2.7. Mushroom tyrosinase activity d

2.7. Mushroom tyrosinase activity determination
The mushroom tyrosinase was used for the bioassay. The tyros- inase inhibitory activity was determined with the degree of inhibi- tion on tyrosinase-catalysed oxidation of L-DOPA (Chu, Wang, & Duh, 2009) Diphenolase inhibitory activity was determined by measuring the dopachrome accumulation at 475 nm using spectro- photometer. All the experiments were performed in 25 mM so dium phosphate buffer (pH 6.8). The reaction mixture consisting of 0.1 ml of samples, 0.1 ml of mushroom tyrosinase (1000 Unitsl ml) and L-DOPA (3.8 mM) was added in this order to read the absorbance at 475 nm for 5 min. The reaction was performed at 25 °C. The value in the absence of samples was represented as the control. The inhibition of tyrosinase activity was calculated with the following formula: Inhibition a (1 47s in sam- pleoD47s in control)) x 100%. For determination of inhibition type, various concentrations of L-DOPA as the substrate, the tyrosinase inhibitory activity was measured according to the method de- scribed above. Inhibitory kinetics of samples was analysed by Lineweaver-Burk plots. The kinetic data were plotted as 1Jactivity (1/) versus 1/substrate concentration (1/S) according to the method of Lineweaver-Burk, and the Michaelis-Menten constant (Km) and maximum velocity (Vmax) were determined with variable substrate concentrations in the standard reaction mixture.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.7. เห็ดเนสมากิจกรรมกำหนด ใช้สำหรับการ bioassay เนสมาเห็ด กำหนดกิจกรรมการยับยั้ง tyros เห็น ด้วยปริญญา inhibi-ทางการค้าบน catalysed เนสมาออกซิเดชันของ L-DOPA (ชู วัง และ Duh, 2009) Diphenolase ยับยั้งกิจกรรมที่ถูกกำหนด โดยการวัดการสะสม dopachrome ที่ 475 nm ใช้โตโฟโตเครื่องวัดความสว่าง การทดลองดำเนินการใน 25 มม.ดังนั้น dium ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.8) ผสมปฏิกิริยาประกอบด้วย 0.1 มล.ของตัวอย่าง 0.1 มล.เนสมาเห็ด (1000 มล Unitsl) และ L-DOPA (3.8 มม.) ถูกเพิ่มเข้าในใบสั่งนี้อ่านค่าที่ 475 nm สำหรับ 5 นาที ทำปฏิกิริยาที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียส รับการแสดงค่าของตัวอย่างเป็นการควบคุม การยับยั้งกิจกรรมเนสมาคำนวณ ด้วยสูตรต่อไปนี้: การยับยั้ง (1 47s ใน sam pleoD47s ควบคุม)) x 100% สำหรับการยับยั้งชนิด ความเข้มข้นต่าง ๆ ของ L-DOPA เป็นพื้นผิว การกำหนดกิจกรรมการยับยั้งไทโรซิเนสที่วัดตามวิธีเด-scribed ข้างต้น จลนพลศาสตร์การยับยั้งอย่างถูกวิเคราะห์ โดย Lineweaver Burk ผืน ข้อมูลการเคลื่อนไหวถูกพล็อตเป็น 1Jactivity (1 /) เมื่อเทียบกับความเข้มข้น 1/พื้น ผิว (1/S) ตามวิธีการของ Lineweaver Burk, Michaelis-Menten คง (กม.) และความเร็วสูงสุด (Vmax) ดำเนินการ ด้วยความเข้มข้นของสารตั้งต้นตัวแปรในผสมปฏิกิริยามาตรฐาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.7 กิจกรรมเอนไซม์ tyrosinase เห็ดมุ่งมั่น
ไทโรซิเนเห็ดที่ใช้สำหรับการทดสอบฤทธิ์ทางชีวภาพ tyros- inase ยับยั้งถูกกำหนดที่มีระดับของการ inhibi- ในการเกิดออกซิเดชัน tyrosinase-ตัวเร่งปฏิกิริยาของ L-DOPA (บุญชูวังและดุจ 2009) Diphenolase ยับยั้งถูกกำหนดโดยการวัดการสะสม dopachrome ที่ 475 นาโนเมตรโดยใช้ spectro- มาตรวัด การทดลองทั้งหมดถูกดำเนินการใน 25 มมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ dium ดังนั้น (pH 6.8) ผสมปฏิกิริยาประกอบด้วย 0.1 มิลลิลิตรตัวอย่าง 0.1 มิลลิลิตรเห็ด tyrosinase (1000 Unitsl มล.) และ L-DOPA (3.8 มิลลิเมตร) ถูกเพิ่มเข้ามาในการสั่งซื้อนี้เพื่ออ่านดูดกลืนแสงที่ 475 นาโนเมตรเป็นเวลา 5 นาที ปฏิกิริยาที่ได้ดำเนินการที่ 25 ° C คุ้มค่าในตัวตนของกลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการแสดงเป็นตัวควบคุม การยับยั้งกิจกรรมของเอนไซม์ tyrosinase ที่คำนวณได้จากสูตรดังต่อไปนี้: การยับยั้ง A (1 47s ใน pleoD47s ตัวอย่างทดสอบไว้ในการควบคุม)) x 100% สำหรับการกำหนดประเภทการยับยั้งความเข้มข้นต่างๆของ L-DOPA เป็นสารตั้งต้นที่ยับยั้งเอนไซม์ tyrosinase วัดตามวิธีการกล่าวไว้ข้างต้น จลนศาสตร์การยับยั้งของกลุ่มตัวอย่างได้รับการวิเคราะห์โดยการแปลง Lineweaver-Burk ข้อมูลเกี่ยวกับการเคลื่อนไหวที่ถูกพล็อตเป็น 1Jactivity (1 /) เมื่อเทียบกับ 1 ความเข้มข้นของสาร / (1 / S) ตามวิธีการของ Lineweaver-Burk และคง Michaelis-Menten (กิโลเมตร) และความเร็วสูงสุด (Vmax) ถูกกำหนดด้วยสารตั้งต้นตัวแปร ความเข้มข้นในผสมปฏิกิริยามาตรฐาน