[0079] The extract separating into

[0079] The extract separating into oil layer and water layer was placed in a separating funnel. The water layer was recovered in a beaker, and filtered
10 Using a separating funnel the water layer was separated. The crystalline material was
then separated from the water using a Nutche suction filter (51.1m, Sansyou Corporation) overlaid a filter paper (Advantec Toyo Co. Ltd., No 2) under low pressure (8kPa vs
Absolute pressure) and then crystal is obtained on the filter paper. The wet filter paper was rinsed with water to remove remaining fat then the crystal was dried under reduced
15 pressure (vacuum-constant temperature dryer, Advantec Toyo Co. Ltd.) at 60°C. 1.0g
of the รงควัตถุสีแดง of ปาล์มใบเลื่อย was obtained.

Example 2
[0080 ]1. Measurement of the anti-angiogenic activity of purified รงควัตถุสีแดง obtains
20 from ปาล์มใบเลื่อย.
Following biological test results were conducted by Ricerca Bioscience, LLC
(http://www.Ricerca.com.) under a contract (Assay#368000, Tumor, การสร้างหลอดเลือดใหม่,
การประกอบขึ้นของหลอด) with the รงควัตถุสีแดง แบบผลึก prepared in Example 1.
[0081] Human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) differentiate to capillary-like 25 structures and form vessel network on Matrigel in the presence of endothelial cell
growth supplements. The anti-angiogenic activity of a test compound can be assessed
by observing continuity of vessel network compared with untreated control. Test
compound (crystallized รงควัตถุสีแดง prepared in Example 3) was tested for an effect on
anti-การสร้างหลอดเลือดใหม่ at five final concentrations of 100, 10, 1, 0.1 and 0.01m/mL.
30 [0082] 2. Preparation of a test compound (รงควัตถุสีแดง แบบผลึก prepared in
Example 1)
The รงควัตถุสีแดง แบบผลึก prepared in Example 1 was dissolved in 100%
dimethyl sulfoxide (DMSO) and then diluted with sterile distilled water to obtain
สารละลายs of 1, 10, 100, 1000 and 100004mL in 40% DMSO. The สารละลายs were
35 diluted 100-fold with culture medium to generate final concentrations of 0.01, 0.1, 1, 10
and 100m/mL.

[0083] 3. Culture method of Human umbilical vein endothelial cells (HUVEC)
HUVEC was purchased from American Type Culture Collection (ATCC
CRL-1730). HUVEC cells were incubated in 5% CO2 atmosphere of at 37°C. The
culture medium used was Endothelial Cell Growth Medium supplemented with 10v/v% 5 fetal bovine serum and 1% antifungal antibiotic.
[0084] 4 Reagents: antifungal antibiotic (GIBCO BRL, USA), dimethylsulfoxide
(Merck, Germany), endothelial cell growth medium (CELL APPLICATIONS, USA), fetal bovine serum (HyClone, USA), Matrigel matrix (BD Biosciences, USA) and ซูรามิน (Sigma, USA).
10 [0085] 5. Devices and Apparatus
96-microwell culture plate (NUNC, USA), Centrifuge 5810R (Eppendorf, Germany), Digital camera (Nikon, Japan), Hematocytometer (Hausser Scientific Horsham, USA), Inverted microscope CK-40 (Olympus, Japan), System microscope E-400 (Nikon, Japan) and Biological safety cabinet (NuAire, USA)
15 [0086] 6. Methods
Matrigel matrix was thawed, kept on ice at 4°C and 541 of the matrix was transferred to each well of a 96-microwell culture plate. The plate was incubated at 37°C for at least one hour to allow the matrix สารละลาย to solidify before treatment.
[0087] Aliquots of 2004 of HUVEC suspension (about 1.5 x 104cells/well) were 20 placed in the 96-well matrigel plate. Two microliters per well of test compound
สารละลาย or vehicle (40% DMSO) was then added and incubated at 5% CO2, 37°C for
18 hours (in duplicate). The final concentration of DMSO was 0.4%. The test
compound was evaluated at concentrations of 100, 10, 1, 0.1 and 0.014mL. At the
end of incubation, a tube network formed by endothelial cell in each wells was
25 evaluated by photomicroscopy (magnification of 40x) and photographed. The total
length of tube network was measured from each photograph (Fig. 1).
[0088] The reduction of the total length of tube network in test compound treatment to
the total length of tube network in vehicle treatment control indicates anti-angiogenic
activity. The minimum inhibitory concentration (MIC) and 50% inhibition
30 concentration (IC50) were determined to assess effect of the test substance on
anti-การสร้างหลอดเลือดใหม่.
[0089] Grant,D.S., Kinsella,J.L., Fridman,R., Auerbach,R., Piasecki,B.A., Yamada,Y.,
et al. Interaction of endothelial cells with a laminin A Chain peptide(SIKVAV) in vitro
and induction of angiogenetic behavior in vivo. J. Cell Physio1.153:614-625, 1992.
35 Belotti,D., Vergani,V., Drudis,T., Borsotti,P., Pitelli,M.R., Viale,G., Giavazzi,R. and
Taraboletti,G. The microtubule-affecting drug paclitaxel has antiangiogeneic activity.


Clin. Cancer Res. 2:1843-1849, 1996.
[0090] 7. Results
รงควัตถุสีแดง แบบผลึก of the การประดิษฐ์นี้ at 100ug/mL exhibited
significant inhibition of การประกอบขึ้นของหลอด relative to the vehicle-treated control. The 5 standard reference reagent, ซูรามิน, also exhibited significant inhibition at 30 and
15RM (Table 2, รูปs 1 and 2). The IC50 value was shown in Table 3.
[0091] Inhibition of การประกอบขึ้นของหลอด of รงควัตถุสีแดง of ผลปาล์มใบเลื่อย
Treatment Assay Name % Inhibition of total tube length (mean±SEM)
Concentrations (tg/mL)
PT#1151525 368000, การสร้างหลอดเลือดใหม่ 100 10 1 0.1 0.01
รงควัตถุสีแดง การประกอบขึ้นของหลอด 80±4ab 19±3 518 813 -217
Concentrations (gg/mL)
368000, การสร้างหลอดเลือดใหม่ 30 15 10 3 1
ซูรามิน การประกอบขึ้นของหลอด 100±0a 42±9'6 8±1 4±5 3±4
a: Significant inhibition of การประกอบขึ้นของหลอด (30%) b: Minimum inhibitory concentration (MIC)
10 Inhibition of the การประกอบขึ้นของหลอด for 70% or more relative to the vehicle-treated control
group indicates significant anti-angiogenic activity.
[0092] Summary of Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and IC50
Treatment Assay # Assay Name MIC IC50
PT#1151625

368000
รงควัตถุสีแดง

ซูรามิน 368000


Example 3

Tumor, การสร้างหลอดเลือดใหม่, การประกอบขึ้นของหลอด 100[tg/mL 32}tg/mL


Tumor, การสร้างหลอดเลือดใหม่, การประกอบขึ้นของหลอด 15[M 1611M

15 [0093] A composition containing the รงควัตถุสีแดง from ผลปาล์มใบเลื่อย as the
following formulation was prepared.
Ingredient Blending quantity of cream (%w/w)
Ethinoic extract or รงควัตถุสีแดง from ปาล์มใบเลื่อย 2.0
Olive oil 10.0
Tri (capryl/capric acid) glyceryl 10.0
Tocopherol 1.0
D.W. 77.0
Total 100.0

Example 4
[0094] Measurement of การเพิ่มจำนวน inhibition activity of VEGF-Induced cell of 20 vascular endothelial cells by purified รงควัตถุสีแดง from ปาล์มใบเลื่อย.
Following results of a biological test was conducted by Ricerca Bioscience,
LLC (http://www.Ricerca.com.) with the รงควัตถุสีแดง แบบผลึก prepared in Example






-19-



1.
[0095] Test compounds and doses
The test compounds, NYG-1, DS-SMO, SMO and AK were evaluated for a
study of EGF การเพิ่มจำนวน. These compounds were dissolved and diluted in 100% 5 DMSO and concentrations were adjusted to 2.63mg/mL and 26.3mg /mL with DMSO.
The final concentration in the test was given as 1001.1g/mL and 101.1g/mL.
[0096] NYG-1: รงควัตถุสีแดง แบบผลึก prepared in Example 1.
DS-SMO: Lipophilic fraction extracted by ethanol from deep sea shark meat SMO: Lipophilic fraction extracted by ethanol from shark meat
10 AK: Concentrated alkoxy glycerol (AKG) of shark liver oil
[0097] Cells and Media
HUVEC (human umbilical vein endothelial cells) were purchased from
American Type Culture Collection (ATCC CRL-1730). HUVEC cells were incubated
in air atmosphere of 5% CO2 at 37°C. The culture medium used was Endothelial Cell 15 Growth Medium with 10% fetal bovine serum (FBS). The medium for assay was
M199 medium supplemented with 10% FBS and 1 Ottg/mL of Heparin.
[0098] Reagents
Dimethyl sulfoxide (Merck, Germany), Endothelial cell growth medium
(CELL APPLICATIONS, USA), Fetal bovine serum (HyClone, USA), Heparin (Sigma, 20 USA), SU5416 (Calbiochem, USA), VEGF165 (Calbiochem, USA) and HBSS(Gibco,
USA)
[0099] Devices and Apparatus
96-microwell tissue culture plate (N'UNC, USA), Centrifuge CT6D (Hitachi,
Japan), Nucleocounter (ChemoMetec, Denmark), Inverted microscope CK-30
25 (Olympus, Japan) and Biological safety cabinet (NuAire, USA)
[0100] Methods
Aliquots of HUVEC (1.1 x 105 cells/ well) were pre-seeded in the 96-well TC
plate in an incubator at 5% CO2, 37°C. Test compound สารละลาย or vehicle (DMSO)
was then added per well and incubated at 5% CO2, 37°C for 20 minutes. Thereafter, 30 VEGF165 (0.2nM) was added and incubated for 48 hours. 48 hours later, the cells were
washed with HBSS once. Then 511g/mL of the fluorescence reagent, CalceinAM dye
(BD Biosciences, USA) was added and incubated for another 50 minutes. After
incubation, fluorescence intensity was detected by Micro plate reader. More than 50%
of suppression for VEGF165 induced การเพิ่มจำนวน was indicated for the significant
35 antagonistic activity of the test reagent.
[0101] Summary of Methos





-20-



307900 Cell การเพิ่มจำนวน, VEGF-Induced
Target: Human Quantitation Method Spectrofluorimetric quantitation of
cell การเพิ่มจำนวน
Vehicle: 0.4% DMSO Signif. Criteria Ag.: >50% Increase in การเพิ่มจำนวน
relative to VEGF165 respon

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

[0079] สกัดแยกชั้นน้ำมันและชั้นน้ำถูกวางลงในกรวยแยก ชั้นน้ำในบีกเกอร์การกู้คืน และกรอง10 ใช้กรวยแยกชั้นน้ำที่แยก วัสดุผลึกได้แล้ว แยกออกจากน้ำที่ใช้ Nutche เป็น ตัวกรองดูด (51.1 m, Sansyou Corporation) overlaid กระดาษกรอง (Advantec โตโย จำกัด ทู) ภายใต้ความดันต่ำ (8kPa vs ความดันสัมบูรณ์) แล้ว การได้รับผลึกในกระดาษกรอง กระดาษกรองเปียกถูก rinsed ด้วยน้ำเพื่อเอาไขมันส่วนที่เหลือ แล้วคริสตัลจะได้แห้งลดลงต่ำกว่าความดัน 15 (ค่าคงสุญญากาศอุณหภูมิเครื่องเป่า Advantec โตโย จำกัด) ที่ 60 องศาเซลเซียส 1.0gของรงควัตถุสีแดงของปาล์มใบเลื่อยได้รับการตัวอย่างที่ 2[0080] 1. ได้รับประเมินกิจกรรม anti angiogenic ของรงควัตถุสีแดงบริสุทธิ์20 จากปาล์มใบเลื่อยต่อชีวภาพทดสอบ ผลได้ดำเนินการ โดยการซื้อ Ricerca, LLC (http://www.Ricerca.com.) ภายใต้สัญญา (Assay #368000 เนื้องอก การสร้างหลอดเลือดใหม่ การประกอบขึ้นของหลอด) กับแบบผลึกรงควัตถุสีแดงที่เตรียมไว้ในตัวอย่าง 1[0081] หลอดเลือดดำ umbilical มนุษย์เซลล์บุผนังหลอด (HUVEC) แตกต่างกับโครงสร้าง 25 แรงเหมือนเครือข่ายเรือแบบฟอร์มบน Matrigel ในต่อหน้าของเซลล์บุผนังหลอดเลือด อาหารเสริมการเจริญเติบโต สามารถประเมินกิจกรรม anti angiogenic การทดสอบผสม โดยการสังเกตความต่อเนื่องของเครือข่ายเรือเปรียบเทียบกับตัวควบคุมที่ไม่ถูกรักษา ทดสอบ สารประกอบ (ตกผลึกรงควัตถุสีแดงเตรียมไว้ในตัวอย่างที่ 3) ได้รับการทดสอบสำหรับลักษณะพิเศษบน ต่อต้าน-การสร้างหลอดเลือดใหม่ที่ความเข้มข้นสุดท้ายห้า 100, 10, 1, 0.1 และ 0.01 m/mL 30 [0082] 2 เตรียมทดสอบสารประกอบ (รงควัตถุสีแดงแบบผลึกเตรียมใน ตัวอย่างที่ 1)แบบผลึกรงควัตถุสีแดงที่เตรียมไว้ในตัวอย่าง 1 ที่ละลายใน 100%dimethyl sulfoxide (DMSO) และทำให้เจือจาง ด้วยน้ำกลั่นฆ่าเชื้อจะได้รับสารละลายs 1, 10, 100, 1000 และ 100004 mL ใน DMSO 40% ได้ สารละลายs35 100-fold ผสมกับวัฒนธรรมสื่อเพื่อสร้างความเข้มข้นสุดท้ายของ 0.01, 0.1, 1, 10และ 100m/mL[0083] 3 วัฒนธรรมวิธีการ umbilical มนุษย์เส้นเลือดเซลล์บุผนังหลอดเลือด (HUVEC)HUVEC ที่ซื้อจากอเมริกาชนิดวัฒนธรรมชุด (ATCCCRL-1730) HUVEC เซลล์ถูก incubated ใน 5% CO2 อันที่ 37 องศาเซลเซียส ที่สื่อวัฒนธรรมใช้ได้ปานกลาง เจริญเติบโตของ เซลล์ บุผนังหลอดเลือดเสริม ด้วยเซรั่มวัว 10v/v% 5 และทารกในครรภ์และยาปฏิชีวนะต้านเชื้อรา 1%[0084] 4 reagents: dimethylsulfoxide (GIBCO BRL สหรัฐอเมริกา), ยาปฏิชีวนะต้านเชื้อรา(เมอร์ค เยอรมนี), เซลล์บุผนังหลอดเลือดเชื้อ (เซลล์ที่ใช้งาน สหรัฐอเมริกา), เซรั่มวัวและทารกในครรภ์ (HyClone สหรัฐอเมริกา), Matrigel เมตริกซ์ (เวลาออก BD สหรัฐอเมริกา) และซูรามิน (ซิก สหรัฐอเมริกา)10 [0085] 5 อุปกรณ์และเครื่องมือ96 microwell วัฒนธรรมจาน (NUNC สหรัฐอเมริกา), 5810R เครื่องหมุนเหวี่ยง (Eppendorf เยอรมนี), ดิจิตอลกล้อง (Nikon ญี่ปุ่น), Hematocytometer (Hausser วิทยาศาสตร์เฮอร์แชม สหรัฐอเมริกา), กล้องจุลทรรศน์ Inverted CK-40 (โอลิมปัส ญี่ปุ่น), กล้องจุลทรรศน์ระบบอี-400 (Nikon ญี่ปุ่น) และคณะรัฐมนตรีความปลอดภัยทางชีวภาพ (NuAire สหรัฐอเมริกา)15 [0086] 6 วิธีการเมตริกซ์ Matrigel เป็น thawed เก็บไว้ในน้ำแข็งที่ 4° C และ 541 ของเมทริกซ์ถูกถ่ายโอนไปละดีแผ่น 96 microwell วัฒนธรรม จานถูก incubated ที่ 37° C อย่างน้อยหนึ่งชั่วโมงให้สารละลายเมตริกซ์จะแข็งก่อนรักษา[0087] aliquots 2004 รัฐ HUVEC (เกี่ยวกับ 1.5 x 104cells/ดี) ถูกวางในจาน matrigel 96 ดี 20 Microliters สองต่อด้วยการทดสอบที่ซับซ้อน สารละลายหรือยานพาหนะ (40% DMSO) แล้วเพิ่ม และ incubated 5% CO2, 37° C สำหรับ18 ชั่วโมง (ซ้ำ) ความเข้มข้นสุดท้ายของ DMSO เป็น 0.4% การทดสอบสารประกอบถูกประเมินที่ความเข้มข้น 100, 10, 1, 0.1 และ 0.014 mL ที่ มีจุดสิ้นสุดของคณะทันตแพทยศาสตร์ ท่อเครือข่ายเกิดขึ้นจากเซลล์บุผนังหลอดเลือดในแต่ละบ่อ 25 ประเมิน โดย photomicroscopy (อัตราส่วนของ 40 x) และถ่ายภาพ ผลรวม ความยาวของเครือข่ายหลอดถูกวัดจากแต่ละภาพ (Fig. 1) [0088] การลดลงของความยาวรวมของเครือข่ายหลอดทดสอบผสมให้ ความยาวรวมของท่อเครือข่ายในการควบคุมรักษารถบ่งชี้ anti angiogenic กิจกรรมการ เข้มข้นลิปกลอสไขต่ำสุด (MIC) และยับยั้งการ 50% ความเข้มข้น 30 (IC50) ที่กำหนดประเมินผลของสารทดสอบใน ต่อต้าน-การสร้างหลอดเลือดใหม่[0089] Grant,D.S. Kinsella,J.L. Fridman, R., Auerbach อาร์ Piasecki,B.A ยามาดะ Y., ร้อยเอ็ด al. โต้ตอบของเซลล์บุผนังหลอดเลือด ด้วย peptide(SIKVAV) A สาย laminin มีการเพาะเลี้ยง และ angiogenetic พฤติกรรมในสัตว์ทดลองที่เหนี่ยวนำ เจเซลล์ Physio1.153:614-625, 1992 Belotti, D., Vergani 35, V., Drudis ต. Borsotti, P., Pitelli,M.R, Viale กรัม Giavazzi, R. และ Taraboletti กรัม มีผลต่อไมโครทิวบูลยา paclitaxel มีกิจกรรม antiangiogeneic Clin 2:1843 ทรัพยากรมะเร็ง-1849, 1996[0090] 7 ผลลัพธ์จัดแสดงแบบผลึกรงควัตถุสีแดงของการประดิษฐ์นี้ที่ 100ug/mLการยับยั้งการประกอบขึ้นของหลอดที่สัมพันธ์กับการควบคุมรถถือว่าสำคัญ รีเอเจนต์อ้างอิงมาตรฐานที่ 5 ซูรามิน นอกจากนี้ยังจัดแสดงยับยั้งสำคัญที่ 30 และ 15RM (ตารางที่ 2, รูปs 1 และ 2) ค่า IC50 ที่แสดงในตาราง 3 [0091] ยับยั้งการประกอบขึ้นของหลอดรงควัตถุสีแดงผลปาล์มใบเลื่อยรักษาชื่อวิเคราะห์%ยับยั้งความยาวท่อรวม (mean±SEM)ความเข้มข้น (tg/มล.)PT #1151525 368000 การสร้างหลอดเลือดใหม่ 100 10 1 0.01-0.1รงควัตถุสีแดงการประกอบขึ้นของหลอด 80±4ab 19±3 518 813-217ความเข้มข้น (gg/มล.)368000 การสร้างหลอดเลือดใหม่ 30 15 10 3 1ซูรามินการประกอบขึ้นของหลอด 100±0a 42±9'6 8±1 4±5 3±4a:ยับยั้งการสำคัญ b:การประกอบขึ้นของหลอด (30%) ต่ำสุด (MIC) ลิปกลอสไขความเข้มข้นการประกอบขึ้นของหลอด 70% หรือมากกว่าเมื่อเทียบกับการควบคุมรถถือว่ายับยั้ง 10กลุ่มบ่งชี้กิจกรรม anti angiogenic สำคัญ[0092] สรุปเข้มข้นลิปกลอสไขต่ำสุด (MIC) และ IC50รักษาวิเคราะห์#วิเคราะห์ชื่อไมค์ IC50PT #1151625 368000รงควัตถุสีแดงซูรามิน 368000ตัวอย่างที่ 3 เนื้องอก การสร้างหลอดเลือดใหม่ การประกอบขึ้นของหลอด 100 [tg/mL 32 } tg/mLเนื้องอก การสร้างหลอดเลือดใหม่ การประกอบขึ้นของหลอด 15 [M 1611M 15 องค์ประกอบ [0093] A ประกอบด้วยรงควัตถุสีแดงจากผลปาล์มใบเลื่อยเป็นการตามกำหนดเตรียมไว้ปริมาณลักษณะแบบผสมส่วนผสมของครีม (%w/w)สารสกัดจาก Ethinoic หรือรงควัตถุสีแดงจากปาล์มใบเลื่อย 2.0น้ำมันมะกอก 10.0ตรี (capryl/capric กรด) glyceryl 10.0Tocopherol 1.0D.W. 77.0รวม 100.0ตัวอย่างที่ 4วัดการเพิ่มจำนวนยับยั้งกิจกรรมของเซลล์เกิด VEGF 20 เซลล์บุผนังหลอดเลือดของหลอดเลือดโดยรงควัตถุสีแดงบริสุทธิ์จากปาล์มใบเลื่อย [0094] ต่อผลของการทดสอบทางชีวภาพถูกดำเนินการ โดย Ricerca ซื้อLLC (http://www.Ricerca.com.) ด้วยแบบผลึกรงควัตถุสีแดงที่เตรียมไว้ในตัวอย่าง -19-1สารทดสอบและปริมาณ [0095]สารทดสอบ NYG 1, DS SMO, SMO และ AK ถูกประเมินเป็น ศึกษาของ EGF การเพิ่มจำนวน สารเหล่านี้มีส่วนยุบ และผสมใน 100% 5 DMSO และปรับความเข้มข้นถูกชาว mg/mL และ 26.3 mg /mL ด้วย DMSO ความเข้มข้นสุดท้ายในการทดสอบได้รับเป็น 1001.1 g/mL และ 101.1 g/mL [0096] NYG-1: แบบผลึกรงควัตถุสีแดงที่เตรียมไว้ในตัวอย่าง 1DS-SMO: เศษ Lipophilic สกัด ด้วยเอทานอลจากเนื้อปลาฉลามน้ำลึก SMO: เศษ Lipophilic ที่สกัด ด้วยเอทานอลจากเนื้อฉลาม10 AK: เข้มข้น alkoxy กลีเซอร (AKG) ของน้ำมันตับปลาฉลาม[0097] เซลล์และสื่อซื้อจาก HUVEC (หลอดเลือดดำ umbilical มนุษย์เซลล์บุผนังหลอดเลือด)ชนิดอเมริกันวัฒนธรรมชุด (ATCC CRL-1730) เซลล์ HUVEC ได้ incubated บรรยากาศอากาศ 5% CO2 ที่ 37 องศาเซลเซียส สื่อวัฒนธรรมใช้ได้ปานกลาง เติบโต 15 เซลล์ บุผนังหลอดเลือด ด้วย serum วัว 10% และทารกในครรภ์ (FBS) กลางสำหรับการวิเคราะห์ได้ M199 สื่อเสริม ด้วย 10% FBS และ Ottg 1 mL ของเฮพาริน Reagents [0098]Dimethyl sulfoxide (เมอร์ค เยอรมนี), ขนาดกลางเจริญเติบโตของเซลล์บุผนังหลอดเลือด(ใบสมัครเซลล์ สหรัฐอเมริกา), ครรภ์วัวเซรั่ม (HyClone สหรัฐอเมริกา), เฮพาริน (ซิก 20 สหรัฐอเมริกา), SU5416 (Calbiochem สหรัฐอเมริกา), VEGF165 (Calbiochem สหรัฐอเมริกา) และ HBSS (Gibco สหรัฐอเมริกา)เครื่องมือและอุปกรณ์ [0099]96 microwell เยื่อแผ่น (N'UNC สหรัฐอเมริกา), CT6D เครื่องหมุนเหวี่ยง (ฮิตาชิ ญี่ปุ่น), Nucleocounter (ChemoMetec เดนมาร์ก), กล้องจุลทรรศน์ Inverted CK-30 25 (โอลิมปัส ญี่ปุ่น) และความปลอดภัยทางชีวภาพตู้ (NuAire สหรัฐอเมริกา) วิธี [0100]Aliquots HUVEC (1.1 x 105 เซลล์ / ดี) ถูก seeded ก่อนใน TC 96-ดี จานในการบ่มเพาะวิสาหกิจที่ 5% CO2, 37 องศาเซลเซียส ทดสอบผสมสารละลายหรือยานพาหนะ (DMSO) แล้วเพิ่มต่อดี และ incubated 5% CO2, 37° C 20 นาที หลังจากนั้น 30 VEGF165 (0.2nM) เพิ่ม และ incubated ภายใน 48 ชั่วโมง 48 ชั่วโมงต่อมา เซลล์ได้ ล้าง ด้วย HBSS ครั้ง แล้ว 511g/mL ของรีเอเจนต์ fluorescence ย้อม CalceinAM (BD เวลาออก สหรัฐอเมริกา) ถูกเพิ่ม และ incubated สำหรับอีก 50 นาที หลังจาก คณะทันตแพทยศาสตร์ ความเข้ม fluorescence ถูกตรวจพบ โดยเครื่องอ่านแผ่นไมโคร มากกว่า 50% ปราบปรามการ VEGF165 ของ การเพิ่มจำนวนอาจไม่ระบุสำคัญ กิจกรรมต่อต้าน 35 ของรีเอเจนต์ทดสอบสรุป [0101] Methos -20-307900 เซลล์การเพิ่มจำนวน VEGF เกิดเป้าหมาย: Spectrofluorimetric วิธีการวิเคราะห์หาปริมาณมนุษย์การวิเคราะห์หาปริมาณเซลล์การเพิ่มจำนวนรถ: 0.4% DMSO Signif เกณฑ์ Ag: > เพิ่มขึ้น 50% การเพิ่มจำนวนสัมพันธ์กับ VEGF165 respon

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

[0079] สารสกัดแยกน้ำมันในชั้นและชั้นน้ำที่วางอยู่ในช่องทางแยก ชั้นน้ำที่ได้รับการกู้คืนได้ในบีกเกอร์และกรอง
10 ใช้ช่องทางแยกชั้นน้ำถูกแยกออก วัสดุผลึกถูกแยกออกจากกันแล้วจากน้ำโดยใช้ตัวกรองดูด Nutche (51.1m, Sansyou คอร์ปอเรชั่น) วางทับกระดาษกรอง (Advantec Toyo Co. , Ltd. ที่ 2) ภายใต้ความดันต่ำ (8kPa เทียบกับความดันแอบโซลูท) และจากนั้นจะได้รับคริสตัล บนกระดาษกรอง กระดาษกรองเปียกได้รับการล้างด้วยน้ำที่เหลืออยู่ที่จะเอาไขมันแล้วคริสตัลแห้งภายใต้ลดลง15 ความดัน (เครื่องเป่าสูญญากาศที่อุณหภูมิคงที่ Advantec Toyo จำกัด ) ที่ 60 ° C 1.0g ของรงควัตถุสีแดงของปาล์มใบเลื่อยได้. ตัวอย่างที่ 2 [0080] 1 การวัดกิจกรรมต่อต้าน angiogenic บริสุทธิ์ของรงควัตถุสีแดงได้รับ20 จากปาล์มใบเลื่อย. หลังจากผลการทดสอบทางชีวภาพได้ดำเนินการโดย Ricerca ชีววิทยาศาสตร์, LLC (http://www.Ricerca.com.) ภายใต้สัญญา (Assay # 368000, เนื้องอก, กับรงควัตถุสีแดงแบบผลึกเตรียมในตัวอย่างที่ 1 [0081] เส้นเลือดมนุษย์สะดือเซลล์บุผนังหลอดเลือด (HUVEC) เพื่อแยกความแตกต่างของเส้นเลือดฝอยเหมือน 25 โครงสร้างและเครือข่ายในรูปแบบเรือ Matrigel ในการปรากฏตัวของเซลล์บุผนังหลอดเลือดเสริมการเจริญเติบโต. กิจกรรมป้องกันเส้นเลือด ของสารทดสอบสามารถประเมินโดยการสังเกตต่อเนื่องของเครือข่ายเรือเมื่อเทียบกับการควบคุมการรับการรักษา. การทดสอบสาร (ตกผลึกรงควัตถุสีแดงที่เตรียมไว้ในตัวอย่างที่ 3) ได้รับการทดสอบสำหรับผลกระทบต่อการป้องกันการสร้างหลอดเลือดใหม่ที่ห้าความเข้มข้นสุดท้ายของ100, 10 , 1, 0.1 และ 0.01m / mL. 30 [0082] 2 การเตรียมสารทดสอบ (รงควัตถุสีแดงแบบผลึกจัดทำขึ้นตัวอย่างที่1) รงควัตถุสีแดงแบบผลึกจัดทำขึ้นตัวอย่างที่ 1 ถูกละลายใน 100% dimethyl sulfoxide ( DMSO) แล้วเจือจางด้วยน้ำกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อที่จะได้รับสารละลายของ1, 10, 100, 1000 และ 100004mL ใน 40% DMSO. โดยสารละลาย s เป็น35 เจือจาง 100 เท่าที่มีขนาดกลางวัฒนธรรมเพื่อสร้างความเข้มข้นสุดท้ายของ 0.01, 0.1, 1 10 และ 100 เมตร / mL. [0083] 3 วิธีวัฒนธรรมของหลอดเลือดดำที่สะดือมนุษย์เซลล์บุผนังหลอดเลือด (HUVEC) HUVEC ซื้อมาจากวัฒนธรรมอเมริกันประเภทสะสม (ATCC CRL-1730) เซลล์ HUVEC ถูกบ่มในบรรยากาศ CO2 5% ของที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส อาหารเลี้ยงเชื้อที่ใช้เป็นขนาดกลางการเจริญเติบโตของเซลล์ Endothelial เสริมด้วย 10V / ปริมาตร% 5 ซีรั่มวัวของทารกในครรภ์และ 1% ยาปฏิชีวนะเชื้อรา. [0084] 4 รีเอเจนต์: เชื้อรายาปฏิชีวนะ (GIBCO BRL สหรัฐอเมริกา), Dimethylsulfoxide (เมอร์ค, เยอรมนี) เจริญเติบโตของเซลล์บุผนังหลอดเลือด ปานกลาง (การประยุกต์ใช้เซลล์สหรัฐอเมริกา), เซรั่มวัวของทารกในครรภ์ (HyClone, USA) Matrigel เมทริกซ์ (BD ชีววิทยาศาสตร์สหรัฐอเมริกา) และซูรามิน (ซิกม่าสหรัฐอเมริกา). 10 [0085] 5. อุปกรณ์และเครื่องมือ96 microwell แผ่นวัฒนธรรม (NUNC สหรัฐอเมริกา), เครื่องปั่นเหวี่ยง 5810R (Eppendorf, เยอรมนี) กล้องดิจิตอล (Nikon, ญี่ปุ่น) Hematocytometer (Hausser วิทยาศาสตร์ Horsham, USA) กล้องจุลทรรศน์ Inverted CK-40 (Olympus, ญี่ปุ่น) กล้องจุลทรรศน์ระบบ E-400 (Nikon, ญี่ปุ่น) และคณะรัฐมนตรีด้านความปลอดภัยทางชีวภาพ (NuAire สหรัฐอเมริกา) 15 [0086] 6 วิธีMatrigel เมทริกซ์ได้รับการละลายน้ำแข็งเก็บไว้ในที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสและ 541 ของเมทริกซ์ถูกย้ายไปละกันของแผ่นวัฒนธรรม 96 microwell แผ่นที่ได้รับการบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลาอย่างน้อยหนึ่งชั่วโมงเพื่อให้เมทริกซ์สารละลายจะแข็งก่อนการรักษา. [0087] aliquots ของปี 2004 ของการระงับ HUVEC (ประมาณ 1.5 x 104cells / ดี) 20 ถูกวางไว้ในจาน matrigel 96 หลุม . สอง microliters ต่อกันดีของสารทดสอบสารละลายหรือยานพาหนะ(40% DMSO) ถูกเพิ่มเข้ามาแล้วและบ่มที่ CO2 5%, 37 ° C เป็นเวลา18 ชั่วโมง (ในที่ซ้ำกัน) ความเข้มข้นสุดท้ายของ DMSO เป็น 0.4% การทดสอบสารถูกประเมินที่ระดับความเข้มข้น 100, 10, 1, 0.1 และ 0.014mL ในตอนท้ายของการบ่มเครือข่ายท่อที่เกิดขึ้นจากเซลล์บุผนังหลอดเลือดในแต่ละหลุม25 การประเมินโดย photomicroscopy (ขยาย 40x) และถ่ายภาพ รวมความยาวของเครือข่ายท่อวัดจากแต่ละรูปถ่าย (รูปที่ 1).. [0088] การลดลงของความยาวรวมของเครือข่ายท่อในการทดสอบสารที่จะรักษาความยาวรวมของเครือข่ายในการควบคุมหลอดรักษารถบ่งชี้ป้องกันเส้นเลือดกิจกรรม ความเข้มข้นต่ำสุดที่ยับยั้ง (MIC) และ 50% ยับยั้ง30 ความเข้มข้น (IC50) ได้รับการพิจารณาในการประเมินผลกระทบของสารทดสอบที่เกี่ยวกับการป้องกันการสร้างหลอดเลือดใหม่. [0089] แกรนท์, ดีเอสคินเซลลา JL, Fridman วิจัย. บาค วิจัย. เซคสกี, BA, ยามาดะ, y., et al, การทำงานร่วมกันของเซลล์บุผนังหลอดเลือดที่มี laminin เปปไทด์เชน (SIKVAV) ในหลอดทดลองและการเหนี่ยวนำของพฤติกรรมangiogenetic ในร่างกาย เจเซลล์ Physio1.153: 614-625 1992614-625 1992 35 Belotti, D, Vergani, V, Drudis, T, Borsotti, P, Pitelli, MR, Viale, G, Giavazzi วิจัย..... และTaraboletti จี ยาเสพติดที่มีผลต่อ microtubule-paclitaxel กิจกรรม antiangiogeneic. Clin มะเร็ง Res 2: 1843-1849, 1996 [0090] 7. ผลรงควัตถุสีแดงแบบผลึกของการประดิษฐ์นี้ที่100ug / mL แสดงการยับยั้งที่สำคัญของการประกอบขึ้นของหลอดเทียบกับการควบคุมรถได้รับการรักษา 5 สารอ้างอิงมาตรฐานซูรามินยังแสดงการยับยั้งอย่างมีนัยสำคัญและวันที่ 30 15RM (ตารางที่ 2, s รูปที่ 1 และ 2) ค่า IC50 ถูกนำมาแสดงในตารางที่ 3 [0091] ยับยั้งการประกอบขึ้นของหลอดของรงควัตถุสีแดงของผลปาล์มใบเลื่อยรักษาAssay ยับยั้งชื่อ% ของความยาวท่อรวม (หมายถึง± SEM) ความเข้มข้น (TG / มิลลิลิตร) PT # 1151525 368000, การสร้างหลอดเลือดใหม่ 100 10 1 0.1 0.01 รงควัตถุสีแดงการประกอบขึ้นของหลอด 80 ± 4AB 19 ± 3 518 813 -217 ความเข้มข้น (GG / มิลลิลิตร) 368000, การสร้างหลอดเลือดใหม่ 30 15 10 3 1 ซูรามิ นการประกอบขึ้นของหลอด 100 ± 0a 42 ± 9'6 8 ± 1 4 3 ± 5 ± 4: การยับยั้งสำคัญของการประกอบขึ้นของหลอด (30%) ข: ยับยั้งความเข้มข้นต่ำสุด (MIC) 10 ของการยับยั้งการ ประกอบขึ้นของหลอด 70% หรือมากกว่าเมื่อเทียบกับการควบคุมรถได้รับการรักษากลุ่มบ่งชี้ว่ากิจกรรมการต้านเส้นเลือดอย่างมีนัยสำคัญ. [0092] บทสรุปของความเข้มข้นต่ำสุด (MIC) และ IC50 รักษา Assay # Assay ชื่อ MIC IC50 PT # 1151625 368000 รงควัตถุสี แดงซูรามิน368,000 ตัวอย่างที่ 3 เนื้องอก, การสร้างหลอดเลือดใหม่, การประกอบขึ้นของหลอด 100 [TG / mL 32} TG / mL เนื้องอก, การสร้างหลอดเลือดใหม่, การประกอบขึ้นของหลอด 15 [M 1611M 15 [0093] องค์ประกอบที่มีรงควัตถุสีแดงจากผลปาล์มใบเลื่อยเป็นสูตรต่อไปนี้ถูกจัดทำขึ้น. ส่วนผสมปริมาณการผสมของครีม (% w / w) สารสกัดจาก Ethinoic หรือรงควัตถุสีแดงจากปาล์มใบเลื่อย 2.0 น้ำมันมะกอก 10.0 ไตร (capryl / กรด capric ) กลีเซอ 10.0 Tocopherol 1.0 ใบสำคัญแสดงสิทธิอนุพันธ์ 77.0 รวม 100.0 ตัวอย่างที่ 4 [0094] การวัดการเพิ่มจำนวนฤทธิ์ยับยั้งเซลล์ VEGF-Induced 20 เซลล์บุผนังหลอดเลือดหลอดเลือดโดยบริสุทธิ์รงควัตถุสีแดงจากปาล์มใบเลื่อย. หลังจากผลของการทดสอบทางชีวภาพได้ดำเนินการโดย Ricerca ชีววิทยาศาสตร์, LLC (http : //www.Ricerca.com) กับรงควัตถุสีแดงแบบผลึกจัดทำขึ้นตัวอย่าง. -19- 1. [0095] สารทดสอบปริมาณที่สารทดสอบNYG-1 DS-SMO, SMO และ AK ได้รับการประเมินสำหรับศึกษา EGF การเพิ่มจำนวน สารเหล่านี้กำลังละลายและเจือจางใน 100% 5 DMSO และความเข้มข้นที่จะมีการปรับ 2.63mg / มิลลิลิตรและ 26.3mg / มิลลิลิตร DMSO. ความเข้มข้นสุดท้ายในการทดสอบได้รับเป็น 1001.1g / มิลลิลิตรและ 101.1g / mL. [0096] NYG-1: รงควัตถุสีแดงแบบผลึกจัดทำขึ้นตัวอย่าง 1. DS-SMO: ส่วน lipophilic สกัดด้วยเอทานอลจากเนื้อปลาฉลามน้ำลึก SMO: ส่วน lipophilic สกัดด้วยเอทานอลจากเนื้อปลาฉลาม10 อลาสกา: กลีเซอรอล alkoxy เข้มข้น (AKG) ตับปลาฉลาม น้ำมัน[0097] เซลล์และสื่อHUVEC (หลอดเลือดดำสายสะดือมนุษย์เซลล์บุผนังหลอดเลือด) ที่ซื้อมาจากชาวอเมริกันประเภทวัฒนธรรมสะสม (ATCC CRL-1730) เซลล์ HUVEC ถูกบ่มในบรรยากาศของCO2 5% ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส อาหารเลี้ยงเชื้อที่ใช้เป็น Endothelial เซลล์ 15 ขนาดกลางที่มีการเจริญเติบโตของทารกในครรภ์ซีรั่มวัว 10% (FBS) กลางสำหรับการทดสอบเป็นM199 เสริมขนาดกลางที่มี FBS 10% และ 1 Ottg / มิลลิลิตรเฮ. [0098] การวิเคราะห์สารDimethyl sulfoxide (เมอร์ค, เยอรมนี) เซลล์ Endothelial สื่อการเจริญเติบโต(การประยุกต์ใช้เซลล์สหรัฐอเมริกา), เซรั่มวัวของทารกในครรภ์ (HyClone, สหรัฐอเมริกา ) เฮ (ซิกม่า 20 USA) SU5416 (Calbiochem, USA) VEGF165 (Calbiochem สหรัฐอเมริกา) และ HBSS (Gibco, USA) [0099] อุปกรณ์และเครื่องมือ96 microwell จานเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ (N'UNC, USA) centrifuge CT6D (ฮิตาชิญี่ปุ่น) Nucleocounter (ChemoMetec, เดนมาร์ก) กล้องจุลทรรศน์ฤๅษี CK-30 25 (Olympus, ญี่ปุ่น) และคณะรัฐมนตรีด้านความปลอดภัยทางชีวภาพ (NuAire สหรัฐอเมริกา) [0100] วิธีaliquots ของ HUVEC (1.1 x 105 เซลล์ / กัน) ถูก pre-เมล็ดใน TC 96 หลุมจานในศูนย์บ่มเพาะที่CO2 5%, 37 ° C ทดสอบสารประกอบสารละลายหรือยานพาหนะ (DMSO) ถูกบันทึกแล้วต่อดีและบ่มที่ CO2 5%, 37 ° C เป็นเวลา 20 นาที หลังจากนั้น 30 VEGF165 (0.2nM) ถูกบันทึกและบ่มเป็นเวลา 48 ชั่วโมง 48 ชั่วโมงต่อมาเซลล์ที่ถูกล้างด้วยHBSS ครั้งเดียว จากนั้น 511g / มลสารเรืองแสงสีย้อม CalceinAM (BD ชีววิทยาศาสตร์สหรัฐอเมริกา) ถูกบันทึกและบ่มเป็นเวลาอีก 50 นาที หลังจากที่บ่มความเข้มแสงที่ตรวจพบโดยผู้อ่านแผ่นไมโคร มากกว่า 50% ของการปราบปรามสำหรับ VEGF165 เหนี่ยวนำให้เกิดการเพิ่มจำนวนได้แสดงให้เห็นอย่างมีนัยสำคัญสำหรับ35 กิจกรรมปฏิปักษ์ของน้ำยาทดสอบ. [0101] สรุปเมธอส-20- 307,900 เซลล์การเพิ่มจำนวน, VEGF-Induced เป้าหมาย: มนุษย์ปริมาณวิธี Spectrofluorimetric ปริมาณ ของเซลล์การเพิ่มจำนวนยานพาหนะ: 0.4% DMSO signif เกณฑ์ Ag .:> 50% การเพิ่มขึ้นของการเพิ่มจำนวนเมื่อเทียบกับการตอบสนองVEGF165

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

[ 0079 ] สกัดแยกน้ำมันและน้ำในชั้นชั้นวางในกรวยแยก . น้ำชั้นก็หายในบีกเกอร์และกรอง
10 โดยใช้กรวยแยกน้ำแยกชั้น . วัสดุผลึกคือ
จากนั้นแยกออกจากน้ำโดยใช้ nutche ( 51.1m ดูดกรอง , กรองกระดาษหุ้ม sansyou Corporation ) ( ADVANTEC โตโย จำกัด2 ) ภายใต้ความดันต่ำ ( 8kpa vs
ความดันสัมบูรณ์ ) แล้วคริสตัลจะได้รับตัวกรองกระดาษ กรองเปียกกระดาษถูกล้างด้วยน้ำเพื่อเอาไขมันที่เหลือแล้ว คริสตัลก็แห้งภายใต้ความดันลดลง
15 ( สุญญากาศคงที่อุณหภูมิอบแห้ง , ADVANTEC Toyo จำกัด ) ที่อุณหภูมิ 60 องศา 1.0g
ของรงควัตถุสีแดงของปาล์มใบเลื่อยได้

ตัวอย่าง 2
[ 0080 ] 1การวัดการป้องกัน angiogenic กิจกรรมให้รงควัตถุสีแดงได้รับ 20 จากปาล์มใบเลื่อย
.
ต่อไปนี้การทดสอบทางชีวภาพผลการทดลองโดยค้นหาวิทยาศาสตร์ชีวภาพ , LLC
( http : / / www.ricerca . com . ) ภายใต้สัญญา ( โดย# 368000 เนื้องอก การสร้างหลอดเลือดใหม่
,การประกอบขึ้นของหลอด ) กับรงควัตถุสีแดงแบบผลึกเตรียมไว้ในตัวอย่าง 1 .
[ 0081 ] หลอดเลือดดำสายสะดือมนุษย์ ( เพิ่ ) ต่างฝอย 25 โครงสร้างและรูปแบบเครือข่ายบนเรือ matrigel ในการแสดงตนของเยื่อบุเซลล์
การเจริญเติบโตอาหารเสริม ต่อต้าน angiogenic กิจกรรมการทดสอบสารสามารถประเมิน
โดยความต่อเนื่องสังเกตเครือข่ายเรือเมื่อเทียบกับการควบคุมสาร ทดสอบ
สารประกอบ ( ตกผลึกรงควัตถุสีแดงเตรียมไว้ในตัวอย่างที่ 3 ) พบว่ามีผลต่อ
ต่อต้าน - การสร้างหลอดเลือดใหม่ที่ห้าและสุดท้าย 100 , 10 , 1 , 0.1 และ 0.01m/ml .
30 [ 0082 ] 2 การเตรียมการทดสอบสาร ( รงควัตถุสีแดงแบบผลึกเตรียม
ตัวอย่าง 1 )
รงควัตถุสีแดงแบบผลึกเตรียมไว้ในตัวอย่างที่ 1 ละลาย 100%
เต๊ะ ( DMSO ) และเจือจางด้วยน้ำกลั่นฆ่าเชื้อเพื่อขอรับ
สารละลาย S 1 , 10 , 100 , 1000 และ 100004ml 40 % DMSO . การสารละลาย 2
3 จำนวน 100 พับกับอาหารเลี้ยงเชื้อเพื่อสร้างความเข้มข้นสุดท้าย 0.01 , 0.1 , 1 และ 10
100 / มล.

[ 0083 ] 3 .วิธีวัฒนธรรมของหลอดเลือดดำสายสะดือมนุษย์ ( เพิ่ )
เพิ่ซื้อมาจากประเภทคอลเลกชันวัฒนธรรมอเมริกัน ( ATCC
crl-1730 ) เซลล์ก็เพิ่ ) 5% CO2 ในบรรยากาศที่อุณหภูมิ 37 องศา C .
สื่อวัฒนธรรมใช้เป็นเยื่อบุเซลล์ การเจริญเติบโต อาหารสูตร MS ที่เสริมด้วยเครื่อง / V 5 ซีรั่มวัวของทารกในครรภ์และ 1% ในยาปฏิชีวนะ .
[ กระดาษ ] 4 สารเคมี : สารต้านเชื้อรายาปฏิชีวนะ ( gibco BRL , USA )ไดเมทิลซัลฟอกไซด์
( Merck , เยอรมัน ) , เซลล์เยื่อบุเจริญ ( กลางงานเซลล์ USA ) ของทารกในครรภ์ และ เซรั่ม ( hyclone , USA ) , matrigel เมทริกซ์ ( BD BIOSCIENCES , USA ) และซูรามิน ( Sigma , USA ) .
10 [ 0085 ] 5 . อุปกรณ์และเครื่องมือ
96 microwell วัฒนธรรมจาน ( ขณะนี้ สหรัฐอเมริกา ) ซึ่ง 5810r ( เพนดอร์ฟ , เยอรมนี ) , กล้อง ดิจิตอล ( Nikon , ญี่ปุ่น ) , hematocytometer ( ด้านวิทยาศาสตร์ hausser USA )กล้องจุลทรรศน์หัวก ck-40 ( Olympus , ญี่ปุ่น ) , ระบบ e-400 กล้องจุลทรรศน์ Nikon , ญี่ปุ่น ) และคณะรัฐมนตรีด้านความปลอดภัยทางชีวภาพ ( nuaire , USA )
5 [ เป็น ] 6 . วิธี
matrigel เมทริกซ์ถูกละลาย เก็บไว้ในที่เย็นที่อุณหภูมิ 4 องศา C และ 541 ของเมทริกซ์ถูกย้ายกันของวัฒนธรรม microwell 96 แผ่นจานบ่มที่ 37 ° C เป็นเวลาอย่างน้อยหนึ่งชั่วโมงเพื่อให้เมทริกซ์สารละลายแข็งก่อนการรักษา 0087
[ ] เฉยๆปี 2548 เพิ่ระงับ ( ประมาณ 1.5 x 104cells / ดี ) อายุ 20 อยู่ในดี matrigel 96 แผ่น สองตัวเลขต่อด้วยการทดสอบสาร
สารละลายหรือยานพาหนะ ( 40% DMSO ) จากนั้นเพิ่ม CO2 บ่มที่ 37 ° C 5 %
18 ชั่วโมง ( ซ้ำ )ความเข้มข้นสุดท้ายของ DMSO เป็น 0.4% แบบทดสอบประเมินอยู่
ผสมความเข้มข้น 100 , 10 , 1 , 0.1 และ 0.014ml ที่
จบระยะเวลาท่อเครือข่ายที่เกิดจากเยื่อบุเซลล์ในแต่ละบ่อ
25 photomicroscopy ( ประเมินโดยการขยายของ 40 x ) และถ่ายภาพ ความยาวทั้งหมดของท่อ
เครือข่ายวัดจากแต่ละภาพ ( รูปที่ 1 )
[ 0088 ] ลดความยาวทั้งหมดของท่อเครือข่ายในการรักษาสารทดสอบ

ความยาวทั้งหมดของท่อเครือข่ายในการควบคุมการรักษายานพาหนะแสดงกิจกรรมต่อต้าน angiogenic

ความเข้มข้นต่ำสุดที่ยับยั้ง ( MIC ) และ 50% inhibition
30 ความเข้มข้น ( ic50 ) ได้รับการพิจารณาเพื่อประเมินผลของการทดสอบสาร anti - การสร้างหลอดเลือดใหม่
.
[ 0089 ] แกรนท์ดีเอส คินเซลลา fridman J.L . , , , , auerbach R . R . , Piasecki , ศศ.บ. , ยามาดะ , Y .
, et al . ปฏิสัมพันธ์ของเยื่อบุเซลล์กับลามินินโซ่เปปไทด์ ( sikvav ) ในหลอดทดลอง
induction พฤติกรรม angiogenetic ในสิ่งมีชีวิต เจเซลล์ physio1.153:614-625 , 2535 .
3 belotti , D Vergani , วี drudis ต. borsotti , หน้า pitelli ม.ร.ว. , Viale G , , ,
taraboletti และ giavazzi , R , G .ส่วนไมโครทูบูลมีผลต่อยาชนิดมีกิจกรรม antiangiogeneic


สำหรับ . มะเร็ง 2:1843-1849 ศาสตร์ , 2539 .
[ 0090 ] 7 . ผล
รงควัตถุสีแดงแบบผลึกของการประดิษฐ์นี้ที่ 100ug / ml ) สารสำคัญของการประกอบขึ้นของหลอด
เมื่อเทียบกับรถปฏิบัติควบคุม 5 มาตรฐานอ้างอิงที่ใช้ซูรามิน , ,สามารถแสดงผลการยับยั้งที่ระดับ 30 และ
15rm ( ตารางที่ 2 รูป S 1 และ 2 ) ค่า ic50 ถูกแสดงในตารางที่ 3
[ ] การประกอบขึ้นของหลอดก็ทําการยับยั้งของรงควัตถุสีแดงของผลปาล์มใบเลื่อย
รักษาต่อการยับยั้งความยาวท่อรวมชื่อ % ( หมายถึง± SEM )
) ( TG / ml )
# 1151525 368000 PT ,