2.4. Cell culture and cell viabilit

2.4. Cell culture and cell viability assay
RIN and 3T3-L1 cells, as models for pancreatic β-cells and adipocytes, were purchased from American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA), and grown in RPMI 1640 medium with 10% fetal bovine serum (FBS) and Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM) with 10% fetal calf serum, respectively. To induce differentiation, 3T3-L1
preadipocytes were cultured until confluence was reached (Day 0), and the culture medium was replaced with a fresh
induction medium containing 5 μg/mL insulin, 0.5 mmol/L 3-isobutyl-1-methylxanthine, and 1 μmol/L dexamethasone
in DMEM with 10% FBS for 2 d. The medium was then replaced with a differentiation medium containing 5 μg/mL insulin
and DMEM with 10% FBS every 2 d for up to 8 d until the cells were harvested. The viability of cultured cells was assessed using 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay. In brief, RIN (1伊105
cells/well) cells and 3T3-L1 (1伊104 cells/well) cells seeded in 96-well plates were treated with respective concentrations of C. lentillifera extract for 48 h. Then, MTT solution (1 mg/mL) was added to each well, and the cells were incubated at 37 °C for 1 h. Finally, dimethyl sulfoxide was added to dissolve the formazan crystals. Absorbance was measured at 540 nm using a spectrophotometer (Immuno Mini NJ-2300, Japan).

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 การเพาะเลี้ยงเซลล์และเซลล์มีชีวิตทดสอบ
RIN และ 3T3-L1 เซลล์เป็นแบบจำลองสำหรับตับอ่อนβ-เซลล์และ adipocytes ถูกซื้อมาจากประเภทวัฒนธรรมอเมริกันสะสม (ATCC ซาส, VA, USA) และปลูกใน RPMI 1640 กลางที่มี 10% ของทารกในครรภ์ วัวซีรั่ม (FBS) และการปรับเปลี่ยนขนาดกลางอินทรี Dulbecco ของ (DMEM) กับ 10% ในซีรั่มของทารกในครรภ์น่องตามลำดับ เพื่อก่อให้เกิดความแตกต่างของ 3T3-L1
preadipocytes เพาะเลี้ยงจนบรรจบกันก็มาถึง (วันที่ 0), กลางและวัฒนธรรมถูกแทนที่ด้วยสด
กลางเหนี่ยวนำที่มี 5 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรอินซูลิน 0.5 มิลลิโมล / ลิตร 3 Isobutyl-1-methylxanthine และ 1 ไมโครโมล / ลิตร dexamethasone
ใน DMEM 10% FBS สำหรับ 2 D สื่อถูกแทนที่แล้วกับสื่อที่มีความแตกต่าง 5 ไมโครกรัมต่ออินซูลิน / มิลลิลิตร
และ DMEM 10% FBS ทุก 2 D ถึง 8 จนกว่าเซลล์ที่ถูกเก็บเกี่ยว ศักยภาพของเซลล์เพาะเลี้ยงได้รับการประเมินโดยใช้ 3- (4,5-dimethylthiazol-2-YL) -2,5-diphenyltetrazolium โบรไมด์ (MTT) การทดสอบ ในช่วงสั้น ๆ ริ้น (1伊105
เซลล์ / ดี) และเซลล์ 3T3-L1 (1伊104 เซลล์ / ดี) เซลล์เมล็ดในแผ่น 96 หลุมได้รับการรักษาที่มีความเข้มข้นของสารสกัดที่เกี่ยวข้อง lentillifera เซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมง แล้ววิธีการแก้ปัญหา MTT (1 mg / ml) ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละดีและเซลล์ที่ถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมง สุดท้าย sulfoxide dimethyl ถูกเพิ่มเข้ามาในการละลายผลึก formazan การดูดกลืนแสงวัดที่ 540 นาโนเมตรโดยใช้สเปก (Immuno มินิ NJ-2300, ญี่ปุ่น)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . การเพาะเลี้ยงเซลล์เซลล์ การทดสอบริน และ 3t3-l1 เซลล์ตับอ่อนองบีตา - เซลล์และได้ที่ , ซื้อจากประเภทคอลเลกชันวัฒนธรรมอเมริกันและซาส , VA , USA ) และปลูกใน RPMI 1640 ปานกลาง 10% เซรั่มและทารกในครรภ์ ( FBS ) และดัลเบโค่การนกอินทรีขนาดกลาง ( dmem ) 10% เซรั่มของทารกในครรภ์ น่อง ตามลำดับ เพื่อก่อให้เกิดการ 3t3-l1preadipocytes เพาะเลี้ยงจนบรรจบครบ ( วันที่ 0 ) และสื่อวัฒนธรรมถูกแทนที่ด้วยสดμ induction medium ที่ประกอบด้วย 5 กรัม / มิลลิลิตรต่อ 0.5 มิลลิโมล / ลิตร 3-isobutyl-1-methylxanthine และ 1 μ mol / L เดกซาเมธาโซนใน dmem 10% FBS 2 D ) แล้วแทนที่ด้วยอาหารที่มีทั้ง 5 μ g / ml อินซูลินและ dmem 10% FBS ทุก 2 ถึง 8 D จนกว่าเซลล์มีการเก็บเกี่ยว ชีวิตของการเพาะเลี้ยงเซลล์และการใช้ 3 - ( 4,5-dimethylthiazol-2-yl ) - 2,5-diphenyltetrazolium โบรไมด์ ( MTT ) ตามลำดับ สังเขป ริน ( 1 伊 105เซลล์ ) เซลล์และ 3t3-l1 ( 1 伊 104 เซลล์ ) เซลล์เมล็ดใน 96 ดีจานได้รับการรักษาที่มีความเข้มข้นของ สารสกัดจากสาหร่ายแต่ละที่เวลา 48 ชั่วโมงแล้ว ยาแก้ปัญหา ( 1 mg / ml ) ที่ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละ และเซลล์ที่อุณหภูมิ 37 องศา C เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ในที่สุด ไดเมทิล ซัลฟอกไซด์เพิ่มละลายเหลือเชื่อ . วัดค่าการดูดกลืนแสง Spectrophotometer ( 540 nm ใช้มมูโนมิ nj-2300 , ญี่ปุ่น )