To prevent the rapid RBC shrinkage

To prevent the rapid RBC shrinkage which would otherwise occur following maximal stimulation of the Gardos channel in experiments inwhich intracellular Ca2+ was directly raised by incubation with the Ca2+ ionophore
A23187, a high-K+- and low-Ca2+-containing salinewas used, comprising (in mM): 80 KCl, 70 NaCl, 0.01 CaCl2, 0.15 MgCl2, 5 glucose and 10 MOPS. The wash solution to remove unincorporated 86Rb+ comprised isotonic MgCl2 (107 mM), buffered with MOPS (10 mM), pH 7.4 at 4 °C. Stock solutions of bumetanide (10 mM) were prepared in 100 mM Tris base and used at a final concentration of 10 μM. Stock solutions of ouabain (10 mM) were prepared in distilled water and
used at a final concentration of 100 μM. Stocks of clotrimazole (CLT; 5 mM) were prepared in DMSO and used at final concentrations of 5 μM. After washing whole blood and removal of plasma and buffy coat, in most experiments RBC suspensions were placed in tonometers (Eschweiler, Kiel, Germany) at 20% haematocrit (Hct), to equilibrate at the requisite O2 tension. Tonometers were flushed with warm, humidified gas mixtures, supplied at the appropriate O2 tension using a Wösthoff gas mixing pump. For CLT, dissolved in DMSO, appropriate controls were all treated with the same concentration of solvent (b0.1% final).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เพื่อป้องกันการหดตัว RBC อย่างรวดเร็วซึ่งจะเกิดต่อการกระตุ้นสูงสุดของช่อง Gardos ในการทดลองที่ intracellular Ca2 + โดยตรงขึ้น โดยบ่มกับ ionophore Ca2 +A23187 มาก-K + - และต่ำ-Ca2 + -ประกอบด้วย salinewas ใช้ ประกอบด้วย (ใน mM): 80 KCl, 70 NaCl, 0.01 CaCl2, 0.15 MgCl2 กลูโคส 5 และ 10 MOPS โซลูชันการล้างเอา unincorporated 86Rb + ประกอบด้วย isotonic MgCl2 (107 มม), buffered กับ MOPS (10 mM), ค่า pH 7.4 ที่ 4 องศาเซลเซียส โซลูชั่นหุ้นของบูมีทาไนด์ (10 มิลลิเมตร) เตรียมไว้ในฐานข้อมูลทริสเรทติ้ง 100 มม. และใช้ที่ความเข้มข้นสุดท้ายของ 10 μM โซลูชั่น ouabain (10 มิลลิเมตร) ที่หุ้นถูกเตรียมในน้ำกลั่น และใช้ที่ความเข้มข้นสุดท้ายของ 100 μM หุ้นของ clotrimazole (CLT; 5 mM) ถูกเตรียมใน DMSO และใช้ที่ความเข้มข้นสุดท้ายของ 5 μM หลังจากซักผ้าทั้งเลือดและกำจัดของพลาสมาและตรามือใหม่ปราบผี ในการทดลองส่วนใหญ่ RBC พักไว้ใน tonometers (Eschweiler, Kiel เยอรมนี) ที่ 20% haematocrit (Hct), การ equilibrate ที่ความตึงเครียดของ O2 จำเป็น Tonometers ถูกล้าง ด้วยน้ำยาผสมแก๊สอุ่น humidified ให้ที่ความตึงเครียด O2 ที่เหมาะสมที่ใช้แก๊ส Wösthoff ที่ผสมปั๊ม สำหรับ CLT ละลายใน DMSO ควบคุมที่เหมาะสมได้ทั้งหมดรับเดียวกันความเข้มข้นของตัวทำละลาย (b0.1% สุดท้าย)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เพื่อป้องกันการหดตัว RBC อย่างรวดเร็วซึ่งจะเกิดขึ้นต่อไปนี้การกระตุ้นสูงสุดของช่อง Gardos ในการทดลอง inwhich เซลล์ Ca2 + ถูกยกขึ้นโดยตรงจากการบ่มด้วย Ca2 + ionophore
A23187, สูง K + - และต่ำ Ca2 + -containing salinewas ใช้ประกอบไปด้วย (ใน mm): 80 KCl 70 โซเดียมคลอไรด์ 0.01 CaCl2, 0.15 MgCl2, 5 กลูโคสและ 10 MOPS วิธีการแก้ปัญหาล้างเพื่อเอา ​​86Rb หน่วยงาน + ประกอบด้วย isotonic MgCl2 (107 มิลลิเมตร), เป็นกลางกับ MOPS (10 มิลลิเมตร) ค่า pH 7.4 ที่ 4 ° C การแก้ปัญหาสต็อกของ Bumetanide (10 มม) ได้จัดทำขึ้น 100 มิลลิเมตรฐาน Tris และใช้ที่ความเข้มข้นสุดท้ายของ 10 ไมครอน การแก้ปัญหาสต็อกของ ouabain (10 มม) ได้รับการจัดทำขึ้นในน้ำกลั่นและ
นำมาใช้ในความเข้มข้นสุดท้ายของ 100 ไมครอน หุ้นของ clotrimazole (CLT; 5 มิลลิ) ได้จัดทำขึ้น DMSO และใช้ที่ความเข้มข้นสุดท้ายของ 5 ไมครอน หลังจากล้างเลือดและการกำจัดของพลาสม่าและบัฟฟีโค้ในการทดลองมากที่สุดสนอง RBC ถูกวางไว้ใน tonometers (ไวเลอร์, คีล, เยอรมนี) ที่ hematocrit 20% (Hct) เพื่อสมดุลที่จำเป็นตึงเครียด O2 Tonometers ถูกล้างด้วยอบอุ่นก๊าซผสมความชื้นให้มาที่ความตึงเครียด O2 ที่เหมาะสมโดยใช้ก๊าซWösthoffปั๊มผสม สำหรับ CLT, ละลายใน DMSO, การควบคุมที่เหมาะสมได้รับการรักษาทั้งหมดที่มีความเข้มข้นเดียวกันของตัวทำละลาย (b0.1% สุดท้าย)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพื่อป้องกันไม่ให้อย่างรวดเร็ว RBC ซึ่งจะเป็นอย่างอื่นเกิดขึ้นต่อการกระตุ้นการหดตัวสูงสุดของ gardos ช่องทางในการทดลองที่มีแคลเซียมภายในเซลล์โดยตรงเพิ่มขึ้นโดยการบ่มด้วยแคลเซียมไอโอโนฟอร์
a23187 , ไฮ เค - low-ca2 ที่มี salinewas ใช้ประกอบด้วย ( มม. ) : 80 70 NaCl KCl , ผลิตชุด 0.01 0.15 5 กลูโคส และ 10 ม๊อยส์ล้างแก้เอาหน่วยงาน 86rb ประกอบด้วยไอโซโทปไอโซ ( 107 มิลลิเมตร ) , กันชนกับไม้ถูพื้น ( 10 มม. ) , pH 7.4 ที่ 4 องศา หุ้นโซลูชั่นของลูซิอาโน เบคคิโอ ( 10 มม. ) ที่ถูกเตรียมไว้ในฐานจาก 100 มิลลิเมตร และใช้ที่ความเข้มข้นสุดท้าย 10 μม. หุ้นโซลูชั่นของการ ( 10 มม. ) เตรียมในน้ำกลั่นและ
ใช้ที่ความเข้มข้นสุดท้าย 100 เมตรμหุ้นของโคลไตรมาโซล ( CLT ;5 มิลลิเมตร ) เตรียมใน DMSO และใช้ที่ความเข้มข้นสุดท้าย 5 μเมตร หลังจากล้างเลือดและการกำจัดของพลาสมาและบัฟฟี่โคท , ในการทดลองมากที่สุดซึ่งแขวนลอยอยู่ใน tonometers ( ศาสนา คีล , เยอรมนี ) 20 % ฮีมาโตคริต ( Hct ) จะทำให้สมดุลในวิชาบังคับ O2 แรง tonometers ถูกล้างด้วยอบอุ่น humidified ผสมแก๊สจัดที่เหมาะสม O2 แรงใช้ W ö sthoff ก๊าซปั๊มผสม สำหรับ CLT ละลายใน DMSO , การควบคุมที่เหมาะสมทั้งหมดถือว่ามีความเข้มข้นเดียวกันของตัวทำละลาย ( b0.1 % สุดท้าย )