All steps of purification were perf

All steps of purification were performed at 4°C. After elution from the column, protein fractions were concentrated to
a final concentration of 12 μg/ml and analyzed by Western blot analysis with anti-c-Myc IgG antibodies (Sigma). For some of the planar lipid bilayer experiments, in order to improve the stability of the artificial membranes with the incorporated protein, we also purified TRPM8 from the TRPM8-his stable cell line. This modification allowed us to include into the procedure described above an additional step of purification with ion-affinity chromatography using Ni-NTA beads (Qiagen).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ดำเนินทุกขั้นตอนของการทำให้บริสุทธิ์ที่ 4 องศาเซลเซียส หลังจาก elution จากคอลัมน์ เศษโปรตีนเข้มข้นไป เข้มข้นสุดท้ายของ μg 12 ml และวิเคราะห์ โดยการวิเคราะห์คืนในตาตะวันตกด้วยแอนตี้ IgG anti-c-Myc (ซิกมา) สำหรับบางคนการทดลอง bilayer ไขมันระนาบ เพื่อปรับปรุงเสถียรภาพของสารเทียมกับโปรตีนเรท เรายังบริสุทธิ์ TRPM8 ต้นเซลล์ TRPM8 ของพระองค์มั่นคง การแก้ไขนี้ได้ให้รวมไว้ในขั้นตอนที่อธิบายไว้ข้างต้นมีขั้นตอนเพิ่มเติมของฟอก มีความเกี่ยวข้องของไอออน chromatography ใช้ประคำ Ni NTA (Qiagen)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ขั้นตอนของการทำให้บริสุทธิ์ทั้งหมดถูกดำเนินการใน 4 ° C หลังจากชะจากคอลัมน์เศษส่วนโปรตีนมีความเข้มข้นที่จะมีความเข้มข้นสุดท้ายของ 12 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรและวิเคราะห์โดยการวิเคราะห์ดวงตะวันที่มีแอนติบอดีต่อต้านค-Myc IgG (ซิกม่า)
สำหรับบางส่วนของการทดลองไขมัน bilayer ระนาบในการสั่งซื้อเพื่อปรับปรุงเสถียรภาพของเยื่อเทียมที่มีโปรตีนรวมเรายังบริสุทธิ์ TRPM8 จากเส้น TRPM8 มือถือของเขาที่มีเสถียรภาพ ปรับเปลี่ยนนี้ให้เราสามารถรวมเข้าไปในขั้นตอนที่อธิบายข้างต้นขั้นตอนเพิ่มเติมของการทำให้บริสุทธิ์ด้วยสารไอออนความสัมพันธ์โดยใช้ลูกปัด Ni-NTA (Qiagen)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ทุกขั้นตอนของการฟอกที่ 4 องศา หลังจากการชะจากคอลัมน์เศษส่วนโปรตีนเข้มข้น

มีความเข้มข้นสุดท้าย 12 μ g / ml และ Western blot โดยใช้การวิเคราะห์ด้วย anti-c-myc IgG ( Sigma ) สำหรับบางส่วนของระนาบ bilayer ไขมันการทดลองเพื่อปรับปรุงเสถียรภาพของเยื่อเทียมที่มีส่วนประกอบของโปรตีนนอกจากนี้เรายังสามารถ trpm8 จาก trpm8 Cell มั่นคงของเขา การปรับเปลี่ยนนี้จะให้เรารวมเป็นขั้นตอนที่อธิบายข้างต้นขั้นตอนเพิ่มเติมของบริสุทธิ์ด้วยโครมาโตกราฟีไอออนสามารถใช้ลูกปัด NTA นิ

( เพิ่ม )