench 5.7.1.
Active cultures of K. marxianus UFV-3 and S. cerevisiae LBM-1 for
inoculation were prepared by growing the organisms using a rotary
shaker at 180 rpm for 16 h at 28 C in YPD medium (1% yeast
extract, 2% peptone and 2% glucose).Yeast growth at different temperatures
was analyzed by plating 5 ll of culture at dilutions of
1:0, 1:10 and 1:100 on agar plates containing YPD medium (1%
yeast extract, 2% peptone, 4% glucose and 2% agar). The plates were
incubated at 28, 37, 42 or 45 C for 72 h. The dilutions were prepared
in sterilized saline solution (0.85% NaCl) from active cultures
with an optical density (OD)600nm of 0.5.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วิธี2.1 การแยกยีสต์เจริญเติบโตและต้องใช้เงื่อนไขพันธุ์ S. cerevisiae ใช้ในการศึกษานี้ถูกแยกต่างหากจากการหมักvats ใน Minas Gerais บราซิลใช้ที่ปรับเปลี่ยนวิธีของ Oliveira et al. (2008) ตัวอย่างที่ถูกเก็บรวบรวมจากการหมักvats ในน้ำ 150 มล.ผ่านการฆ่าเชื้อ ตัวอย่างถูกทำให้เจือจาง1:100,000 กระบอกน้ำใน triplicate และมี inoculated บนเสริม ด้วยแอมพิซิลลินที่ 30 C 3 วันกลาง YNBครั้งแรกถูกจัดแบบแยกตามสัณฐานลักษณะ และทดสอบความสามารถในการเติบโตที่แตกต่างกันแล้วอุณหภูมิ (37 และ 42 C) ในต่อหน้าของเอทานอล 10% (w/v)เลือกอาณานิคมถูกปลูกในกลาง YP ประกอบด้วย 2% (w/v)เสริม ด้วยเอทานอล 10% (w/v) ที่ 37 C. กลูโคสแยกเลือกเปลี่ยนรหัสโมเลกุลง 1/D2 ภูมิภาคย่อยใหญ่ยีน rRNA (โรและรับบทปี 1998) การทำ PCR จากตัวอย่างดีเอ็นเอทั้งหมดโดยใช้ไพรเมอร์ที่NL1 และ NL4 ที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (โรและรับบท 1998)AmplifiedDNAwas เข้มข้น ทำความสะอาดโดยใช้วิธีการตรึง(Sambrook และรัสเซล 2001) และตามลำดับใน™ร็อค BACEระบบอัตโนมัติลำดับ 1000 (เวลาออก Amersham) ในศาสตร์สถาบันชีวภาพของมหาวิทยาลัยของรัฐบาลกลางของมินัสGerais บราซิล ลำดับดีเอ็นเอถูกวิเคราะห์โดยใช้โปรแกรมblastn (รุ่นพื้นฐานท้องถิ่นตำแหน่งค้นหาในเครื่องมือ 2.2.24-BLAST2.0) มีศูนย์ข้อมูลเทคโนโลยีชีวภาพแห่งชาติ(NCBI) เว็บไซต์ (Altschul และ al., 1997) ลำดับที่ถูกเปรียบเทียบมีลำดับที่แล้วฝากใน GenBank จัดลำดับที่ดำเนินการโดยใช้โปรแกรมปรับแต่ง Main CLC 5.7.1วัฒนธรรมการใช้งานของคุณ marxianus UFV 3 และ S. cerevisiae LBM 1 ในinoculation ถูกเตรียม โดยเติบโตสิ่งมีชีวิตที่ใช้แบบโรตารีเชคเกอร์ที่ 180 รอบต่อนาทีสำหรับ h 16 ที่ 28 C ใน YPD (ยีสต์ 1%แยก peptone 2% และ 2% กลูโคส) ยีสต์เจริญเติบโตที่อุณหภูมิแตกต่างกันถูกวิเคราะห์ โดยชุบ 5 ll ของวัฒนธรรมที่ dilutions ของ1:0, 1:10 และ 1: 100 ใน agar แผ่นมี YPD ปานกลาง (1%สารสกัดจากยีสต์ peptone 2% กลูโคส 4% และ 2% agar) แผ่นได้incubated ที่ 28, 37, 42 หรือ 45 C สำหรับ 72 h Dilutions ที่ได้เตรียมไว้ใน sterilized น้ำเกลือ (0.85% NaCl) จากวัฒนธรรมที่ใช้งานอยู่มี 600nm แสงความหนาแน่น (OD) 0.5

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . 2.1 วิธีการ
. การคัดเลือกสายพันธุ์ยีสต์และเงื่อนไขการเจริญเติบโต
S . cerevisiae สายพันธุ์ที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ ได้จากการหมัก vats ในรัฐ Minas Gerais

, บราซิล ใช้ดัดแปลงวิธีการ Oliveira et al . ( 2008 ) โดยเก็บตัวอย่างจากการหมัก vats ใน 150 ml ขวดปลอดเชื้อ
. ตัวอย่างที่เจือจางในน้ำ
1:100000 เป็นหมันทั้งสามใบปลูกเชื้อบน
และynb เติมแอมพิ 30  C เป็นเวลา 3 วัน
สายพันธุ์เป็นครั้งแรกจัดบนพื้นฐานของลักษณะสัณฐาน
แล้วทดสอบความสามารถในการเติบโตที่อุณหภูมิแตกต่างกัน
( 37 และ 42  C ) ในการแสดงตนของ 10% ( w / v )
เลือกปลูกเอทานอล อาณานิคมบน YP ขนาดกลางที่มี 2 % ( w / v )
กลูโคสผสม 10% ( w / v ) c .
 เอทานอลทั้งหมดที่ได้รับการจำแนกสายพันธุ์ระดับโมเลกุลของ
D1 / D2 ภูมิภาคของยีนแบคทีเรียย่อยขนาดใหญ่ ( Rosa และ lachance
, 1998 ) PCR ได้ จากตัวอย่างดีเอ็นเอทั้งหมดโดยใช้ไพรเมอร์
nl1 และ nl4 ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( Rosa และ lachance , 1998 ) .
amplifieddnawas เข้มข้น ทำความสะอาดโดยใช้ PEG วิธีการ
( sambrook และ Russell , 2001 ) และลำดับเบสในเมกา bace ™
1000 แบบอัตโนมัติระบบจัดลำดับ ( ชาม Biosciences )
สถาบันวิทยาศาสตร์ทางชีวภาพของมหาวิทยาลัยแห่งชาติของ Minas Gerais
, บราซิล ลำดับดีเอ็นเอโดยใช้โปรแกรม
blastn ( การปรับพื้นฐานท้องถิ่น 2.2.24-blast เครื่องมือค้นหารุ่น
2.0 ) ใช้ได้ที่ศูนย์
ข้อมูลชีวภาพแห่งชาติ ( ncbi ) เว็บไซต์ ( แอลเชิล et al . , 1997 ) ลำดับการเปรียบเทียบ
ลําดับแล้วฝากบริเวณ ลำดับการใช้โปรแกรมจัด

5.7.1 Workbench CLC หลัก . วัฒนธรรมที่ใช้งานอยู่ของ K . marxianus ufv-3 และ S . cerevisiae lbm-1 สำหรับ
( เตรียมโดยการใช้เครื่องปั่นหมุน
สิ่งมีชีวิตที่ 180 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 16 ชั่วโมง 28  C ใน ypd ขนาดกลาง ( 1 % สารสกัดจากยีสต์
2 % ตามลำดับ และ 2 % กลูโคส ) การเจริญเติบโตของยีสต์ที่อุณหภูมิต่างๆ
วิเคราะห์ข้อมูลโดยการชุบ 5 จะของวัฒนธรรมที่วิธีการ
1 : 0 , 1 : 10 และ 100 บนแผ่นวุ้นที่มี ypd ขนาดกลาง ( 1 %
% extract สารสกัดจากยีสต์ , 2 , 4% กลูโคสและ 2 % Agar ) จานถูก
บ่มที่ 28 , 37 , 42 หรือ 45  องศาเซลเซียส เป็นเวลา 72 ชั่วโมง โดยวิธีการเตรียม
ในน้ำเกลือ ( 0.85 % NaCl ) จากงานวัฒนธรรม
กับซิกแซ็ก ( OD ) 600nm 0.5 .