Below is just a general guide line

Below is just a general guide line for a antigen-antibody-antibody dot blot assay protocol. Specific concentration need to be determined for each assay. Other type of dot blot assay, such as antibody-antigen-antibody can be performed in a similar fashion.

1. spot 1-2 microliter of antigen on to a piece of membrane, let air dry for 30 min or longer;

2. incubate with blocking buffer for 30 min -2 hr;

3. rinse with rinsing buffer, 3x5 min;

4. incubate with primary antibody, 30 min - 2 hr;

5. rinse with rinsing buffer, 3x5 min;

6. incubate with enzyme-labeled secondary antibody, 30 min - 2 hr;

7. rinse with rinsing buffer, 3x5 min;

8. add enzyme substrate, wait 5-10 min;

9. detect by eye or with colorimetric or chemiluminescent imaging system.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ด้านล่างนี้เป็นเพียงแนวทางทั่วไปสำหรับแอนติเจนแอนติบอดีแอนติบอดีโปรโตคอลทดสอบ dot blot ความเข้มข้นเฉพาะความต้องการที่จะได้รับการพิจารณาสำหรับแต่ละการทดสอบ ประเภทอื่น ๆ ของการทดสอบ blot จุดเช่นแอนติบอดีแอนติเจนและแอนติบอดีสามารถดำเนินการในรูปแบบเหมือนกัน. 1 จุด 1-2 ไมโครลิตรของแอนติเจนบนกับชิ้นส่วนของเมมเบรนให้อากาศแห้งเป็นเวลา 30 นาทีหรือนานกว่า; 2 ฟักไข่ที่มีการปิดกั้นกันชนเป็นเวลา 30 นาที -2 ชั่วโมง; 3 ล้างออกด้วยการล้างบัฟเฟอร์ 3x5 นาที; 4 ฟักไข่ที่มีแอนติบอดีหลัก 30 นาที - 2 ชั่วโมง; 5 ล้างออกด้วยการล้างบัฟเฟอร์ 3x5 นาที; 6 ฟักไข่ที่มีแอนติบอดีรองเอนไซม์ป้าย 30 นาที - 2 ชั่วโมง; 7 ล้างออกด้วยการล้างบัฟเฟอร์ 3x5 นาที; 8 เพิ่มพื้นผิวเอนไซม์รอ 5-10 นาที; 9 ตรวจสอบด้วยตาหรือระบบการถ่ายภาพสีหรือ chemiluminescent

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ด้านล่างเป็นเพียงแนวทางทั่วไปสำหรับแอนติเจน แอนติบอดี แอนติบอดี dot blot assay โปรโตคอล เฉพาะสมาธิต้องถูกกำหนดสำหรับแต่ละการทดสอบ ประเภทอื่น ๆของ dot blot assay ได้ เช่น แอนติบอดีแอนติเจนแอนติบอดีที่สามารถดำเนินการในแฟชั่นที่คล้ายกัน

1 จุดที่ 1 ไมโครลิตร แอนติเจนบนแผ่นเมมเบรน ปล่อยให้อากาศแห้งประมาณ 30 นาที หรือนาน ;
2ฟักไข่ด้วยการปิดกั้นบัฟเฟอร์สำหรับ 30 นาที - 2 ชั่วโมง ;

3 ล้างด้วยล้างบัฟเฟอร์ขนาด 3x5 มิน ;
4 ฟักไข่ด้วยแอนติบอดีประถมศึกษา 30 นาที - 2 ชั่วโมง ;
5 ล้างด้วยล้างบัฟเฟอร์ขนาด 3x5 มิน ;
6 บ่มเอนไซม์แอนติบอดีป้ายรอง 30 นาที - 2 ชั่วโมง ;
7 ล้างด้วยล้างบัฟเฟอร์ขนาด 3x5 มิน ;

8 เพิ่มเอนไซม์ตั้งต้น รอ 5-10 นาที ;
9ตรวจสอบด้วยตาหรือ 7.4 หรือระบบการถ่ายภาพ chemiluminescent .