connected to an open-flow gas excha

connected to an open-flow gas exchange measurement
system that allowed the application of a mixture of N2/O2
(80/20, v/v) to the root/nodule compartment. A gas flow of
200 mL min-1 (about 1.2 vols min-1) was applied to the
root compartment. A sub-sample (100 mL min-1) of the
out-flowed gas was taken, dried (ice trap and MgClO4) and
passed through an H2 analyser (S121 Hydrogen analyser,
Qubit Systems, Canada). When a stable H2 outflow from
the root/nodule compartment was reached, this value was
taken as the apparent nitrogenase activity (ANA). The
amount of fixed nitrogen per time and per plant was calculated on the basis of the ANA measurements (Schulze
et al. 2006). H2 evolution was measured at 0, 5, 10 and
15 days after imposition of drought stress.
Dry matter determination
The plants were divided into shoots, roots and nodules,
oven dried for 3 days at 70C, and dry weight of the
matters was calculated.
Preparation of enzyme extracts
Extracts were prepared by homogenizing 0.1 g of fresh
nodules in a mortar with 1.5 mL of ice cold 50 mM
potassium phosphate buffer (pH 7.8) containing 0.1 mM
EDTA, 1 mM PMSF as a protease inhibitor and 10% (w/w)
PVP. Extracts were centrifuged at 13,000g for 20 min and
the supernatant was used to determine antioxidant enzyme
activities. Protein content was measured according to the
Bradford method (Bradford 1976).
Enzyme assays
Peroxidase (POX, EC 1.11.1.7) activity was determined by
monitoring the formation of tetraguaiacol from guaiacol at
470 nm (e = 26.6 mM-1 cm-1). The reaction mixture
contained 100 mM potassium phosphate buffer (pH 7.0),
20.1 mM guaiacol, 12.3 mM H2O2, and enzyme extract in
a 1 mL volume (Bergmeyer 1974).
Catalase (CAT, EC 1.11.1.6) activity was assayed by
following the reduction of H2O2 (e = 39.4 mM-1 cm-1) at
240 nm according to the method of Aebi (1984). One unit
of CAT was defined as 1 lmo1 H2O2 consumed per milliliter per minute.
Ascorbate peroxidase (APX, EC 1.11.1.11) activity was
measured according to Nakano and Asada (1981) by
recording the decrease in ascorbate (ASC) content at
290 nm (e = 2.8 mM-1 cm-1), as ascorbate was oxidized.
The reaction mixture contained 50 mM potassium phosphate, pH 7.0, 0.5 mM ascorbate (ASC), 0.1 mM hydrogen
peroxide and 0.1 mM EDTA in a total volume of 1 mL.
The reaction was initiated by adding appropriate enzyme

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เชื่อมต่อกับวัดการแลกเปลี่ยนก๊าซไหลเปิดระบบที่อนุญาตให้โปรแกรมประยุกต์ส่วนผสมของ N2/O2(80/20, v/v) ที่ช่อง ราก/nodule การไหลก๊าซของนาที 200 มล. 1 (นาที vols ประมาณ 1.2-1) กับการช่องราก ตัวอย่างย่อย (100 มล.นาที-1) ของการแก๊สร้อนอบออกถ่าย แห้ง (กับดักน้ำแข็งและ MgClO4) และผ่านการวิเคราะห์ H2 (ไฮโดรเจน S121 วิเคราะห์Qubit ระบบ แคนาดา) เมื่อ H2 ที่มั่นคงไปจากแล้วช่อง ราก/nodule ค่านี้นำมาเป็นกิจกรรม nitrogenase ชัดเจน (ANA) การจำนวนของไนโตรเจนถาวร ต่อครั้ง และ ต่อพืชถูกคำนวณบนพื้นฐานของการวัด ANA (ชูลซ์et al. 2006) วิวัฒนาการ H2 โดยวัดที่ 0, 5, 10 และ15 วันหลังจากการจัดเก็บภาษีจากปัญหาภัยแล้งกำหนดเรื่องแห้งพืชแบ่งหน่อ ราก และ ก้อนเตาอบแห้ง 3 วันที่ 70 C แห้ง และน้ำหนักของการเรื่องที่คำนวณการเตรียมสารสกัดจากเอนไซม์สารสกัดที่เตรียม โดย homogenizing 0.1 กรัมสดก้อนในครกกับ 1.5 mL ของน้ำแข็งเย็น 50 มม.โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.8) ที่ประกอบด้วย 0.1 mMEDTA, PMSF 1 มม.เป็นยับยั้งน้ำย่อยและ 10% (w/w)PVP สารสกัดได้จากที่ 13,000g 20 นาที และsupernatant ที่ใช้ในการตรวจสอบเอนไซม์สารต้านอนุมูลอิสระกิจกรรม โดยวัดปริมาณโปรตีนตามวิธีแบรดฟอร์ด (แบรดฟอร์ด 1976)เอนไซม์ assaysกำหนดกิจกรรมฮอส (อีสุกอีใส EC 1.11.1.7) โดยการตรวจสอบการก่อตัวของ tetraguaiacol จาก guaiacol ที่470 nm (e = 26.6 มม.-1 ซม.-1) ส่วนผสมของปฏิกิริยามีอยู่ 100 mM โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0),สารสกัดจาก guaiacol 20.1 มม. 12.3 มม. H2O2 และเอนไซม์ในปริมาตร 1 มิลลิลิตร (Bergmeyer 1974)กิจกรรมคา (แมว EC 1.11.1.6) ถูก assayed โดยต่อการลดลงของ H2O2 (e = 39.4 มม.-1 ซม.-1) ที่240 nm ตามวิธีการของ Aebi (1984) หนึ่งหน่วยของแมวถูกกำหนดเป็น 1 lmo1 H2O2 บริโภคต่อมิลลิเมตรต่อนาทีแก้ไขกิจกรรม ascorbate ฮอส (APX, EC 1.11.1.11)โดยวัดตามนากาโนะและ Asada (1981)บันทึกเนื้อหา ascorbate (ASC) ที่ลดลง290 nm (e = 2.8 มม.-1 ซม.-1), เป็น ascorbate ถูกออกซิไดซ์ส่วนผสมของปฏิกิริยาอยู่ฟอสเฟตโพแทสเซียม 50 มม. 0.5 มม. ascorbate (ASC) ค่า pH 7.0 ไฮโดรเจน 0.1 mMไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์และ 0.1 mM EDTA เป็นปริมาณรวมของ 1 มล.จุดเริ่มต้นของปฏิกิริยา ด้วยการเพิ่มเอนไซม์ที่เหมาะสม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เชื่อมต่อกับเปิดการไหลของการวัดการแลกเปลี่ยนก๊าซ
ของระบบที่ได้รับอนุญาตการประยุกต์ใช้เป็นส่วนผสมของ N2 / O2
(80/20, v / v) ไปที่ราก / ช่องโหนก การไหลของก๊าซ
200 มลนาที-1 (ประมาณ 1.2 โวส์นาที 1) ถูกนำไปใช้กับ
ช่องราก ย่อยตัวอย่าง (100 มลนาที-1) ของ
ออกไหลก๊าซที่ถูกนำมาตากแห้ง (กับดักน้ำแข็งและ MgClO4) และ
ผ่านการวิเคราะห์ H2 (S121 วิเคราะห์ไฮโดรเจน
Qubit Systems, แคนาดา) เมื่อมีการไหลออก H2 มีเสถียรภาพจาก
ช่องราก / โหนกถึงค่านี้ถูก
นำมาเป็นกิจกรรมไนโตชัดเจน (ANA)
ปริมาณของไนโตรเจนคงที่ต่อเวลาและต่อต้นได้รับการคำนวณบนพื้นฐานของการวัดอานา (ชูลซ์
et al. 2006) วิวัฒนาการ H2 วัดที่ 0, 5, 10 และ
15 วันหลังจากการจัดเก็บภาษีของความเครียดภัยแล้ง.
มุ่งมั่นแห้ง
พืชที่ถูกแบ่งออกเป็นหน่อรากและก้อน,
อบแห้งเป็นเวลา 3 วันที่ 70 องศาเซลเซียสและน้ำหนักแห้งของ
เรื่องก็คือ คำนวณ.
เตรียมเอนไซม์สารสกัดจาก
สารสกัดถูกจัดทำขึ้นโดยการผสมยาง 0.1 กรัมของสด
ก้อนในครกกับ 1.5 มลเย็นขนาด 50 มม
บัฟเฟอร์โพแทสเซียมฟอสเฟต (pH 7.8) ที่มี 0.1 มิลลิ
EDTA 1 มิ PMSF เป็นน้ำย่อยยับยั้งและ 10% ( w / w)
PVP สารสกัดถูกหมุนเหวี่ยงที่ 13,000g สำหรับ 20 นาทีและ
สารละลายที่ใช้ในการตรวจสอบการทำงานของเอนไซม์สารต้านอนุมูลอิสระ
กิจกรรม ปริมาณโปรตีนวัดตาม
แบรดฟอวิธี (แบรด 1976).
เอนไซม์ตรวจ
เปอร์ออกซิเด (โรคฝี EC 1.11.1.7) กิจกรรมที่ถูกกำหนดโดย
การตรวจสอบการก่อตัวของ tetraguaiacol จาก guaiacol ที่
470 นาโนเมตร (E = 26.6 MM-1 ซม-1) . ผสมปฏิกิริยา
ที่มีอยู่ 100 มิลลิเมตรบัฟเฟอร์โพแทสเซียมฟอสเฟต (pH 7.0)
20.1 มิลลิ guaiacol 12.3 มิลลิ H2O2 และสารสกัดจากเอนไซม์ใน
ปริมาณมล 1 (Bergmeyer 1974).
Catalase (กสท EC 1.11.1.6) กิจกรรมที่ได้รับการวิเคราะห์โดยการ
ดังต่อไปนี้ การลดลงของ H2O2 (E = 39.4 mM-1 ซม-1) ที่
240 นาโนเมตรตามวิธีการของ Aebi นี้ (1984) หนึ่งหน่วย
ของกสท. ได้รับการกำหนดให้เป็น 1 H2O2 lmo1 บริโภคต่อมิลลิลิตรต่อนาที.
วิตามินซี peroxidase (APX, EC 1.11.1.11) กิจกรรมที่ได้รับการ
วัดตาม Nakano และอัษฎา (1981) โดย
บันทึกการลดลงของ ascorbate (ASC) เนื้อหาที่
290 นาโนเมตร (E = 2.8 mM-1 ซม-1) เป็น ascorbate ถูกออกซิไดซ์.
ผสมปฏิกิริยาที่มีขนาด 50 มมโพแทสเซียมฟอสเฟตพีเอช 7.0, 0.5 มิลลิ ascorbate (ASC) 0.1 มิลลิไฮโดรเจน
เปอร์ออกไซด์และ 0.1 มิลลิ EDTA ในปริมาณรวมของ 1 มล.
ปฏิกิริยาได้ริเริ่มขึ้นโดยการเพิ่มเอนไซม์ที่เหมาะสม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เชื่อมต่อกับกระแสการเปิดการวัดการแลกเปลี่ยนก๊าซระบบที่อนุญาตให้ใช้เป็นส่วนผสมของ N2 / ทู( 80 / 20 v / v ) กับ รากปม ช่อง . อัตราการไหลของแก๊สmin-1 200 ml ( ประมาณ 1 ปี min-1 ) คือใช้กับส่วนราก ย่อยตัวอย่าง ( 100 ml min-1 ) ของออกไหลแก๊สถ่ายแห้ง ( กับดักน้ำแข็งและ mgclo4 ) และผ่านการชำแหละเครื่อง s121 ไฮโดรเจน ( H2 ,ระบบ qubit , แคนาดา ) เมื่อมีการรั่วไหลจาก H2ราก / ปม ช่องครบ ราคานี้ถ่ายเป็นกิจกรรมไนโตรจีเนสที่ชัดเจน ( ANA ) ที่ปริมาณไนโตรเจนคงที่ต่อครั้งและต่อพืชถูกคำนวณบนพื้นฐานของการวัดอานา ( ชูลซ์et al . 2006 ) วิวัฒนาการ H2 ถูกวัดที่ 0 , 5 , 10 และ15 วัน หลังจากกำหนดภาวะแล้ง .ปริมาณวัตถุแห้งพืชแบ่งเป็นยอดและราก nodules ,เตาอบแห้ง 3 วันใน 70c และน้ำหนักแห้งของที่สำคัญคือการคํานวณการเตรียมสารสกัดเอนไซม์สารสกัดที่เตรียมได้จากการเติม 0.1 กรัม สดปมในครก 1.5 ml เย็น 50 มม.โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.8 ) ที่มี 0.1 มม.1 mM PMSF และ EDTA , ยับยั้ง protease และ 10 % ( w / w )พีวีพี แยกเป็นระดับที่ 13000g เป็นเวลา 20 นาทีและน่านศึกษาสารต้านอนุมูลอิสระเอนไซม์กิจกรรม โปรตีนวัดไปตามแบรดฟอร์ดวิธี Bradford 1976 )ตรวจเอนไซม์เปอร์ออกซิเดส ( pox , EC 1.11.1.7 ) กิจกรรมที่ถูกกำหนดโดยการก่อตัวของ tetraguaiacol จากไดที่470 nm ( E = 15 mm-1 cm-1 ) ปฏิกิริยาผสมที่มีอยู่ 100 มิลลิโมลาร์โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.0 )ได 20.1 มม. H2O2 12.3 มม. และเอนไซม์ที่สกัดในปริมาณ 1 ml ( 1974 bergmeyer )คะตะเลส ( แมว , EC 1.11.1.6 ) กิจกรรมถูก assayed โดยต่อไปนี้การลดลงของแบต ( E = 39.4 mm-1 cm-1 )240 nm ตามวิธีการของ aebi ( 1984 ) หนึ่งหน่วยแมวถูกกำหนดเป็น 1 lmo1 H2O2 ใช้ต่อมิลลิลิตรต่อนาทีascorbate peroxidase ( APX , EC 1.11.1.11 ) กิจกรรมวัดจากนากาโนะ และอาซาดะ ( 1981 ) โดยบันทึกการเปลี่ยนแปลง ( ASC ) เนื้อหาที่290 nm ( E = 2.8 mm-1 cm-1 ) เป็นชาก็จะถูกออกซิไดซ์ .ปฏิกิริยาระหว่างฟอสเฟตโพแทสเซียมที่มีอยู่ , 50 มิลลิโมลาร์ pH 7.0 , 0.5 มม. ascorbate ( ASC ) , 0.1 มิลลิเมตร ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ 0.1 mM EDTA ในปริมาตร 1 มิลลิลิตรปฏิกิริยาที่ถูกริเริ่มโดยการเพิ่มเอนไซม์ที่เหมาะสม