SummaryMice carrying mutations in m

Summary
Mice carrying mutations in multiple genes are traditionally generated by sequential recombination in embryonic stem cells and/or time-consuming intercrossing of mice with a single mutation. The CRISPR/Cas system has been adapted as an efficient gene-targeting technology with the potential for multiplexed genome editing. We demonstrate that CRISPR/Cas-mediated gene editing allows the simultaneous disruption of five genes (Tet1, 2, 3, Sry, Uty - 8 alleles) in mouse embryonic stem (ES) cells with high efficiency. Coinjection of Cas9 mRNA and single-guide RNAs (sgRNAs) targeting Tet1 and Tet2 into zygotes generated mice with biallelic mutations in both genes with an efficiency of 80%. Finally, we show that coinjection of Cas9 mRNA/sgRNAs with mutant oligos generated precise point mutations simultaneously in two target genes. Thus, the CRISPR/Cas system allows the one-step generation of animals carrying mutations in multiple genes, an approach that will greatly accelerate the in vivo study of functionally redundant genes and of epistatic gene interactions.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

หนู
สรุปการดำเนินการกลายพันธุ์ในยีนหลายหน้าถูกสร้างตามธรรมเนียมรวมตัวกันอีกลำดับในเซลล์ต้นกำเนิดจากตัวอ่อนและ / หรือ intercrossing ใช้เวลานานในหนูที่มีการกลายพันธุ์เดียว ระบบ crispr / CAS ได้รับการดัดแปลงเป็นเทคโนโลยีที่ถ่ายทอดทางพันธุกรรมการกำหนดเป้​​าหมายที่มีประสิทธิภาพที่มีศักยภาพสำหรับการแก้ไข multiplexed จีโนมเราแสดงให้เห็นว่าการแก้ไขยีน crispr / CAS-mediated ที่ช่วยให้เกิดการหยุดชะงักพร้อมกันในห้าของยีน (tet1, 2, 3, sry, uty - 8 อัลลีล) ในเมาส์ตัวอ่อนเซลล์ต้นกำเนิด (e) มีประสิทธิภาพสูง RNAs coinjection ของ cas9 mRNA และคู่มือเดียว (sgrnas) tet1 การกำหนดเป้​​าหมายและ tet2 เป็นหนูที่สร้าง zygotes กับการกลายพันธุ์ในยีน biallelic ทั้งสองได้อย่างมีประสิทธิภาพ 80% ในที่สุด,เราจะแสดง coinjection ของ cas9 mRNA / sgrnas ว่าด้วยความ oligos กลายพันธุ์ที่เกิดการกลายพันธุ์จุดได้อย่างแม่นยำพร้อมกันในสองยีนเป้าหมาย จึง crispr / CAS ระบบช่วยให้คนรุ่นหนึ่งขั้นตอนการดำเนินการของสัตว์กลายพันธุ์ในยีนหลายวิธีที่จะช่วยเร่งความเร็วในการศึกษาร่างกายของยีนที่ซ้ำซ้อนและหน้าที่ของยีนปฏิสัมพันธ์ epistatic

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สรุป
หนูดำเนินการกลายพันธุ์ในยีนหลายซึ่งสร้างขึ้น โดย recombination ลำดับในเซลล์ต้นกำเนิดตัวอ่อน หรือเวลา intercrossing ของหนูกับการกลายพันธุ์เดียวกัน ระบบ CRISPR/Cas ได้รับการดัดแปลงเป็นมีประสิทธิภาพยีนเป้าหมายเทคโนโลยีมีศักยภาพสำหรับการแก้ไขกลุ่ม multiplexed เราแสดงให้เห็นว่า CRISPR/Cas-mediated ยีนแก้ไขช่วยทีมพร้อมของห้า (Tet1, 2, 3, Sry, Uty - 8 alleles) เมาส์ (ES) ตัวอ่อนสเต็มเซลล์ มีประสิทธิภาพสูง Coinjection Cas9 mRNA และ RNAs เดียวแนะนำ (sgRNAs) กำหนดเป้าหมาย Tet1 และ Tet2 เป็น zygotes สร้างหนู ด้วย biallelic กลายพันธุ์ในยีนทั้งสองกับมีประสิทธิภาพ 80% สุดท้าย เราแสดงที่ coinjection mRNA Cas9/sgRNAs ด้วยกลายพันธุ์จุดแม่นยำ oligos กลายพันธุ์ที่สร้างพร้อมกันในสองยีนเป้าหมาย ดังนั้น ระบบ CRISPR/Cas ได้ขั้นตอนเดียวการสร้างสัตว์ดำเนินการกลายพันธุ์ในยีนหลาย วิธีการที่จะเร่งการศึกษาในสัตว์ทดลองที่ซ้ำซ้อนฟังก์ชันยีน และยีน epistatic โต้ตอบอย่างมาก

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เมาส์สรุป
และกระเป๋าสำหรับพกพาเข้าไปเปลี่ยนแปลงรหัสในยีนหลายคนอยู่ในแบบดั้งเดิมสร้างขึ้นโดย recombination แบบต่อเนื่องเป็นลำดับในเซลล์ต้นกำเนิดจากตัวอ่อนมาร์คและ/หรือ intercrossing ใช้เวลาของหนูด้วยคือมันตัวเดียว ระบบ/ CA crispr ที่ได้รับการดัดแปลงเป็นเทคโนโลยีพันธุวิศวกรรม - เป้าหมายอย่างมี ประสิทธิภาพ ที่มี ศักยภาพ สำหรับ - multiplexed ยีนการแก้ไขเราจะแสดงให้เห็นว่าการแก้ไข crispr ยีน/ CA ดีงามทำให้เกิดการรบกวนพร้อมกันที่ห้าแยกยีน( TET 123 sry uty - 8 alleles )ในก้านก่อหวอด/เมาส์(สเปน)เซลล์ด้วย ประสิทธิภาพ สูง coinjection ของ CA 9 mrna และ single - มัคคุเทศก์ rnas ( sgrnas )โดยมุ่งเป้าหมาย TET 1 และ TET 2 เข้าสู่ zygotes สร้างขึ้นด้วยเมาส์เข้าไปเปลี่ยนแปลงรหัสในยีน biallelic ทั้งสองพร้อมด้วย ประสิทธิภาพ ของ 80% ในที่สุดเราแสดงให้เห็นว่า coinjection ของ sgrnas 9 mrna / CA พร้อมด้วย oligos mutant สร้างขึ้นเข้าไปเปลี่ยนแปลงรหัสจุดได้อย่างแม่นยำได้พร้อมกันในสองยีนเป้าหมาย ด้วยเหตุนี้ระบบ/ CA crispr ที่ช่วยให้คนรุ่นหนึ่ง - ขั้นตอนการสัตว์และกระเป๋าสำหรับพกพาเข้าไปเปลี่ยนแปลงรหัสในยีนหลายวิธีการที่จะเร่งความเร็วในการศึกษาไปยังสถานี Vivo ของยีนสำรองอย่างเต็มไปด้วยประโยชน์ใช้สอยและการมีปฏิสัมพันธ์ epistatic ยีนเป็นอย่างมาก